溃疡性结肠炎（UC）是炎性肠病的主要表现疾病形式之一，UC是一种来源不明的弥漫性非特异性肠道炎症，常导致结肠黏膜糜烂和溃疡［1］。UC的确切发病机制尚不清楚，目前认为与失调的免疫反应、肠道微生物群的改变、遗传易感性和环境因素都有关系［2］，中医认为本病多由脾虚不运，饮食不节，情志不畅，外感六淫，湿、热、瘀、毒等病理产物结聚肠腑所致［3-4］。主要临床表现以腹部腹痛、腹泻、黏液脓血便、里急后重为主。炎性肠病已成为全世界公共卫生的一大挑战［5-6］，在中国每10万人就有11.6例UC病例［7-8］。UC由于病程长久，迁延难愈且易复发对患者生活质量产生重大影响，包括情绪障碍、工作能力下降及社会功能受损，由于护理的直接成本及与残疾和误工相关的间接成本，UC在全球范围内造成了巨大的负担［9-10］。UC在治疗上目前西医主要的治疗药物有水杨酸制剂［11］、皮质类固醇制剂［12］、免疫抑制剂［13］、生物制剂［14］、肠道菌群制剂［15］、微生态制剂［16］等，其中水杨酸制剂运用较广［17］，容易出现恶心、呕吐、头痛等不良反应，需要终身药物维持，容易出现复发的缺点。在长期临床实践中，中医药依据临床辨证施治，在治疗炎性肠病上表现出一定的优势如有效缓解临床症状、缩短治疗周期、减少复发频率、提高生活质量、减少并发症产生等［18］。基于病机特点和不同临床表现专家学者将UC分为大肠湿热型、肝郁脾虚型、气滞血瘀型、寒热错杂型、脾胃虚弱型、脾肾阳虚型、阴血亏虚型7大主要证型［19］，但中药制剂在治疗过程中具体机制不明确，加上中药的使用需要精准辨证用药才能有的放矢提升临床治疗有效率，因此研究简单易行，可操作性强，可复制的“病证结合”动物UC模型对于阐述中药治疗UC具体作用机制及治疗效果，开发新型中药制剂具有重要的意义。目前大多数中医药研究UC动物模型的建立由单纯参照西医动物模型进行造模向既符合中医的证候模型又符合西医疾病模型的“病证结合”的造模方式进行积极探索［20］。既往模型研究中发现动物的种属对UC病理及临床表现上存在一定差异，动物的性别上存在一定体质差异，对中医证候有一定影响，病证造模方式的不同亦影响UC模型建立且药物干预后相关机制变化与临床及病理变化呈一定相关性。本文从模型动物种属选择，雌雄选择，UC常见证型病证结合动物模型制备方法，模型评价指标及中药干预UC病证结合动物模型主要机制5大方面对UC病证结合动物模型进行归纳比较研究，为探索更加符合病证结合的UC动物模型提供参考。1 模型动物种属及雌雄选择1.1　UC模型动物选择比较UC模型动物建立种属的选择上遵循与人类临床表现及病理变化更加贴合的动物，从而更好地反映药物在人体治疗中的机制。同时在模型动物的选取上应该遵循动物来源易得、可稳定复制且经济的优势。目前国内外在研究UC时选择的动物种属包括大鼠、小鼠、豚鼠、兔、犬、猪等动物，其中大鼠、小鼠在UC模型中运用最为广泛。李丽霞选用大鼠作为模型复制对象，予以5% 2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）+50%乙醇灌肠1次，3 d后即可出现结肠充血、溃烂典型UC症状［21］，PRAKASH等［22］采用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）自由饮7 d后大鼠即出现典型的UC特征性表现，肠道病理变化明显；采用大鼠模型动物来源广，容易获得经济，成模时间短的优点，肠道炎症部位容易清晰观察的优点，在UC模型动物选择中广泛使用，但不能完全模拟人的UC病理过程对于特殊类型或者是研究基因缺陷UC模型选取时具有一定的局限性。徐阳等［23］选用小鼠作为模型复制对象时，予以不同浓度TNBS灌肠后小鼠即出现少食、少动、体质量下降、皮毛光泽度下降、腹泻、便血情况；小鼠结肠黏膜组织充血、水肿、溃疡的程度呈剂量依赖性增加；小鼠在造模过程中体积小，容易饲养，但是小鼠肠道的面积较小，溃疡面积不易计算，不利于相关病理评分，对于模型的评价容易产生较大误差。夏冰等［24］、孙睿森等［25］采用豚鼠作为UC模型复制对象时，分别给予二硝基氯苯灌肠和3%的DSS溶液自由饮方式进行造模，二硝基氯苯灌肠给药1 d急性期豚鼠均表现为结肠黏膜充血水肿，大量炎性细胞浸润，溃疡形成，严重者发生坏死；采用豚鼠建立UC模型时，豚鼠肠道对二硝基氯苯反应较为强烈，能够较快复制模型，在急性期容易造成肠道坏死，对相应刺激也十分敏感更容易死亡，不好把握UC模型的程度，因此在后期疾病模型复制中运用较少。孙茂庆等［26］、RABIN等［27］采用兔直肠灌肠5%乙酸、3.5%二硝基氯苯加上皮肤致敏的方法复制UC模型，造模5 d检测模型复制情况，发现肠壁增厚，黏膜弥漫性出血、溃疡、坏死等情况，黏膜炎症细胞浸润，腺体消失，这些病变在2周时与UC愈合期一致，在5周时仍有轻度隐窝紊乱和丢失，并伴有杯状细胞缺乏和黏膜下纤维化与UC病理模型较为符合；采用兔模型能够较为全面地模拟UC各个时期的病理反应，兔肠道面积较大，能够较为准确地进行病理评分，但由于造模周期较长，且多采用皮肤免疫反应联合灌肠法造模，干扰因素较多，且兔价格相对偏高，在同等样本量的情况下需要更大的喂养场地。雷丰瑞［28］对雌性中华田园犬予以浓度为2.5%DSS溶液自由饮用7 d，出现不同程度的精神萎靡、进食量下降、体质量下降及掉毛，部分犬只出现了肛门周围轻微红肿，并伴随有不同程度的腹泻和便血，腹泻及相关症状；犬的UC模型更加符合人类UC的临床表现症状，且持续时间较久，但是犬的体型较大价格较高不利于饲养，且实验操作难度高，现在多不选用犬作为常用模型。ROEDIGER等［29］在猪体内诱导泛酸缺乏可在人类UC的程度、组织学和慢性方面产生理想的模型，发现模型结肠炎从轻度到中度到重度，从直肠开始，并向近端发展，它沿结肠分布并呈慢性发展，反映了人类UC的特点［30］。采用猪作为模型动物能够更加真实地接近人慢性UC的特征，但是猪价格高昂，药物干预需要更的大剂量，操作难度高。不同的种属模型动物对UC的呈现贴合度具有一定差异，选取合适的动物制作UC模型，是研究中的重要一环，在研究中综合各因素选择最适宜的动物种属为研究奠定基础。见表1。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T001表1模型动物种属选择比较Table 1Comparison of model animal strain selection常用动物优势不足参考文献大鼠来源广、经济、成模时间短、肠道炎症部位容易清晰观察不能完全模拟人的病理过程，且研究基因缺陷UC模型选取时具有一定的局限性［21-22］小鼠体积小，容易饲养，成模时间短肠道的面积较小，溃疡面积不易计算，不利于相关病理评分［23］豚鼠成模时间短敏感度高易死亡［24-25］兔子较为全面地模拟UC各个时期的病理反应造模时间长，干扰因素多［26-27］犬UC模型更加符合人类UC的临床表现症状价格高昂，不易操作［28］猪更加真实地接近人的慢性UC的特征价格高昂，不易操作［29-30］1.2　UC模型动物雌雄选择在一项UC模型复制研究中发现不同性别具有一定差异，雄性小鼠均出现大便稀溏，偶有小鼠精神倦怠，毛色无光泽，体质量下降，雌性小鼠均表现出不同程度的稀便、体质量减轻症状，但是无小鼠出现精神倦怠情况；疾病活动指数（DAI）评分和结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分差异具有统计学意义［31］。临床中临床证据长期以来一直认为，UC在男性患者中更为普遍［32］。因此在模型选择上性别也具有不同的易感性，对中医证型的转化也有一定的差异，如Wistar大鼠和SD大鼠雌雄间体质有明显的寒热差异［33］。因此，在今后模型复制上也需注意性别差异对中医证型和疾病的影响。2 UC常见证型“病证结合”动物模型制备目前UC研究比较多的证型包括湿热证、脾虚证、脾肾阳虚证、脾虚湿盛证、肝郁脾虚证和寒热错杂证。在病证结合动物模型的制备上，多采取复合制备方法，特别是中医的复合证型制备上，常选取两个单一中医证型的叠加法作为复合证型的模拟方法，该方法虽不能完全模拟出中医证候发生机制，但可反映出大部分中医证候表现，比如寒热错杂证UC模型的制备是通过“以方测证”的反推法来对模型进行复制和判定的，在成熟、可靠的疾病模型基础上，不施加与“证”相关的干预因素，以方药反证模型是否具有中医学的证候属性，从而构建稳定的病证结合模型［34］，通过方证对应的有效性来判定该方法可有效复制出证候模型也是一种模型制备的新思路［35］。对以上证型“病证结合”动物模型制备方法进行比较和评价见表2。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T002表2UC常见证型病证结合动物模型制备比较Table 2Comparison of animal model preparation of disease certificate combination of UC名称造模方式动物具体造模方法模型评价参考文献湿热证复合因素+3%DSS自由饮小鼠高脂饮食+湿热环境相结合干预14 d，后以3% DSS溶液自由饮用7 d优点：湿热证模型复制接近临床表现；不足：造模时间长，自由饮用DSS剂量难以控制［36］复合因素+TNBS/乙醇灌肠大鼠高脂饲料+白酒灌喂+湿热环境21 d，后以TNBS/乙醇混合试剂灌肠优点：湿热证模型复制接近临床表现；不足：高度白酒对模型肠道也具有黏膜损害，不利于疾病病程变化复制［37］抗原刺激+复合因素大鼠高脂高糖饮食+隔日油脂灌服与隔日灌服白酒交替干预20 d。第6天和第20天于大鼠的双侧足跖、腹股沟及背部注射抗原乳化液1 mL优点：免疫应激法复制疾病模型，接近肠道病理变化；不足：操作复杂，成功率不高［38］高脂高糖饮食+TNBS/乙醇灌肠大鼠自由饮用蜜糖水+每日上午灌服猪油+灌服白酒共持续10 d，第11天予TNBS加乙醇混合试剂灌肠优点：湿热证候与临床相符；不足：造模时间长，模型干预因素多，难以判定不同时期肠道病理改变［39-40］脾虚证苦寒泻下+冰乙酸灌肠大鼠番泻叶浸泡液1次/d，灌服大鼠连续3 d，3 d后50 mL·L-1冰乙酸0.1 mL灌肠，次日起继续灌服番泻叶2 d优点：疾病模型与临床相似度高；不足：苦寒泻下度不好把握，容易出现证型转化［41］同种异体SD大鼠胎鼠结肠移植大鼠将孕大鼠处死取出2~3 cm长的胎鼠降结肠备用，将待造模的成年大鼠，在右肾包膜下将胎结肠进行移植优点：疾病模型与临床相似度高；不足：存活率低，操作难度大［42］苦寒泻下+TNBS/乙醇灌肠大鼠番泻叶浸剂灌胃1 d，后用肥皂水灌肠冲洗，然后采用TNBS/乙醇灌肠优点：疾病模型与临床相似度高；不足：苦寒泻下度不好把握，容易出现证型转化［43］脾肾阳虚苦寒泻下+氢化可的松+2，4二硝基氯苯/乙酸灌肠大鼠番泻叶灌胃和氢化可的松颈部皮下注射15 d，用2，4二硝基氯苯/乙酸灌肠优点：疾病模型与临床相似度高；不足：苦寒泻下度不易把握，容易出现证型转化，且氢化可的松运用后阳虚症状会有叠加［44］TNBS/乙醇灌肠+复合因素大鼠TNBS/乙醇溶液灌肠，后予番泻叶药液灌胃，1次/d，灌胃后向每只大鼠均匀喷洒3 ℃的冰水，然后用电风扇将其毛发吹干连续处理4周优点：疾病模型复制成熟；不足：证型复制容易出现湿热证与脾肾阳虚证表现有一定差异［45-46］脾虚-脾肾阳虚+TNBS/乙醇灌肠大鼠大黄水煎液灌胃14 d，第15天在大鼠左右肢臀部交替注射氢化可的松连续10 d，第25天禁食不禁水，第26天用TNBS/乙醇混合试剂灌肠优点：疾病模型复制成熟；不足：造模时间长，变量多，并且证型夹杂不易区分［47］脾虚湿盛免疫法+TNBS/乙醇灌肠大鼠首先制备抗原乳化剂，第1、第14天分别在大鼠腹股沟处注射抗原乳化剂，第15天大鼠已全身致敏，TNBS/乙醇灌肠优点：疾病模拟成熟；不足：免疫法造脾虚湿盛证与临床吻合度不高，造模时间长［48］高脂饮食+疲劳+DNBS+乙醇灌肠大鼠单日禁食不禁水，并予4 ℃纯净水灌胃1次；双日自由饮食，并予精炼猪油灌胃1次；强迫大鼠每日站立于深2 cm的水中8 h，连续20 d，第21天禁食不禁水24 h，DNBS/乙醇溶液灌肠优点：证候复制与临床相似；不足：造模时间长，大鼠容易死亡［49-50］肝郁脾虚限制活动+限制饮食+醋酸灌肠法大鼠限制活动、饮食，每天约8 h连续3周，第22 天醋酸灌肠，24 h后每天继续限制活动持续12 d优点：疾病复制简单易行；不足：造模时间长，模型证候复制偏向于肝郁［51］夹尾+疲劳+DSS灌胃法大鼠10%DSS溶液灌胃7 d先建立急性UC模型，正常饲养5 d，第13天再次灌胃10%DSS溶液连续7 d，诱导其复发；单日禁食，双日正常饮食，冰水与猪油交替灌胃，每日用纱布包裹长尾夹夹住大鼠尾部激惹诱导其出现肝郁情况，强迫大鼠站立在2 cm深的水中至少8 h使其疲劳，连续19 d优点：疾病模型复制易行。中医复合证型肝郁与脾虚叠加可较为真实反映该证候特点；不足：造模时间长，且用猪油灌胃易出现湿热证，证候夹杂［52］TNBS/乙醇溶液灌肠+束缚应激+饮食失节大鼠大鼠双前肢反捆至背部捆绑束缚40 min/次，2次/d，隔日喂养，持续干预2周，TNBS/乙醇混合溶液灌肠优点：复制的病证结合模型与临床表现基本相符；不足：造模时间长，死亡率高［53］5%DSS自由饮+束缚法+饮食失节法大鼠自由饮用5％DSS溶液，腹腔注射25 mL·L-1乙醇溶液1 mL，每日不定时束缚大鼠，隔日进食，共2周优点：复制的证模型与临床表现基本相符；不足：自由饮DSS法剂量难以把握，疾病模型复制有偏差［54］寒热错杂TNBS/乙醇灌肠+以方测证法评定证型大鼠TNBS/乙醇溶液灌肠，注射完毕后，保持仰卧位臀部向上15 min，苏醒后放回笼中，常规饲养3 d优点：疾病复制成熟，易操作；不足：以方测证，证型评价不准确［55-57］3 模型评价指标3.1　UC模型“病”评价指标UC疾病的判定主要是依据一般情况如体质量、精神状态、动作行为、毛发光泽度、粪便性状等，并按UC DAI评分标准对症状进行评分，结合结肠组织病理学改变，根据CMDI评分标准对结肠黏膜病理学改变进行分级评分，多维度对疾病进行判定。根据Wallace等的研究，结直肠黏膜损伤评分为0~10分。测量结肠病变的表面积，并用病变面积（mm2）表示。具体评分见表3［58］。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T003表3CMDI评分标准Table 3Evaluation standard of colon mucosal damage index score得分标准0没有损坏1充血；没有溃疡2肠壁充血和增厚；没有溃疡3一处溃疡；肠壁无增厚4两个或多个溃疡/炎症部位5溃疡和炎症的两个或多个主要部位或溃疡/炎症的一个部位沿结肠长度延伸1 cm6~10如果损伤沿结肠长度超过2 cm，则每增加1 cm，得分增加1分根据DAI评分标准记录评分，以体质量下降率、大便性状分数和肠出血程度分数计算疾病活动指数，DAI=（体质量下降率+大便性状分数+肠出血程度分数）/3。具体评分见表4［59］。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T004表4DAI评分标准Table 4Evaluation standard of disease activity index score得分体质量下降率/%大便性状肠出血程度00正常隐血（-）11~5柔软但仍成型隐血（-）26~10柔软不成型隐血（+）311~18柔软潮湿粪便中可见血迹418水样便直肠大出血3.2　UC模型证候评价标准动物证的评价标准由于在动物模型证的制作过程中，难以结合模型动物的舌象、脉象进行四诊合参判定具体证型，动物的腹部疼痛情况也无法得知，故在动物模型证候的判定中主要依据人的表观证候进行判定，辅以动物一般情况如体质量、毛色、活动情况综合对UC动物的证候进行判定。见表5。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T005表5UC病证结合动物模型评价标准Table 5Evaluation standard of UC animal model combined with disease and syndrome名称证参考文献湿热证肛门潮湿，懒动，皮毛如油裹；有黏液便、稀烂便、粪色加深、湿粪重量加重，部分模型动物出现乳糜尿［38］脾虚证纳呆少动，四肢乏力，毛发枯涩，体温降低，脱肛，便溏［60］脾肾阳虚饮食减少，活动减少，反应迟缓，体质量减轻，皮毛晦暗，喜扎堆，弓背嗜卧，肛周污秽、便稀且伴有不同程度的黏液脓血便或大便清稀［61］脾虚湿盛主证，出现疲乏懒动，蜷卧扎堆；精神萎靡，毛发易脱落；大便稀溏；行动迟钝，反应减弱。次证，体质量下降；饮食饮水摄入减少；腹部鼓胀胃肠胀气明显。以上症状出现3项主证或2项主证加上2项次证即可认为脾虚湿困证UC模型复制成功［62-65］肝郁脾虚粪便溏泻、肾上腺质量增加、胸腺质量下降、便血、喜扎堆、体重减轻、食欲下降等症状，逐渐出现胡须下垂、懒动、细声尖叫、容易激惹、毛少光泽等肝郁脾虚证症状；结合旷场实验、高架十字迷宫实验、新环境进食抑制实验判定焦虑情绪等行为［54，66］寒热错杂精神状态低下，蜷缩抱团，部分可见不自主颤栗现象，可同时伴有粪便不成形或淡黄色黏液果胶形状，严重者肛门因便血量大、血液凝固后肛周皮毛潮湿、色黑［57］4 UC病证结合动物模型不同证型主要相关因子通过对“病证结合”动物模型施加相关中药方剂干预后，研究相关因子变化，阐释中医药发生机制；反过来，在模型复制过程中也可结合相关变化因子来客观评价中医证型具有一定的借鉴意义。见表6。10.13422/j.cnki.syfjx.20221592.T006表6UC病证结合动物模型不同证型主要相关因子Table 6Main related factors of different syndrome types in animal model of UC证型相关研究证候评估可参考指标参考文献湿热证大鼠血清白细胞介素（IL）-6、胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）、环氧合酶-2（COX-2）、γ干扰素（IFN-γ）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）均升高；芍药汤可抑制湿热型UC大鼠活化蛋白-1（AP-1）蛋白刺激肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达；葛根芩连汤干预湿热型UC家兔时可降低血清及结肠组织T辅助细胞1（Th1）细胞因子IL-1β和TNF-α并提高Th2细胞因子IL-4、IL-13的表达IL-6、IL-4、IL-13、MTL、GAS、COX-2、TNF-α、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、VCAM-1［38-39，67-68］脾虚证大鼠血清IL-6、IL-8及TNF-α的水平升高；脾虚证模型大鼠CD3+细胞减少，CD4+细胞减少、CD8+细胞不变或升高、CD4+/CD8+值降低，环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷（cAMP/cGMP）值降低；脾虚证UC模型大鼠结肠Toll样受体2（TLR2）蛋白表达水平明显升高CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、cAMP/cGMP、TLR2［69-72］脾肾阳虚脾肾阳虚证超氧化物歧化酶（SOD）活性降低，MDA含量增高；脾肾阳虚UC模型IL-6、IL-8、TNF-α血清浓度显著升高，游离3，5，3′-三碘甲腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、睾酮（T）、皮质醇（Cor）、D-木糖血清浓度降低；脾肾阳虚UC模型TLR4 mRNA和蛋白表达显著升高；脾肾阳虚UC模型IL-1β含量显著升高，IL-10含量显著降低SOD、MDA、FT3、FT4、T、Cor、D-木糖、TLR4、IL-1β、IL-10［45，73-75］脾虚湿盛脾虚湿困UC模型大鼠血清IL-6、IL-8及TNF-α水平均显著升高；脾虚湿困UC模型血清IL-1β含量明显升高、IL-4的含量明显降低，胱天蛋白酶-8（Caspase-8）基因表达及蛋白含量明显升高；脾虚湿困UC模型大鼠结肠组织内IL-1β含量水平显著升高，IL-4含量水平明显降低，p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）基因和蛋白表达水平明显升高IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α、Caspase-8、p38 MAPK［50，76-77］肝郁脾虚肝郁脾虚UC模型血清IL-6，IL-9，5-羟色胺（5-HT）水平上升，SOD水平下降，肝脏5-羟色胺2A受体（5-HT2AR）蛋白表达量上升，结肠5-羟色胺转运体（SERT）蛋白表达量显著下降；肝郁脾虚UC模型大鼠血清IL-4和IL-10含量明显降低，IL-17和IFN-γ含量明显升高；肝郁脾虚UC模型大鼠的CD44、CD62p表达均升高IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、SOD，5-HT2AR、SERT、CD44、CD62p［53-54，78］寒热错杂清肠温中方能下调血清IL-6、TNF-α炎症因子水平，提升肠黏膜闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白总量的表达来改善肠道炎症；温中健脾、清热燥湿法对寒热错杂型UC大鼠肠上皮occludin 蛋白表达及肠上皮细胞间紧密连接完整性有正性调节作用occludin、ZO-1、IL-6、TNF-α［56-57］5 结语近年来中医药在防治UC上具有治疗手段种类丰富、多靶点整体调节、不良反应少、疗效稳定等优势，中医药在治疗UC以辨证论治，四诊合参为基础。目前中医临床将UC主要分为大肠湿热型、肝郁脾虚型、气滞血瘀型、寒热错杂型、脾胃虚弱型、脾肾阳虚型、阴血亏虚型七大证型。随着中医药运用越来越广泛，对中医药的研究也越来越深入，因此建立符合中医辨证特色的“病证结合”UC模型，既具备西医病理发展过程，也具备中医证型特征，更能全面地反映出中医药作用机制。在选取符合病证模型的动物类型、药物制剂、造模方法、复制时间及相关的机制上研究者们进行了积极的探索，在实验研究方面目前主要研究的UC证型有湿热证、脾虚证、脾肾阳虚证、脾虚湿盛证、肝郁脾虚证、寒热错杂证，在造模方法上主要选用病因模拟法先复制证型后选用化学制剂或免疫制剂诱导疾病模型的造模方法，常选用大鼠作为研究对象，复制周期在7~28 d，所选化学试剂以5% DSS自由饮、TNBS 100 mg·kg-1加50%乙醇0.25 mL混合试剂灌肠为主。这种模型复制方法可同时兼顾UC的西医病理和中医的病机特征，对于阐释中医证型和西医病理变化联系及中医药治疗UC相关机制具有重大的意义。通过对现有的病证结合UC动物模型复制方法分析发现仍然存在一些问题：第一，病证结合模型复制时序问题。在病证结合模型复制中一般先复制中医证型模型后复制疾病模型，但是在临床实际发病过程中，疾病和证候并不是呈先后发展顺序；第二，证型转化问题。在疾病的发展过程可能有证型上的相互转化如脾虚证日久可伤及肾阳导致脾肾阳虚，这种证型的转化对实验结果有很大影响；第三，证型的评估缺乏客观化指标。病证结合动物模型缺乏客观化的特异性的指标，如在中医机制研究中IL-6、IL-4、TNF-α变化在多个证型中均有变化，不同的证型变化引起Th1/Th2细胞失衡分泌不同炎症因子，激活肠道黏膜中蛋白失调诱发UC［79］，但是目前缺乏统一的炎症因子作为判定标准，同样实验的变量增加，可复制性低，实验结果可信度不高；第四，缺乏中医综合评价思维。评价中医证候缺乏模型动物“舌脉”，无法做到四诊合参，且腹部疼痛作为主观感受无法纳入评价系统。“病证结合”UC动物模型还需要进一步的探索，建立客观、准确、可复制的统一的评价体系标准，为中医药研究发展奠定可持续的模型基础。