Mécanismes par lesquels Qiang Jing Pian régule la voie de signalisation CDK4/E2F pour retarder le vieillissement des cellules de Leydig et des tissus testiculaires chez le rat

LAN Xiucheng ,  

WANG Meijing ,  

ZHANG Jingyi ,  

LI Junjun ,  

DONG Liang ,  

YU Xujun ,  

YANG Fang ,  

CHANG Degui ,  

摘要

L'objectif est de révéler le mécanisme moléculaire par lequel le comprimé traditionnel chinois Qiang Jing Pian régule le vieillissement des cellules de Leydig et des tissus testiculaires de rats via la voie de signalisation dépendante de la cycline kinase 4/E2F (CDK4/E2F). Pour les expériences cellulaires, des rats mâles SD SPF de 2 mois ont été sélectionnés et répartis au hasard en groupe témoin (administration de solution saline 0,9%) et groupe Qiang Jing Pian (20 rats par groupe). Un modèle de vieillissement des cellules Leydig a été établi en induisant le vieillissement des cellules TM3 avec 100 μmol·L-1 de H2O2, validé par la détection des niveaux de p16 et p21 par Western blot. Le N-acétylcystéine (NAC, 1 mmol·L-1), un antioxydant, a été utilisé comme contrôle positif pour l’élimination des ROS. Les cellules ont été traitées avec des sérums contenant de faibles (2,5%), moyennes (5%) et fortes (10%) concentrations de Qiang Jing Pian. Les niveaux de testostérone dans le surnageant cellulaire ont été mesurés par ELISA, et l’expression protéique de CDK4, E2F1, E2F2 par Western blot. Dans l’étude animale, des rats âgés naturellement de 19 mois ont été utilisés comme modèle, et des rats de 2 mois comme groupe jeune. Le propionate de testostérone (5,21 mg·kg-1·j-1) a servi de contrôle positif, et les groupes Qiang Jing Pian à faible, moyenne et forte dose ont reçu respectivement 0,72, 1,44, 2,88 g·kg-1·j-1 par gavage. L’état général des rats a été observé, et les niveaux protéiques de CDK4, E2F1, E2F2 dans les tissus testiculaires ont été évalués par Western blot. Dans les expériences cellulaires, comparé au groupe normal, l’expression de CDK4 et E2F1 était significativement augmentée (P<0.05) dans le groupe modèle, tandis que E2F2 diminuait légèrement; comparé au groupe modèle, le groupe NAC et la faible dose de Qiang Jing Pian présentaient une augmentation significative de CDK4 (P<0.05), une légère augmentation pour la dose moyenne et une baisse significative pour la dose forte (P<0.05). Dans le groupe NAC, E2F1 diminuait significativement (P<0.05) et E2F2 légèrement; les doses faible, moyenne et forte de Qiang Jing Pian entraînaient des baisses significatives de E2F1 et E2F2 (P<0.05); comparé au groupe NAC, CDK4 augmentait légèrement dans la faible dose et diminuait significativement dans la forte dose (P<0.05), et E2F1 diminuait significativement dans la forte dose (P<0.05), E2F2 diminuait dans toutes les doses (P<0.05). Dans l’étude animale, comparé au groupe jeune, CDK4 diminuait significativement (P<0.05) dans le groupe modèle, tandis que E2F1 et E2F2 augmentaient légèrement; comparé au groupe modèle, le propionate de testostérone et la faible dose de Qiang Jing Pian entraînaient une baisse significative de CDK4 (P<0.05), tandis que les doses moyenne et forte de Qiang Jing Pian augmentaient significativement CDK4, avec une différence statistiquement significative pour la dose moyenne (P<0.05); E2F1 diminuait significativement (P<0.05), et E2F2 augmentait légèrement; comparé au groupe NAC, les doses moyenne et forte de Qiang Jing Pian accroissaient significativement l’expression de CDK4 (P<0.05), la dose moyenne augmentait significativement la protéine E2F1 (P<0.05), et E2F2 diminuait dans tous les groupes Qiang Jing Pian. Conclusion : Qiang Jing Pian améliore le vieillissement des cellules de Leydig et des tissus testiculaires en augmentant l’expression de CDK4 et en inhibant les niveaux de E2F1 et E2F2.

关键词

Qiang Jing Pian vieillissement naturel; cellules interstitielles testiculaires; voie de signalisation cycline kinase 4 / facteur de transcription E2F (CDK4/E2F)

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