阿尔茨海默病（AD）为我国发病率较高的神经退行性疾病，常表现为认知功能减退。随着人口老龄化的加速，当前我国罹患AD的人群已突破1 000万人［1］。然而，AD治疗药物有限，现有的多奈哌齐、美金刚等药物仅能改善症状，且无法从根本上逆转其病理进程［2-3］。因此，迫切需要更为有效的抗AD药物。中医学认为AD属于衰老相关疾病，并将其归为“健忘”“善忘”等范畴。AD发病与五脏亏损关系密切，其中肾气亏虚尤为关键。近年来，临床和动物实验均证实补肾类中药具有较好的抗AD作用［4-6］。淫羊藿，亦仙灵脾，为经典的补肾药物。《神农本草经·淫羊藿》认为淫羊藿有“益力气、强志”之功，《本草新编·淫羊藿》亦认为其有“除中年健忘，益肾固筋，增力强志”之效。一些动物实验研究也表明淫羊藿的有效活性成分淫羊藿苷具有较好的抗AD作用，并能通过改善线粒体能量代谢、抑制氧化应激和神经炎症等途径延缓AD的病理进程［7-10］。神经元和树突损伤为AD的典型病理特征之一。近年来，研究证实神经炎症对神经元和树突损伤的发生尤为关键，抑制神经炎症则可改善AD认知功能、神经元和树突损伤［11-12］。Ras同源基因家族成员A（RhoA）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）为调节炎症的经典通路，研究证实AD脑内表现有RhoA/ROCK信号通路异常活化的情况，抑制该信号通路则可改善AD认知功能和神经元损伤［13-15］。尽管RhoA/ROCK信号通路在AD中的作用已得到广泛证实，但目前尚缺乏淫羊藿苷通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善AD神经元和树突损伤的研究。基于上述研究现状及课题“基于生物色谱联合技术的淫羊藿补肾助阳活性物质研究（2018-ZQN-68）”的基础上，本研究将通过侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）建立AD模型，并给予不同剂量的淫羊藿苷治疗，治疗结束后将对大鼠的认知功能、神经元和树突损伤及RhoA/ROCK信号通路中的关键分子进行检测，从而明确淫羊藿苷改善AD神经元和树突损伤的分子机制。1 材料1.1　动物80只SPF级雄性SD大鼠，体质量（220±20） g，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，许可证号SYXK（辽）2020-0001，合格证编号210726211100125325。动物饲养于福建中医药大学，动物房控制在23~25 ℃，相对湿度维持在40%~50%。实验期间，动物可自由摄食和饮水。本实验获得福建中医药大学动物伦理委员会审核和批准，伦理审批号为2018-ZQN-68。1.2　药物及试剂淫羊藿由福建中医药大学附属人民医院中药房提供，淫羊藿苷则由本课题组前期实验提取分离所得，并经福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓教授团队鉴定；Aβ1-42（美国Sigma-Aldrich公司，批号A2648）；尼氏染色液（上海翌圣生物科技有限公司，批号60531ES50）；高尔基染色液、RNA提取液、First Strand cDNA Synthesis试剂盒、SYBR Green 实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR） Master Mix试剂盒（武汉Servicebio公司，批号分别为G1069、G3013、G3330、G3326）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）抗体、白细胞介素-1β（IL-1β）抗体、白细胞介素-6（IL-6）抗体（武汉ABclonal公司，批号分别为A11534、A1112、A0286）；BCA蛋白浓度测定试剂盒、Ras同源基因家族成员A（RhoA）抗体、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（ROCK1）抗体、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2（ROCK2）抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗兔免疫球蛋白（Ig）G二抗（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为PC0020、K001649P、K001838P、K004146P、K106389P、SA134）。1.3　仪器XR-XM101型Morris水迷宫（上海欣软信息科技有限公司）；LRH-70型生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；71000型大小鼠脑立体定向仪（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；KD-BM型组织包埋机和KD2260型石蜡切片机（浙江金华市科迪仪器设备有限公司）；Bioptic Qsep100型核酸蛋白分析仪（江苏光鼎生物科技有限公司）；LC480型Real-time PCR仪（瑞士Roche公司）；SVE-2型垂直电泳仪及电源（武汉Servicebio公司）；Tanon 1600型全自动数码凝胶图像分析系统（上海天能科技有限公司）；BX43型正置光学显微镜（日本Olympus公司）。2 方法2.1　动物分组及造模将SD大鼠随机分为正常组和造模组，其中正常组15只，造模组65只。参考之前的文献报道［9］制备Aβ1-42悬浮液：用二甲基亚砜（DMSO）和无菌生理盐水的混合液将Aβ1-42稀释成2.5 g·L-1的混悬液，置37 ℃恒温孵育1周。参考文献［10］制备AD模型：用4%水合氯醛溶液经腹腔注射麻醉大鼠（400 mg·kg-1），解剖头部皮毛，并将其固定于脑立体定位仪。依据大鼠脑立体定位图谱，于囟门后0.9 mn，矢状线左/右侧1.5 mm处钻深为4.0 mm的圆孔（AP=0.9，L/R=1.5，V=4.0），钻孔后，使用微量进样器向大鼠双侧侧脑室匀速注射Aβ1-42悬浮液各2 μL，注射速度为0.5 μL·min-1，留针5 min，退针，缝合皮毛。2.2　给药造模1周后，应用Morris水迷宫实验筛选出认知损伤大鼠60只。将60只认知损伤大鼠随机分为模型组，淫羊藿苷低、中、高剂量组，另将正常大鼠设为空白组，每组15只。参考文献［9-10］确定淫羊藿苷组的给药剂量，即淫羊藿苷低、中、高剂量组分别按0.03、0.06、0.09 g·kg-1的剂量灌胃淫羊藿苷配置的溶液。空白组和模型组则按10 mL·kg-1的剂量灌胃等体积的生理盐水。5组连续灌胃4周，1次/d。2.3　Morris水迷宫实验治疗结束后，采用Morris水迷宫实验检测大鼠的认知功能。正式测试前，连续进行5 d学习记忆训练。训练结束后进行定位航行实验和空间探查实验，其中定位航行实验统计大鼠的逃避潜伏期，空间探查实验则。统计大鼠的穿越平台次数、目标象限驻留时间及平均游泳速度。2.4　尼氏染色观察大鼠海马病理形态水迷宫实验后，从每组随机选取4只大鼠，麻醉后断头取脑，将脑组织平分为左右两等份，其中一部分置4%多聚甲醛溶液固定，另一部分则用作高尔基染色。将脑组织从多聚甲醛溶液捞出，进行石蜡包埋。利用切片机将脑组织切取5 μm厚的切片。使用二甲苯和梯度乙醇对切片做脱蜡处理，磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后，将切片置尼氏染色液孵育15 min。再次使用梯度乙醇脱水，中性树胶封片。显微镜下观察，并用图像分析软件Image J分析海马区神经元数量。2.5　高尔基染色观察大鼠海马区神经元树突棘将一部分脑组织置4%多聚甲醛溶液固定48 h。PBS漂洗后，将脑组织置高尔基染色液避光处理14 d，浸泡48 h后更换染色液，此后每3 d更换1次。PBS漂洗脑组织，将脑组织置80%冰乙酸孵育过夜。捞出脑组织，置30%蔗糖浸泡1 h。使用切片机将脑组织切成100 μm厚的切片，过夜避光晾干。浓氨水处理切片15 min，再用酸性坚膜定影液处理15 min。PBS洗涤，甘油明胶封片。光学显微镜下观察切片，采集图像。将图片导入Image J软件，将图像转换成灰度图片后使用Threshold二值化图片，添加标尺，利用Skeletonize将骨骼化图片，最后应用Skeleton计算树突棘密度和树突长度。2.6　Real-time PCR检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平从每组随机选取7只大鼠，并以相同方式麻醉大鼠。断头取脑，冰上分离海马组织。取海马组织，加入RNA提取液1 mL，使用核酸蛋白仪分析mRNA的纯度和浓度。利用First Strand cDNA Synthesis逆转录试剂盒对纯度合格的样本逆转录，以合成cDNA。按照SYBR Green Real-time PCR Master Mix试剂盒说明书进行PCR反应，并置Real-time PCR仪扩增。扩增条件为95 ℃预变性30 s，95 ℃变性15 s，60 ℃退火30 s，循环40次后绘制溶解曲线。分析和统计2-ΔΔCt值。本研究所用引物由武汉皮诺飞生物科技有限公司设计和合成，引物序列见表1。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T001表1引物序列Table 1Primer sequences引物序列（5'-3'）长度/bpTNF-α上游GCTTCGGCCCACTCTTGTTT180下游AACGCTCTGTGCCTTATTGCIL-1β上游CCTATGTCTTGCCCGTGGAG118下游CACACACTAGCAGGTCGTCAIL-6上游CACCGGATTGAAGAGAAGCG142下游AAGTTGATGGTGCTGAGGGAARhoA上游CTTAAGTCCAAGGGTCCATTT162下游ATTCTTGGATTTCCCATTCCTTROCK1上游CTTATTGTTCTTGGGAAATCT175下游GGGAAATCCAATCTTATTCTTROCK2上游TCCAAATCCGGATGGTCCTTT120下游ATTGTTATCTCCATTGGATTTAGAPDH上游ATGGGTGTGAACCACGAGA229下游CAGGGATGATGTTCTGGGCA2.7　蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平取剩余4只大鼠海马，加入RAPI裂解液1 mL，匀浆，以12 000 r·min-1离心15 min（离心半径6.5 cm），取上清液。BCA法测定各样本蛋白浓度，沸水变性蛋白后收集样本。按照试剂盒说明书制备十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶，上样30 μg，依次电泳和转膜。将膜置5%脱脂牛奶中封闭30 min。加入一抗TNF-α（1∶1 000）、IL-1β（1∶1 000）、IL-6（1∶1 000）、RhoA（1∶1 000）、ROCK1（1∶1 000）、ROCK2（1∶1 000）和GAPDH（1∶2 000），置4 ℃孵育过夜；TBST洗膜，加入HRP标记的羊抗兔二抗（1∶1万），室温孵育1 h；TBST洗膜，向膜表面均匀滴加ECL显色液，并用凝胶成像仪曝光条带。用图像分析软件Image J分析目标蛋白的灰度值，并做统计分析。2.8　统计学分析采用SPSS 26.0软件对实验数据进行统计分析，实验结果以x¯±s表示。实验数据不符合正态性则采用Kruskal-Wallis H检验。实验数据符合正态性则用单因素方差分析（One-way ANOVA），方差齐性组间比较采用最小显著性差异法（LSD）检验，方差不齐组间比较采用Tamhane's T2检验，P0.05表示差异有统计学意义。3 结果3.1　水迷宫实验筛选结果造模7 d后，本研究通过水迷宫实验筛选出60只认知损伤大鼠。与正常组比较，造模组大鼠平台潜伏期显著增加（P0.01），而穿越平台次数和目标象限停留时间明显减少（P0.05，P0.01）。见表2。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T002表2水迷宫实验筛选结果 （x¯±s）Table 2Preliminary experimental results of water maze test （x¯±s）组别n逃避潜伏期/s穿越平台次数/次目标象限驻留时间/s正常组1519.04±4.395.34±0.5926.13±3.79造模组6032.94±4.512）4.04±0.711）17.97±2.862）注：与正常组比较1）P0.05，2）P0.013.2　对AD大鼠学习记忆的影响与空白组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加（P0.01），穿越平台次数和目标象限驻留时间显著减少（P0.01）；与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠逃避潜伏期明显减少（P0.05，P0.01），穿越平台次数和目标象限驻留时间明显增加，差异具有统计学意义（P0.05，P0.01），淫羊藿苷低剂量组大鼠逃避潜伏期、穿越平台次数和目标象限驻留时间较模型组也有所变化，但差异没有统计学意义。此外，各组大鼠平均游泳速度变化不明显，差异没有统计学意义。见表3。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T003表3淫羊藿苷对AD大鼠学习记忆的影响 （x¯±s，n=15）Table 3Effect of icariin on learning and memory ability of AD rat （x¯±s，n=15）组别剂量/g·kg-1逃避潜伏期/s穿越平台次数/次目标象限驻留时间/s平均游泳速度/cm·s-1空白组14.23±4.235.57±0.8328.53±7.158.54±2.23模型组28.36±4.561）2.72±0.931）11.57±4.331）8.24±2.04淫羊藿苷低剂量组0.0325.48±3.612.89±0.6512.99±4.178.89±2.27淫羊藿苷中剂量组0.0619.24±4.333）3.49±0.492）22.28±4.623）8.33±2.92淫羊藿苷高剂量组0.0920.36±3.793）3.96±0.913）22.81±5.533）8.05±1.99注：与空白组比较1）P0.01；与模型组比较2）P0.05，3）P0.01（表4-表9同）3.3　对AD大鼠海马病理形态的影响空白组大鼠海马CA1区神经元结构清晰，神经元排列规则，细胞间隙较小。模型组大鼠海马CA1区神经元间隙增加、排列欠规则，胞内可见尼氏体深染。淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元间隙减小、排列稍整齐，胞内尼氏体深染减少，而淫羊藿苷低剂量组海马神经元形态与模型组相似。与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量显著减少，差异具有统计学意义（P0.01）。与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量均有不同程度增加差异具有统计学意义（P0.05，P0.01）。淫羊藿苷低剂量组大鼠海马CA1区神经元数量较模型组也有所增加，但差异没有统计学意义。见图1、表4。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.F001图1淫羊藿苷对AD大鼠海马病理形态的影响（尼氏染色，×400）Fig.1Effect of icariin on pathological morphology of hippocampus in AD rat （Nissl staining， ×400）注：A.空白组；B.模型组；C.淫羊藿苷低剂量组；D.淫羊藿苷中剂量组；E.淫羊藿苷高剂量组（图2-图4同）10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T004表4淫羊藿苷对AD大鼠海马CA1区神经元数量的影响 （x¯±s，n=5）Table 4Effect of icariin on number of neurons in hippocampal CA1 region of AD rat （x¯±s，n=5）组别剂量/g·kg-1神经元数量/个空白组149.39±17.15模型组89.49±15.141）淫羊藿苷低剂量组0.0399.07±14.34淫羊藿苷中剂量组0.06117.92±15.912）淫羊藿苷高剂量组0.09127.62±14.583）3.4　对AD大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和树突长度的影响与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和树突长度显著减少（P0.01）；与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和树突长度均明显增加（P0.05，P0.01），淫羊藿苷低剂量组大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和树突长度较模型组也有所增加，但差异没有统计学意义。见图2、表5。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.F002图2淫羊藿苷对AD大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和长度的影响（高尔基染色，×1 000）Fig.2Effect of icariin on density and length of dendritic spines in hippocampal neuron CA1 region of AD rat （Golgi-cox staining， ×1 000）10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T005表5淫羊藿苷对AD大鼠海马CA1区神经元树突棘密度和长度的影响 （x¯±s，n=5）Table 5Effect of icariin on density and length of dendritic spines in hippocampal neuron CA1 region of AD rat （x¯±s，n=5）模型剂量/g·kg-1树突棘密度/个/10 μm树突长度/μm空白组7.87±0.715.84±0.55模型组4.13±0.591）3.98±0.621）淫羊藿苷低剂量组0.034.23±0.424.11±0.45淫羊藿苷中剂量组0.065.66±0.393）4.39±0.632）淫羊藿苷高剂量组0.095.86±0.643）4.81±0.393）3.5　对AD大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平的影响与空白组比较，模型组大鼠海马TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA表达水平显著升高（P0.01）；与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平均明显下降（P0.05，P0.01），淫羊藿苷低剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平较模型组也有所降低，但差异无统计学意义。见表6。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T006表6淫羊藿苷对AD大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA表达水平的影响 （x¯±s，n=3）Table 6Effect of icariin on mRNA expression levels of TNF-α， IL-1β，IL-6，RhoA， ROCK1 and ROCK2 in hippocampus of AD rat （x¯±s，n=3）组别剂量/g·kg-1TNF-αIL-1βIL-6RhoAROCK1ROCK2空白组0.55±0.080.58±0.130.54±0.150.44±0.140.37±0.120.45±0.11模型组0.98±0.071）0.87±0.151）0.81±0.181）0.76±0.111）0.73±0.111）0.82±0.141）淫羊藿苷低剂量组0.030.97±0.090.84±0.140.76±0.130.69±0.100.69±0.130.79±0.11淫羊藿苷中剂量组0.060.72±0.073）0.65±0.133）0.59±0.113）0.63±0.092）0.56±0.083）0.62±0.123）淫羊藿苷高剂量组0.120.64±0.113）0.68±0.083）0.61±0.152）0.59±0.113）0.61±0.092）0.63±0.143）3.6　对AD大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平的影响与空白组比较，模型组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平显著升高（P0.01）；与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平均有不同程度下降（P0.05，P0.01），淫羊藿苷低剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平较模型组也有所降低，但差异没有统计学意义。与空白组比较，模型组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平显著升高（P0.01）；与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平均有不同程度下降（P0.05，P0.01），淫羊藿苷低剂量组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平较模型组也有所降低，但差异没有统计学意义。见表7、图3和图4。10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.T007表7淫羊藿苷对AD大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的蛋白表达水平的影响 （x¯±s，n=3）Table 7Effect of icariin on protein expression levels of TNF-α， IL-1β，IL-6，RhoA， ROCK1 and ROCK2 in hippocampus of AD rat （x¯±s，n=3）组别剂量/g·kg-1TNF-α/GAPDHIL-1β/GAPDHIL-6/GAPDHRhoA/GAPDHROCK1/GAPDHROCK2/GAPDH空白组0.61±0.190.69±0.130.73±0.090.61±0.110.51±0.110.71±0.10模型组0.93±0.151）1.13±0.121）1.18±0.061）1.39±0.151）0.96±0.191）1.04±0.111）淫羊藿苷低剂量组0.030.90±0.121.05±0.091.07±0.151.30±0.080.89±0.110.98±0.15淫羊藿苷中剂量组0.060.72±0.133）0.89±0.063）0.99±0.062）1.09±0.093）0.72±0.082）0.81±0.073）淫羊藿苷高剂量组0.090.69±0.123）0.91±0.073）0.96±0.093）1.15±0.142）0.77±0.062）0.86±0.092）10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.F003图3各组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达电泳Fig.3Electrophoresis of TNF-α， IL-1β and IL-6 protein expression in hippocampus of rat in each group10.13422/j.cnki.syfjx.20221943.F004图4各组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达电泳Fig.4Electrophoresis of RhoA， ROCK1 and ROCK2 protein expression in hippocampus of rat in each group4 讨论中医学认为，肾虚为AD发病的关键，治疗上则主张采用补肾益智之法。淫羊藿，首载于《神农本草经》，性温味辛甘，具有补肾壮阳和祛风除湿之功。此外，《神农本草经·淫羊藿》还载其有“强志”之效。此后，淫羊藿的益智功效被广泛提及，《日华子本草·草部·仙灵脾》和《证类本草·卷八·淫羊藿》则明确提出淫羊藿可治“中年健忘”，《本草新编·淫羊藿》也认为其可“除中年健忘，益肾固筋，增力强志”。因此，淫羊藿为抗AD的有效药物。几年来，学术界从淫羊藿中鉴定出多种活性成份，其中淫羊藿苷抗AD的作用被广泛提及。研究证实淫羊藿苷对AD动物和细胞模型均具有较好的治疗作用，且具有一定的神经保护作用［16-17］。因此，本实验将研究淫羊藿苷抗AD的作用及作用机制。本研究水迷宫实验证实淫羊藿苷中、高剂量组可减少大鼠逃避潜伏期，并增加大鼠穿越平台次数和目标象限驻留时间，说明淫羊藿苷可改善Aβ1-42诱导的认知损伤。神经元和树突损伤为AD的重要病理特征，其形成与Aβ毒性、Tau蛋白磷酸化、氧化应激和神经炎症关系密切［18-20］。近年来，研究证实抑制AD脑内神经炎症可改善AD神经元和树突损伤，并缓解海马依赖性学习记忆障碍［11-12］。本研究首先通过尼氏染色和高尔基染色对AD模型大鼠神经元和树突进行检测，结果发现，模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度较空白组明显减少，而淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度较模型组增加，这说明淫羊藿苷可以改善Aβ1-42诱导的神经元和树突损伤。此外，课题组还检测了脑内促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平，结果证实淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白表达水平较模型组下调，这说明淫羊藿苷可抑制Aβ1-42诱导神经炎症。综合分析上述实验结果，课题组认为淫羊藿苷可通过抑制神经炎症改善AD神经元和树突损伤。RhoA为Rho亚家族之一，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。RhoA为调节细胞骨架肌动蛋白重要因子，并广泛分布于肝、肺等组织［21］。近年来，研究证实RhoA还可在脑和心脏表达，并证实其可通过影响Aβ代谢，突触发育、神经炎症等途径参与AD的病理进程［13，22-23］。ROCK1和ROCK2为RhoA下游的关键效应物，RhoA的活化可促使ROCK1和ROCK2的进一步激化，从而形成RhoA/ROCK信号转导途径。近年来，有研究发现RhoA/ROCK信号通路可调节AD神经炎症和突触可塑性，且该信号通路在AD脑内存在异常活化的表现［24-26］。本研究发现，对大鼠侧脑室注射Aβ1-42后，模型组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平明显高于空白组，这验证了文献报道AD脑内RhoA/ROCK信号通路异常活化的结论。在给予AD大鼠不同剂量的淫羊藿苷治疗后，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平下降，这说明淫羊藿苷可抑制AD脑内RhoA/ROCK信号通路的活化。综上，淫羊藿苷，尤其是中、高剂量淫羊藿苷，可改善AD认知功能障碍、神经元和树突损伤，其机制可能与其抑制脑内RhoA/ROCK信号通路有关。