Effet de la soupe Huanglian Jiedu sur l'infiltration des neutrophiles dans le cerveau des souris MCAO par régulation de l'expression des chimiokines dans les exosomes

ZHANG Haojia ,  

WANG Kai ,  

SUN Zijin ,  

WANG Chunyu ,  

SHAO Wei ,  

LIU Kunjing ,  

DONG Liyang ,  

CHEN Dan ,  

XU Wenxiu ,  

WANG Chuanzun ,  

WANG Wen ,  

LI Changxiang ,  

WANG Xueqian ,  

CHENG Fafeng ,  

WANG Qingguo ,  

摘要

L'objectif est d'étudier si la soupe Huanglian Jiedu peut inhiber l'infiltration des neutrophiles dans le cerveau de souris atteintes d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne (MCAO) en régulant l'expression des chimiokines associées aux neutrophiles dans les exosomes, afin d'obtenir un effet thérapeutique. Méthode : 130 souris mâles SPF C57BL/6J ont été réparties au hasard en 4 groupes : groupe chirurgie factice, groupe modèle MCAO, groupe soupe Huanglian Jiedu (6 g·kg-1) et groupe Jinnaduo (21,6 mg·kg-1), dont 10 souris dans le groupe Jinnaduo et 40 dans chaque des 3 autres groupes. Les groupes soupe Huanglian Jiedu et Jinnaduo ont reçu quotidiennement par gavage oral un volume de 0,15 mL·(10 g)-1 des substances correspondantes pendant 7 jours consécutifs, tandis que les groupes chirurgie factice et modèle ont reçu la même quantité de solution saline par la même voie. Après 7 jours, la chirurgie d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne a été réalisée chez les souris, en ligaturant les extrémités distale et proximale de l'artère carotide commune droite (CCA), en réalisant une petite incision entre les ligatures, puis en insérant un filament enduit de silicone à tête ronde pour obstruer l'artère. Le filament est maintenu une heure pour établir un modèle d'ischémie cérébrale focale. Vingt-quatre heures après la modélisation, des évaluations ont été réalisées : score de déficits neurologiques (score de Longa) pour l'état neurologique, coloration TTC pour détecter le volume d'infarctus cérébral, imagerie laser pour observer le flux sanguin cérébral, coloration HE et Nissl pour observer les changements pathologiques du tissu cérébral. Les exosomes ont été isolés du plasma et du tissu cérébral par ultracentrifugation et tri par taille, puis analysés par microscopie électronique à transmission (TEM), mesure de la taille et Western blot. Le long ARN des exosomes a été isolé pour construction de bibliothèque et séquençage. La PCR en temps réel a mesuré l'expression des ARNm des facteurs inflammatoires et des chimiokines des neutrophiles dans les exosomes du plasma et du tissu cérébral, tandis que les protéines ont été quantifiées par ELISA et l'immunohistochimie a détecté la myéloperoxydase spécifique des neutrophiles (MPO) dans le cerveau. Résultats : par rapport au groupe chirurgie factice, les scores neurologiques du groupe modèle ont significativement diminué (P<0,01), le volume d'infarctus cérébral a augmenté (P<0,01), le flux sanguin cérébral a nettement diminué (P<0,01), des lésions cellulaires et une diminution marquée des corps de Nissl ont été observés (P<0,01). L'expression des ARNm IL-1β, MPO, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL10, CCL2 et CCL3 dans les exosomes de plasma et de tissu cérébral a augmenté significativement (P<0,05 ; P<0,01), ainsi que les protéines IL-1β, MPO, CXCL2 et CXCL10 dans les exosomes du tissu cérébral (P<0,05 ; P<0,01). Le taux de positivité MPO et la densité optique moyenne dans le cerveau ont augmenté (P<0,01). En comparaison avec le groupe modèle, les groupes soupe Huanglian Jiedu et Jinnaduo ont montré une amélioration significative des scores neurologiques (P<0,05), une réduction notable du volume d'infarctus (P<0,01), une restauration significative du flux sanguin cérébral (P<0,01), une diminution des cellules nécrotiques cérébrales et une augmentation des corps de Nissl (P<0,01). Dans le groupe soupe Huanglian Jiedu, l'expression des ARNm des facteurs cités a été significativement réduite dans les exosomes de plasma et de tissu cérébral (P<0,05 ; P<0,01), ainsi que l'expression des protéines dans les exosomes du tissu cérébral et la positivité MPO et densité optique dans le cerveau (P<0,01). Conclusion : la soupe Huanglian Jiedu peut réguler efficacement l'expression des chimiokines liées aux neutrophiles dans les exosomes du plasma et du tissu cérébral des souris MCAO, réduisant ainsi l'infiltration des neutrophiles dans le cerveau et atteignant un effet thérapeutique.

关键词

Soupe Huanglian Jiedu;accident vasculaire cérébral ischémique;exosomes;chimiokines;infiltration neutrophile

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