达原饮始载于明代吴又可《温疫论》［1］，为治瘟疫、邪伏膜原的要方，由槟榔、厚朴、草果仁、知母、白芍、黄芩、甘草组成。方中槟榔能消能磨，行气散结，是为君药，厚朴和草果仁同为臣药，三者协力，直达巢穴，驱邪外出；知母、黄芩、白芍3味佐药清热滋阴，防辛燥之药耗散人体阴津；甘草作使药，用以调和诸药；全方共奏直达膜原、辟秽化浊之功效［2］。现代药理学研究表明，该方具有抗病毒、抗炎、解热、抗氧化等作用，临床上可用于治疗重症急性呼吸综合征（SARS）、肝炎、流感、发热、荨麻疹等［3］，在新型冠状病毒肺炎的治疗中也发挥了重要作用［4］。目前，关于达原饮化学成分的研究较少，且无立足于经典名方开发及系统梳理其物质基础的相关研究［5-6］。考虑到临床上达原饮使用的剂型为汤剂，故本实验将达原饮水煎液制备成冻干粉，利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）对其化学成分进行快速识别并分析不同化合物的裂解规律，以阐明达原饮的物质基础，为该经典名方中药复方制剂的开发与质量标准建立提供依据。1 材料Q-Exactive Orbitrap Plus型高分辨质谱仪和Vanquish UHPLC型超高效液相色谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公司），Alpha 1-4 LSC plus型真空冷冻干燥机（德国Christ公司），6102型百分之一电子天平（杭州友恒称重设备有限公司），MS105型十万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），YSH-60A型分体式中药煎药壶（汕头市蒙奇科技有限公司）。氢溴酸槟榔碱、知母皂苷BⅡ、野黄芩苷对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号分别为S16A11T111356、R14D9F77658、Z01M10X81701，纯度均≥98.0%），芒果苷、芍药苷、甘草苷、甘草酸铵、黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚、牡荆素对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别为111607-201704、110736-202145、111610-201908、110731-202021、110715-202122、110729-202015、111687-200602、110730-201915，纯度分别为98.1%、94.6%、96.2%、94.2%、99.0%、99.0%、99.8%、98.0%），去甲槟榔次碱、苯甲酰芍药苷、儿茶素、甘草素、汉黄芩苷、没食子酸、芍药内酯苷、新芒果苷、异芒果苷、原儿茶酸、异甘草素、对羟基苯甲酸对照品（成都普思生物科技股份有限公司，批号分别为PS020666、PS000157、PS012798、PS010083、PS011071、PS000688、PS011455、PS011463、PS010037、PS012560、PS001032、PS010297，纯度分别为98.0%、98.0%、98.5%、98.0%、98.0%、98.0%、95.0%、98.5%、98.0%、98.5%、98.0%、98.0%）。槟榔、知母、白芍、黄芩、甘草饮片（山东建联盛嘉中药有限公司，批号分别为20200501、20201001、20201001、20200401、20201101），厚朴、草果仁饮片（山东百味堂中药饮片有限公司，批号分别为201801、210901），经山东省中医药研究院靳光乾主任医师鉴定，七者基原分别为棕榈科植物槟榔Areca catechu干燥成熟种子，百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides的干燥根茎，毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora的干燥根，唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis的干燥根，豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis的干燥根和根茎，木兰科植物厚朴Magnolia officinalis的干燥干皮、根皮及枝皮，姜科植物草果Amomum tsao-ko的干燥成熟果实，符合2020年版《中华人民共和国药典》有关规定；水为屈臣氏蒸馏水，乙腈、甲醇、甲酸均为质谱纯，其他试剂均为分析纯。2 方法2.1　色谱条件Thermo Acclaim™ RSLC 120 C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.2 μm），流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~7.5 min，10%~19%A；7.5~12 min，19%~22.5%A；12~23 min，22.5%~27%A；23~27 min，27%~56%A；27~35 min，56%~84%A；35~36 min，84%~90%A），柱温30 ℃，流速0.3 mL·min-1，进样量3 μL。2.2　质谱条件加热电喷雾离子源（HESI），正、负离子扫描，扫描模式为一级质谱全扫描结合自动触发二级质谱扫描模式（Full MS/dd-MS2），扫描范围m/z 80~1 200，一级质谱分辨率70 000，二级质谱分辨率17 500，正离子模式下毛细管电压3.8 kV，负离子模式下毛细管电压3 kV，毛细管温度350 ℃，气化温度350 ℃，鞘气和辅助气均为氮气，鞘气流速45 arb，辅助气流速15 arb，透镜射频电压（S-Lens RF Level）55 V，阶梯碰撞能量20、40、60 eV。2.3　样品制备2.3.1　达原饮冻干粉《温疫论》原文记载“槟榔二钱、厚朴一钱、草果仁五分、知母一钱、芍药一钱、黄芩一钱、甘草五分。右用水二盅，煎八分，午后温服”。根据处方考证结果［7］，确定达原饮制备工艺为称取槟榔7.46 g、厚朴3.73 g、草果仁1.87 g、知母3.73 g、芍药3.73 g、黄芩3.73 g、甘草1.87 g，平行取4份，各加入水400 mL，武火煎煮约10 min沸腾后转文火煎煮约45 min，煎煮至约160 mL，趁热用4层300目滤布过滤，合并4份滤液，混匀，放至室温，将滤液转移至锡纸盒，-20 ℃预冻24 h，真空冷冻干燥75 h，即得。2.3.2　供试品溶液称取达原饮冻干粉约0.05 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加入70%甲醇20 mL，超声30 min（250 W，40 kHz），放冷，加70%甲醇定容，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.3.3　药材溶液槟榔粉碎过五号筛；白芍、黄芩、草果仁粉碎过四号筛；厚朴、知母、甘草粉碎过三号筛。分别精密称取槟榔粉末0.1 g，草果仁、厚朴、知母、白芍、黄芩、甘草粉末0.05 g，分别置于50 mL锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，超声30 min，放冷，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，得各药材溶液。2.3.4　对照品溶液取上述对照品各约3 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加70%甲醇使溶解并定容，摇匀，配制成质量浓度约为0.12 g·L-1的各对照品贮备液，备用；取各对照品贮备液适量，加70%甲醇稀释至质量浓度均约10 mg·L-1，经0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，得各对照品溶液。2.4　数据分析通过TraceFinder 5.0进行初步数据处理；与对照品保留时间（tR）及二级碎片离子比对，辨识部分化合物；通过查阅文献［8-44］建立达原饮7味组方药材的化学成分数据库，结合中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、ChemicalBook、PubChem数据库中化合物的信息，辨识误差（δ）在5 ppm（1 ppm=1×10-6）以内的达原饮化学成分，并通过与单味药材图谱比对，确认成分来源。3 结果3.1　达原饮化学成分分析采集供试品溶液的UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS数据，基峰离子色谱图（BPI）见增强出版附加材料。按照2.4项下方法进行定性分析，快速表征达原饮主要化学成分，结果共鉴定了161个化合物，见表1。10.13422/j.cnki.syfjx.20220946.T001表1达原饮化学成分的UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析Table 1Analysis of chemical constituents in Dayuanyin by UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS化合物tR/min加合方式m/z测定值m/z理论值δ/ppm分子式主要碎片离子名称来源10.67［M+H］+175.119 2175.119 01.24C6H14N4O2158、130、116、70精氨酸［8］A20.73［M+H］+128.070 9128.070 61.99C6H9NO282、81去甲槟榔次碱［9］1）槟榔30.76［M+H］+142.086 5142.086 31.44C7H11NO2124、96、81槟榔次碱［10］槟榔40.76［M+H］+136.062 0136.061 81.75C5H5N5119、109腺嘌呤［8］A50.78［M-H］-341.109 1341.107 83.70C12H22O11179、161蔗糖［8］A60.79［M+H］+116.071 0116.070 63.49C5H9NO270脯氨酸［8］A70.79［M+H］+118.086 6118.086 33.26C5H11NO286、72L-缬氨酸［9］A80.83［M+H］+130.086 6130.086 32.57C6H11NO284、56哌可酸［11］厚朴90.84［M-H］-133.013 2133.013 20.60C4H6O5115、71、59苹果酸［9］槟榔、厚朴、草果仁、白芍、黄芩、甘草100.86［M+H］+156.102 1156.101 91.31C8H13NO2124、113、81槟榔碱［9-10］1）槟榔110.93［M-H］-439.089 0439.090 5-3.24C16H24O12S277desbenzoylpaeoniflorin sulfonate［12］白芍121.14［M+H］+268.104 2268.104 00.60C10H13N5O4136、85腺苷［9］知母、白芍、黄芩131.16［M-H］-191.019 1191.018 62.62C6H8O7173、129、111、87、85枸橼酸［9］A141.22［M-H］-331.067 3331.066 03.89C13H16O10271、211、169、151、1251-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷［12］白芍151.22［M+HCOO］-405.140 5405.139 13.29C16H24O9359、197、179牡丹酮-1-O-β-D-葡萄糖苷或其异构体［13-14］白芍161.32［M-H］-345.119 2345.118 03.54C15H22O9183、123、933，4，5-trimethoxyphenyl-β-glucopyranoside或其异构体［15］厚朴171.39［M-H］-169.013 4169.013 11.72C7H6O5125、97没食子酸［8］1）白芍181.47［M+H］+166.086 4166.086 30.87C9H11NO2120、103苯丙氨酸［8］槟榔、草果仁、知母、黄芩、甘草191.79［M-H］-125.023 3125.023 30.00C6H6O3107、97、695-羟甲基糠醛［12］白芍202.23［M+HCOO］-389.145 9389.144 24.31C16H24O8343、181、161、151、109牡丹皮苷F或其异构体［12］白芍212.43［M-H］-153.018 4153.018 21.27C7H6O4109原儿茶酸［8］1）槟榔、草果仁222.51［M+H］+205.097 3205.097 20.91C11H12N2O2188、159、146、118L-色氨酸［10］槟榔、知母、黄芩、甘草232.73［M-H］-183.029 3183.028 82.90C8H8O5168、124没食子酸甲酯［12］白芍242.85［M+H］+265.154 8265.154 70.46C14H20N2O3177、145、117N-feruloylputrescine［16］厚朴252.92［M+H］+579.150 3579.149 70.98C30H26O12427、409、287、163、139、127原花青素B1或其异构体［17］槟榔263.10［M-H］-583.131 1583.129 42.98C25H28O16565、493、463、421、331、301新芒果苷［18］1）知母273.45［M］+314.175 1314.175 10.03C19H24NO3+269、237、209、175、143、107木兰箭毒碱［19-20］厚朴283.57［M-H］-495.151 3495.149 73.13C23H28O12465、333、281、177、165、137、93氧化芍药苷［17］白芍293.60［M-H］-407.098 8407.097 33.73C19H20O10317、299、287、257、245、193iriflpohenone-3-C-β-D-glucoside［18］知母303.64［M-H］-543.118 4543.116 73.17C23H28O13S421、259、213、121芍药苷亚硫酸酯［21］白芍313.77［M-H］-137.023 4137.023 30.87C7H6O3119、109、108、93对羟基苯甲酸1）知母323.94［M-H］-289.072 1289.070 74.90C15H14O6245、137、123、125、109儿茶素［9］1）槟榔、草果仁、白芍333.95［M+H］+139.039 2139.039 01.29C7H6O3121、111原儿茶醛［8］槟榔、草果仁、白芍344.27［M-H］-477.161 5477.160 32.65C20H30O13183、168、153kelampayoside A或其异构体［16］厚朴354.31［M-H］-577.135 7577.134 12.92C30H26O12451、425、407、289、245、161、125原花青素B2［10，17］槟榔364.80［M］+344.185 7344.185 60.28C20H26NO4+299、175、151、137N-甲基网叶番荔枝碱［22］厚朴374.91［M-H］-711.214 4711.213 11.87C32H40O18549、255、135liquiritigenin-7-O-glucoside-4ʹ-O-apiosyl-O-glucoside［21］甘草384.98［M-H］-179.034 3179.033 92.32C9H8O4135咖啡酸知母395.17［M］+342.170 3342.170 00.80C20H24NO4+297、282、265、237木兰花碱［19］厚朴405.29［M-H］-785.252 1785.249 92.81C35H46O20623、477、161木兰苷F［16］厚朴415.46［M-H］-421.078 3421.076 54.07C19H18O11403、331、301、271、259芒果苷［18］1）知母425.71［M+H］+291.086 4291.086 30.40C15H14O6207、179、165、147、139、123表儿茶素［10］槟榔、草果仁435.81［M+H］+319.117 7319.117 60.30C17H18O6197、151、105、77芍药内酯C［23］白芍445.82［M+HCOO］-525.161 8525.160 32.92C23H28O11479、283、121芍药内酯苷［17］1）白芍455.84［M+H］+330.170 1330.170 00.35C19H23NO4299、267、192、175、137reticuline［16］厚朴465.86［M-H］-593.150 5593.150 10.60C27H30O15547、473、383、353、297维采宁-2［19］甘草、知母475.89［M-H］-421.078 1421.076 53.69C19H18O11403、331、301、271、258异芒果苷［18］1）知母486.09［M+HCOO］-687.215 1687.213 12.91C29H38O16641、519、323、165、121a［12］白芍496.29［M-H］-771.236 4771.234 22.89C34H44O20609、477、161、133木兰苷H［19］厚朴506.38［M］+314.175 2314.175 10.32C19H24NO3+269、237、175、107莲心季铵碱［19，22］厚朴516.43［M-H］-785.252 2785.249 92.97C35H46O20623、477、161、133木兰苷B［16，19］厚朴526.56［M-H］-447.093 9447.092 23.76C21H20O11285、217、151、133、107木犀草苷［24］黄芩536.69［M-H］-479.156 3479.154 83.11C23H28O11449、357、327、165、135、121芍药苷［17］1）白芍546.96［M-H］-623.198 9623.197 02.97C29H36O15461、315、161、133木兰苷A［19］厚朴557.09［M-H］-609.182 6609.181 42.01C28H34O15447、315、161、133木兰苷L［19］厚朴567.40［M-H］-495.151 0495.149 72.68C23H28O12465、137ortho-oxypaeoniflorin［12］白芍577.85［M+H］+268.133 3268.133 20.35C17H17NO2251、219、191、189、165巴婆碱［22］厚朴587.87［M-H］-577.156 7577.155 22.60C27H30O14559、487、457、367、337、281chrysin-6，8-di-C-glucoside［25］黄芩598.00［M-H］-563.141 3563.139 53.14C26H28O14473、383、353、297、191夏佛塔苷［24］甘草、黄芩608.64［M-H］-549.161 9549.160 32.92C26H30O13429、297、255、213、135、119芹糖甘草苷［26］甘草618.91［M-H］-245.045 5245.044 44.49C13H10O5161、151、107、93鸢尾酚酮［27］知母628.98［M-H］-417.119 6417.118 03.74C21H22O9255、135、119、91甘草苷［26］1）甘草639.03［M］+356.185 8356.185 60.35C21H26NO4+311、281、280、265竹叶椒碱［28］厚朴649.05［M-H］-431.098 8431.097 33.52C21H20O10341、311、283、269、268牡荆素［26］1）知母659.08［M-H］-547.146 2547.144 62.97C26H28O13529、487、457、427、367、337、309、281、2676-C-葡萄糖基-8-C-阿拉伯糖基白杨素［29］黄芩669.25［M-H］-431.098 6431.097 33.15C21H20O10341、311、283、269异牡荆素［26］知母、甘草679.35［M-H］-463.088 8463.087 13.62C21H20O12287、153、119红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷［30］黄芩689.62［M-H］-631.167 5631.165 72.84C30H32O15613、509、491、399、313、169没食子酰芍药苷［12，17，21］白芍699.82［M-H］-623.199 0623.197 03.09C29H36O15461、315、179、161、133木兰苷M［19］厚朴709.92［M-H］-461.073 1461.071 53.62C21H18O12285、267、239、175、119、113野黄芩苷［30］1）黄芩719.99［M-H］-623.199 3623.197 03.68C29H36O15461、315、161、133毛蕊花糖苷［31］厚朴、黄芩7210.02［M-H］-547.146 1547.144 62.75C26H28O13487、457、427、367、337、309、281、2676-C-阿拉伯糖基-8-C-葡萄糖基白杨素［29］黄芩7310.36［M-H］-463.088 8463.087 13.56C21H20O12287、153、119异红花素-7-O-葡萄糖醛酸苷［30］黄芩7410.70［M-H］-939.111 8939.109 82.08C41H32O26769、469、393、169、1251，2，3，4，6-五-O-没食子酰-β-D-葡萄糖［12］白芍7511.14［M-H］-623.162 4623.160 72.81C28H32O16315、314、300、299异鼠李素-3-O-新橙皮苷［8］槟榔7611.17［M-H］-579.209 2579.207 23.37C28H36O13417、402、387、181、166、151syringaresinol-O-β-D-glucopyranoside［16］厚朴7711.20［M-H］-623.198 7623.197 02.70C29H36O15461、315、314、271、161、133异毛蕊花糖苷［31］黄芩7811.42［M+H］+625.176 9625.176 31.01C28H32O16317、302、85、71水仙苷［24］槟榔7911.47［M-H］-623.198 8623.197 02.80C29H36O15461、315、161木兰苷D［19］厚朴8012.03［M+H］+505.134 1505.134 10.07C24H24O12257、1375-羟基甘草苷元-6ʹ-乙酰基葡萄糖苷［32］甘草8112.03［M+H］+273.075 8273.075 70.22C15H12O5153、147、119、91柚皮素［26］甘草8212.05［M-H］-433.114 5433.112 93.64C21H22O10271、177、151、119、1075-羟基甘草苷［26］甘草8312.52［M-H］-479.156 2479.154 82.99C23H28O11357、195、121floralalbiflorin Ⅰ［17］白芍8412.66［M+HCOO］-979.476 7979.474 52.28C45H74O20933、771b［33］知母8512.69［M-H］-285.040 7285.039 44.83C15H10O6151、133、107木犀草素［34］黄芩8612.74［M+H］+282.148 5282.148 9-1.15C18H19NO2265、250、235降荷叶碱［22］厚朴8712.98［M+H］+266.117 7266.117 60.47C17H15NO2249、219、191、178anonaine［22］厚朴8812.99［M+HCOO］-981.492 4981.490 12.37C45H76O20935、773、611知母皂苷N［26］知母8913.19［M+HCOO］-981.492 6981.490 12.50C45H76O20935、773、611薤白苷J［26］知母9013.43［M-H］-475.088 5475.087 12.94C22H20O12299、284、255、175、113c［29］黄芩9114.07［M-H］-315.124 1315.122 74.47C18H20O5267、249厚朴木脂体B［19］厚朴9214.28［M-H］-549.162 1549.160 33.25C26H30O13255、135、119异甘草素-葡萄糖芹糖苷［26］甘草9314.29［M+H］+419.133 7419.133 70.17C21H22O9257、147、137新异甘草苷［26］甘草9414.46［M+H］+431.134 0431.133 70.79C22H22O9269、254、213芒柄花苷［8］甘草9514.49［M+H］+269.080 7269.080 8-0.43C16H12O4254、237、226、197芒柄花素［8］甘草9614.88［M+HCOO］-981.492 6981.490 12.50C45H76O20935、773、611、449知母皂苷E1［26］知母9714.88［M+HCOO］-1 127.551 51 127.548 03.11C51H86O241 081、757、647、595asparagoside G［33］知母9814.93［M+H］+433.113 4433.112 91.17C21H20O10271、253木蝴蝶苷A［31］黄芩9914.98［M-H］-287.056 4287.055 04.93C15H12O6161、135、125、67、655，7，2ʹ，6ʹ-四羟基黄烷酮［30］黄芩10014.98［M-H］-417.119 7417.118 04.10C21H22O9255、148、135、119异甘草苷［26］甘草10115.05［M-H］-445.078 0445.076 53.29C21H18O11269、175、113、85黄芩苷［30］1）黄芩10215.08［M-H］-269.045 7269.044 44.72C15H10O5251、241、223、195、169芹菜素［24］黄芩10315.66［M+H］+314.138 6314.138 7-0.33C18H19NO4177、145、121、117N-反式阿魏酰酪胺［26］知母10415.85［M-H］-417.119 4417.118 03.29C21H22O9255、135、119、91新甘草苷［35］甘草10515.88［M-H］-259.061 3259.060 14.79C14H12O5165、149、97、93、892，6，4′-三羟基-4-甲氧基二苯甲酮［26］知母10616.15［M-H］-255.066 4255.065 24.61C15H12O4153、135、119、91甘草素1）甘草10716.72［M-H］-447.093 7447.092 23.36C21H20O11271、253、243、113二氢黄芩苷［30］黄芩10817.46［M+HCOO］-1 111.552 01 111.553 1-0.98C51H86O231 065、919、757、595gurilioside H［33］知母10917.64［M+H］+287.091 4287.091 4-0.10C16H14O5167、152、124异樱花亭［33］黄芩11017.79［M-H］-919.492 0919.489 72.49C45H76O19757、595、433知母皂苷BⅡ［26］1）知母11117.83［M-H］-477.103 9477.102 82.30C22H22O12301、283、273三羟基-甲氧基黄烷酮-O-葡萄糖醛酸苷［30］黄芩11218.09［M-H］-919.491 7919.489 72.17C45H76O19757、595、433新知母皂苷BⅡ［36］知母11319.02［M+H］+1 065.549 41 065.547 61.71C51H84O23741、579、417、399、273、255知母皂苷BⅣ［33］知母11419.22［M+H］+431.097 4431.097 30.39C21H18O10255、153白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷［37］黄芩11519.40［M-H］-283.061 1283.060 13.43C16H12O5268、239、211芫花素［26］黄芩11619.40［M-H］-459.093 8459.092 23.47C22H20O11283、268、175、113千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷［37］黄芩11720.51［M-H］-445.078 0445.076 53.29C21H18O11269、241、169、113芹菜素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷［29］黄芩11821.18［M+H］+315.085 9315.086 3-1.28C17H14O6300、285、257黄芩黄酮Ⅰ［38］黄芩11921.22［M-H］-459.093 8459.092 23.47C22H20O11283、268、239、175、163、113、85汉黄芩苷［30］1）黄芩12021.96［M-H］-299.129 2299.127 84.66C18H20O4239、133、93厚朴木脂体C［19］厚朴12122.06［M+HCOO］-963.481 1963.479 51.60C45H74O19917、755知母皂苷D［26］知母12223.58［M+HCOO］-629.188 4629.186 53.08C30H32O12553、431、165、121苯甲酰芍药苷［12］1）白芍12324.59［M-H］-629.188 2629.186 52.78C31H34O14121.028 4牡丹皮苷J或牡丹皮苷B［39］白芍12425.64［M-H］-241.086 9241.085 94.10C15H14O3223、197、133、157、141、95厚朴三酚［19］厚朴12526.21［M-H］-983.450 8983.448 22.62C48H72O21821、351、193甘草皂苷A3［21］甘草12626.41［M-H］-901.481 3901.479 12.35C45H74O18739、577、101知母皂苷BⅢ［36］知母12726.58［M-H］-879.403 2879.400 92.63C44H64O18351、193、11322β-acetoxyglycyrrhizin［21，26］甘草12826.70［M+H］+469.331 5469.331 20.52C30H44O4451甘草内酯［32］甘草12926.90［M-H2O+H］+741.442 5741.442 00.72C39H66O14417、399、381、271、253知母皂苷Ⅰ［33］知母13026.92［M-H］-329.233 6329.232 34.04C18H34O5229、211、183、171、139d［33］知母13127.15［M-H］-255.066 3255.065 24.41C15H12O4153、135、119、91异甘草素［34］1）甘草13227.27［M+H］+839.406 4839.406 00.47C42H62O17663、487、469、451甘草皂苷G2或其异构体［21，32］甘草13327.51［M-H］-755.422 3755.421 21.41C39H64O14593、113知母皂苷G［26］知母13427.63［M+H］+839.406 3839.406 00.40C42H62O17663、487、469、451甘草皂苷G2或其异构体［21，32］甘草13527.65［M-H］-821.397 6821.395 42.71C42H62O16351、193、113甘草酸［34］1）甘草13627.91［M-H］-279.102 7279.101 64.01C18H16O3237、210厚朴醛B［28］厚朴13727.98［M-H］-807.418 1807.416 12.48C42H64O15351、193甘草皂苷B2［40］甘草13827.98［M+HCOO］-801.429 0801.426 72.88C39H64O14755、593知母皂苷Ⅲ［26］知母13928.04［M-H］-821.397 7821.395 42.80C42H62O16647、351乌拉尔甘草皂苷B或甘草皂苷H2、K2［41］甘草14028.48［M+HCOO］-801.429 1801.426 72.95C39H64O14755、593、448、288、161知母皂苷AⅡ［26］知母14128.58［M-H］-823.413 5823.411 12.90C42H64O16351、193、175、113乌拉尔甘草皂苷C或甘草皂苷J2甘草14228.65［M-H］-279.139 1279.138 04.10C19H20O2261、233、210、2076ʹ-O-甲基和厚朴酚［42］厚朴14328.71［M-H］-373.093 1373.091 83.45C19H18O8358、343、328、300、285、194、169黄芩黄酮Ⅱ［24］黄芩14428.71［M-H］-353.103 2353.102 03.61C20H18O6-甘草异黄烷酮［26］甘草14528.74［M-H］-351.087 6351.086 33.63C20H16O6336、283、265、199甘草异黄酮B［31］甘草14628.91［M-H］-367.118 9367.117 63.42C21H20O6309、297、281、269甘草香豆素［21］甘草14729.03［M+H］+357.133 6357.133 31.05C20H20O6357乌拉尔宁［34］甘草14829.32［M+H］+285.075 8285.075 70.32C16H12O5270、242、179、168、105汉黄芩素［30］黄芩14929.34［M-H］-353.139 8353.138 44.11C21H22O5338、323、295、283甘草新木脂素［43］甘草15029.37［M-H］-353.103 2353.102 03.53C20H18O6297、284、266甘草异黄酮A［26］甘草15129.44［M-H］-339.124 0339.122 73.80C20H20O5324、309、281、269甘草香豆酮［43］甘草15229.66［M+H］+355.117 7355.117 60.27C20H18O6299甘草黄酮醇［41］甘草15329.77［M+HCOO］-785.434 1785.431 82.91C39H64O13739、577知母皂苷AⅢ［26］知母15429.79［M+H］+579.389 6579.389 10.77C33H54O8435、417、273、255知母皂苷AⅠ［33］知母15530.01［M-H］-365.103 2365.102 03.41C21H18O6307、295、207甘草酚［26］甘草15630.26［M+H］+167.070 4167.070 30.77C9H10O3149、121、95丹皮酚［8］黄芩、白芍15730.44［M-H］-265.123 7265.122 35.26C18H18O2250、249、224、223、209、197和厚朴酚［19］1）厚朴15830.97［M-H］-351.087 8351.086 34.23C20H16O6336、321、283、199半甘草异黄酮B［31］甘草15931.41［M-H］-281.118 6281.117 24.76C18H18O3164和厚朴新酚［44］厚朴16031.47［M-H］-265.123 6265.122 34.88C18H18O2247、223厚朴酚［19］1）厚朴16132.33［M+H］+279.232 0279.231 90.37C18H30O2261、109、95、81、67α-亚麻酸［8］A注：1）与对照品比对确认的成分；a.isomaltopaeoniflorin或6-O-β-D-glucopyranosylalbiflorin；b.25（27）-ene-timosaponin N；c.scutevulin-7-O-β-D-glucutonide；d.trihydroxy-octadecaenoic acid；A（来源列）.所有药材共有3.2　达原饮主要类别化合物裂解规律研究3.2.1　生物碱类达原饮生物碱类多于正离子模式下识别得到，主要来源于槟榔和厚朴，分别为化合物2、3、10、24、27、36、39、45、50、57、63、86、87、103。以化合物10、27为例进行裂解规律分析，化合物10为吡啶类生物碱，准分子离子峰m/z 156.102 1 ［M+H］+，MS/MS碎片离子有m/z 124.075 6 ［M+H-CH3OH］+、113.060 1 ［M+H-C2H5N］+、81.034 2 ［M+H-HCOOCH3-CH3］+，根据文献［9-10］、PubChem数据库及对照品比对，确定化合物10为槟榔碱，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。化合物27为苄基异喹啉类生物碱，容易发生α裂解，准分子离子峰为m/z 314.175 1 ［M］+，MS/MS碎片离子有m/z 269.117 6 ［M-（CH3）2NH］+、237.091 1 ［M-（CH3）2NH-CH3OH］+、209.095 9 ［M-（CH3）2NH-CH3OH-CO］+、175.075 5 ［M-（CH3）2NH-C6H6O］+、143.049 3 ［M-（CH3）2NH-C6H6O-CH4O］+、107.049 7 ［M-C12H17NO2］+，根据文献［19-20］信息，初步推断该化合物为木兰箭毒碱，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。3.2.2　黄酮及其苷类在达原饮中共鉴别出黄酮类化合物60个，包括二氢黄酮类、查耳酮类、黄酮类、异黄酮类等，易发生逆狄尔斯-阿尔德反应（RDA反应）裂解，主要来源于知母、黄芩、甘草，分别为化合物26、29、32、37、41、42、46、47、52、58~62、64~67、70、72、73、75、78、80~82、85、90、92~95、98~102、104~107、109、111、114~119、131、143~145、147、148、150~152、155、158。以化合物70、131为例进行裂解规律分析，化合物70的准分子离子峰m/z 461.073 1 ［M-H］-，MS/MS碎片离子有m/z 285.040 9 ［M-H-C6H8O6］-、267.029 8 ［M-H-C6H8O6-H2O］-、239.035 2 ［M-H-C6H8O6-H2O-CO］-、175.024 2 ［M-H-C6H8O6-H2O-C6H4O］-，根据文献［30］及对照品比对，确定其为野黄芩苷，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。化合物131为查耳酮类，准分子离子峰为m/z 255.066 3 ［M-H］-，MS/MS碎片离子有m/z 135.007 7 ［M-H-C8H8O］-、119.049 0 ［M-H-C7H4O3］-、91.017 6 ［M-H-C9H8O3］-，参考文献［34］并与对照品比对，确定其为异甘草素，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。化合物144的准分子离子峰为m/z 353.103 2 ［M-H］-，未检测到二级碎片，通过与药材图谱比对，确定其来源于甘草，参考药材碎片离子及文献［26］，推测其为甘草异黄烷酮。3.2.3　萜类达原饮中鉴别得到的萜类化合物包括单萜苷类14个（化合物11、15、20、28、30、43、44、48、53、56、68、83、122、123）和环烯醚萜类2个（化合物71、77），主要来源于白芍。以化合物30为例，其准分子离子峰为m/z 543.118 4 ［M-H］-，MS/MS碎片离子有m/z 421.080 6 ［M-H-C7H6O2］-、259.028 3 ［M-H-C7H6O2-C6H10O5］-、213.022 0 ［M-H-C7H6O2-C6H10O5-C2H6O］-、121.028 4 ［M-H-C16H22O11S］-，根据文献［21］信息，推断其为芍药苷亚硫酸酯，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。3.2.4　皂苷类达原饮皂苷类主要包括三萜皂苷和甾体皂苷2种，易失去糖基、H2O、CH3及侧链基团，来源于知母、甘草，包括化合物84、88、89、96、97、108、110、112、113、121、125~129、132~135、137~141、153、154。甾体皂苷类以化合物154为例，其在正离子模式下的准分子离子峰为m/z 579.389 6 ［M+H］+，特征碎片离子有m/z 435.274 9 ［M+H-C8H16O2］+、417.334 2 ［M+H-Glc］+（Glc表示葡萄糖基）、273.221 6 ［M+H-Glc-C8H16O2］+、255.210 9 ［M+H-Glc-C8H16O2-H2O］+，根据文献［33］推测该化合物为知母皂苷AⅠ，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。三萜皂苷类以化合物125为例，其在负离子模式下的准分子离子峰为m/z 983.450 8 ［M-H］-，碎片离子有m/z 821.398 6 ［M-H-Glc］-、351.057 3 ［M-H-C36H56O9］-、193.034 6 ［M-H-C36H56O9-C6H6O5］-，参考文献［21］初步推断该化合物为甘草皂苷A3，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料。3.2.5　苯丙素类达原饮中鉴别得到的苯丙素类主要为木脂素类，来源于厚朴，裂解过程易失去烯丙基、咖啡酰基、CO、糖基等，个别为香豆素类，包括化合物40、49、51、54、55、69、76、79、91、120、124、136、142、146、149、157、159、160。以化合物54、157为例进行裂解规律分析，化合物54的准分子离子峰为m/z 623.198 9 ［M-H］-，MS/MS碎片离子有m/z 461.166 7 ［M-H-C9H6O3］-、315.108 4 ［M-H-C9H6O3-C6H10O4］-、161.023 5 ［M-H-C20H30O12］-、133.028 5 ［M-H-C21H30O13］-，根据文献［19］推测该化合物为木兰苷A，其裂解途径及MS/MS图谱见增强出版附加材料，其他木兰苷类成分均有类似裂解规律。化合物157为联苯型新木脂素，其在负离子模式下的准分子离子峰为m/z 265.123 7 ［M-H］-，MS/MS碎片离子有m/z 249.091 9 ［M-H-CH4］-、224.084 0 ［M-H-C3H5］-、223.076 3 ［M-H-C3H6］-、209.060 9 ［M-H-CH4-C3H4］-、197.060 3 ［M-H-C3H6-C2H2］-，参考文献［19］并与对照品比对，确定化合物157为和厚朴酚，其裂解途径见图1。10.13422/j.cnki.syfjx.20220946.F001图1和厚朴酚在负离子模式下的裂解途径分析Fig. 1Fragmentation pathways of honokiol in negative ion mode3.2.6　有机酸类从达原饮中共鉴别出有机酸类16种，包括化合物1、6~9、13、17、18、21、22、31、33、38、130、156、161，此类化合物在裂解过程中易失去CO、H2O、CO2和NH3。以化合物13为例进行裂解规律分析，其准分子离子峰为m/z 191.019 1 ［M-H］-，通过丢失水、羧基、CH3得到MS/MS碎片离子m/z 173.008 5 ［M-H-H2O］-、129.018 3 ［M-H-H2O-CO2］-、111.007 6 ［M-H-2H2O-CO2］-、87.007 5 ［M-H-CH4-2CO2］-、85.028 2 ［M-H-H2O-2CO2］-，参考文献［9］及数据库信息，推测该化合物为枸橼酸。3.2.7　其他从达原饮中还鉴别了一些其他类成分，包括鞣质类（化合物14、23、25、35、74）、核苷类（化合物4、12）、糖类（化合物5）、酚苷（化合物16、34）及糠醛类化合物（化合物19）。以化合物14为例分析鞣质类成分裂解规律，其准分子离子峰为m/z 331.067 3 ［M-H］-，碎片离子有m/z 271.046 6 ［M-H-C2H4O2］-、211.024 6 ［M-H-C4H8O4］-、169.013 4 ［M-H-C6H10O5］-、151.002 7 ［M-H-C6H10O5-H2O］-、125.023 4 ［M-H-C6H10O5-CO2］-，根据文献［12］推测该化合物为1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。4 讨论达原饮是收载于《古代经典名方目录（第一批）》中100首经典名方之一，古代用于清瘟，现仍在临床广泛应用［3，45-46］。本课题组前期利用UPLC技术考察了提取溶剂（50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇、乙醇）、提取方式（超声30 min、回流30 min）、提取时间（20、30、40 min）对供试品溶液制备的影响，以峰形、峰个数、分离度等评价指标，结果表明70%甲醇超声提取30 min的方法较优。在此基础上，本研究建立了UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS检测达原饮中化学成分的方法，再次考察了供试品溶液制备所用提取溶剂（50%甲醇、70%甲醇、水），结果发现70%甲醇提取时色谱峰更多、分离度更好，故选择70%甲醇为提取溶剂。预试验还对正离子模式下的毛细管电压（3.0、3.8、4.0 kV）及阶梯碰撞能量（20、40、60 eV和25、35、45 eV）进行考察，根据基线平稳度、峰型、灵敏度及二级碎片比对，最终选择正离子模式下的毛细管电压3.8 kV，阶梯碰撞能量20、40、60 eV。本研究快速辨识所得达原饮中化合物包括生物碱类、黄酮类、萜类、皂苷类、苯丙素类、有机酸及其他类。槟榔碱等生物碱为君药槟榔的主要活性成分，具有抗菌、驱虫、抗炎、抗病毒等作用［47-48］。厚朴所含厚朴酚、和厚朴酚等成分可抑制炎症通路表达，发挥抗氧化及抗炎作用［49］。黄酮类化合物数量较多，具有抗炎、抗氧化、抑菌、解热等作用［50］，如异甘草素具有高于槲皮素的抗氧化作用，能抑制细胞凋亡［51］；甘草素可以通过免疫反应抑制白色念珠菌［52］；黄芩苷可以抑制炎症因子表达，减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤，有显著抗炎作用［53］。此外，YI等［54］研究发现甘草三萜类成分能有效抑制新型冠状病毒感染，并报道甘草皂苷A3可以通过靶向非结构蛋白7（NSP7）降低新型冠状病毒活性。本研究首次利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS采集达原饮在正、负离子模式下的色谱图，通过与对照品、数据库及相关文献比对准分子离子峰、碎片离子等信息来鉴定化合物，分析达原饮复方与各单味药材的MS数据，实现了161个化合物的表征和归属，较为全面地阐明了该方的化学成分，涵盖了7味组方药材，为达原饮中药复方制剂的开发及质量控制奠定了良好的基础。然而，由于中药复方成分复杂，尚存在部分响应较好的色谱峰未被表征，有待于进一步研究；在被指认出的成分中，源自草果的成分较少，可能是因其主要活性成分挥发油在提取过程中易损失及UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的局限性，后期将采用气相色谱法等技术研究达原饮的挥发性成分，以完善其物质基础研究。