肾纤维化（RF）是多种慢性肾脏疾病（CKD）发展至终末期肾衰竭的病变过程［1］，主要病理基础包括肾小管萎缩和细胞外基质（ECM）的过度沉积［2］。据调查，全球10%~14%的人口深受肾纤维化困扰，死亡率极高［3］。肾纤维化疾病的潜在机制复杂，目前尚无针对肾纤维化疾病的有效治疗方法［4］。近年来，越来越多的研究表明肾纤维化疾病的发生发展与肠道菌群密切相关。CKD可引起肠道菌群的改变，而肠道菌群失调又可导致CKD进展及并发症的发生，从而导致恶性循环［5］。研究表明肠道中的棒状杆菌、苜蓿菌、乳酸菌群是肾纤维化的关键靶向菌群，其生物学功能与炎症、免疫和肾脏排泄有关［6］。从中医角度来看，肾与肠关系密切，肾开窍于二阴，主司二便，中医认为肾阳与肾阴在大小便的生成及排泄过程中起到至关重要的作用，肾精不足，则阴阳无从化生，阳虚阴结是便秘发病的主要原因，若肠道功能失调，浊液糟粕不能排出体外，以及病理产物蓄积，也会反过来影响肾的功能。有学者研究发现胎儿粪便菌属与母体肠道菌群菌属高度相似［7］，从中西医角度来看，肠道菌群同肾精一样，都是人体禀赋于先天之精，并与后天之精结合为一种精微物质，对调节人体正常生理功能起着至关重要的作用，所以可以理解为肠道菌群为肾精的一种实质形态存在［8］。通过对肠道菌群的调整，可以改善肠道本身的健康，同时也能对肾脏有促进作用。终末期肾脏病患者结肠中厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌（Actinomycetes）、变形杆菌门（Proteobacteria）增加，而双歧杆菌（Bifidobacterium）、乳杆菌（Lactobacillus）等减少，证实了胃肠道微生物的动态变化或数量偏倚可诱发或加重肾脏纤维化进程［9］。中药复方制剂三七注射液可以恢复肠道菌群物种丰度及多样性（减少肠球菌、肠杆菌数量，增加乳酸杆菌、双歧杆菌、总厌氧菌数量）、修复肠黏膜屏障损伤等作用的发挥与抑制Toll样受体4（TLR4）信号通路活化有关，并进一步证实恢复菌群失衡或重建生物多样性是预防或阻断肾纤维化的关键所在［10］。研究证实加味益肾活血方可通过升高部分菌群浓度（如乳酸杆菌、双歧杆菌属）、同时降低部分菌群浓度（如大肠埃希菌、粪肠球菌属）来改善CKD患者肠道微生态紊乱状态［11］。因此，中医药可以通过调节肠道菌群改善肾纤维化进程。课题组前期研究发现经方大黄䗪虫丸（DHZCW）可以抑制多种脏器纤维化前期的炎症反应，减少ECM的过度沉积，缓解纤维进程［12-13］。目前，DHZCW通过调节肠道菌群而起到抑制纤维化的研究鲜有报道，本次实验在前期研究的基础上，进一步采用高通量测序16S rDNA技术研究DHZCW对腺嘌呤诱导的肾纤维化大鼠肠道菌群的影响，为深入揭示DHZCW治疗肾纤维化的生物学机制提供更加全面的实验证据。1 材料1.1　动物36只SPF级雄性SD大鼠，体质量180~200 g，6周龄，购自成都达硕实验动物有限公司，许可证号SYXK（川）2020-124。所有大鼠均在室温（23±2） ℃、相对湿度40%~60%的条件下饲养，常规12 h光/暗循环。每日更换饮水和饲料，自由饮食。本研究中的动物实验已经得到成都中医药大学实验动物伦理委员会批准。1.2　药物与试剂DHZCW（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号Z11020002）；腺嘌呤（上海麦克林生化科技股份有限公司，C10921807）；吡非尼酮片（北京凯因科技股份有限公司，国药准字H20193259）；尿素（Urea）、尿肌酐（Crea）、胱抑素C（Cys C）、24小时尿蛋白（24 h TP）、尿素氮（BUN）（中国迈瑞医疗国际有限公司，批号分别为141321009、141122017、147222006、148622003，其中BUN无批号）；苏木素-伊红（HE）染液套装（北京雷根生物技术有限公司，批号DH0020）；马松（Masson）染液套装（赛维尔生物科技有限公司，批号G1006）；α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）抗体（美国Affinity公司，货号分别为AF1032、AF7001、AF5457）；辣根过氧化物酶（HRP）标记山羊抗兔免疫球蛋白（Ig）G（中国Solarbio公司，货号SE134）；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH，美国Abclonal公司，货号A19056）；Pusion Hot start flex 2X Master Mix（上海仪涛生物仪器有限公司，货号M0536L）；Qubit dsDNA HS Assay Kit（500 T）（美国英杰生命技术有限公司，货号Q32854）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，成都市科隆化学品有限公司，批号CAS：9004-32-4）。1.3　仪器Mini-PROTEAN型垂直电泳槽转移系统（美国Bio-Rad公司）；Allegra X-30R型高速离心机［贝克曼库尔特国际贸易（上海）有限公司］；μQuant型光谱仪（美国伯腾仪器有限公司）；ChemiScope 6100化学发光成像系统（上海勤翔科学仪器有限公司）；BS360S型全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；A200PCR基因扩增仪（杭州朗基科学仪器有限公司）；BX51型显微镜（日本Olympus公司）。2 方法2.1　药物制备DHZCW胃内给药前12 h，用超纯水研磨DHZCW，分别制成高、中、低浓度的药液，储存于4 ℃；Adenine腺嘌呤胃内给药造模时用0.5%的CMC-Na作为溶媒配置成为悬液，以250 mg·kg-1剂量灌胃；吡非尼酮片（200 mg·kg-1）在胃内给药前12 h，用超纯水配置成药液备用。2.2　动物分组、造模及干预将36只SD大鼠随机分为6组：空白（NC）组、模型（MC）组、DHZCW高、中、低剂量组（0.168、0.084、0.042 g·kg-1）和吡非尼酮组（PC组，200 mg·kg-1）。肾纤维化模型由腺嘌呤诱导，除NC组之外，其余各组均给予腺嘌呤混悬液250 mg·kg-1灌胃造模28 d，再开始每天灌胃给药，无菌环境收集尿液检测肾功能相关指标，收集粪便进行16S rDNA测序，连续给药4周后处死大鼠，收集肾脏样本做病理观察及纤维化相关蛋白定量分析［14-15］。2.3　HE、Masson染色观察肾脏组织病理变化统一取左肾组织，用4%多聚甲醛固定液按1∶20的比例将组织固定，常温保存，然后经脱水、透明、石蜡包埋、切片处理，根据检测试剂盒制造商的说明进行HE和Masson染色，评估组织学损伤。使用显微镜拍摄图像，观察各组大鼠肾组织病理变化。2.4　全自动生化分析仪检测肾功能指标BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP在无菌环境下，代谢笼中收集大鼠尿液，2 000 r·min-1离心10 min（离心半径6 cm，下同），取上清装入离心管中放于-80 ℃中保存。使用全自动生化分析仪测肾功能指标BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量。2.5　蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达取肾脏组织提取总蛋白，加入RIPA裂解液裂解，4 oC、12 000 r· min-1离心10 min，BCA试剂盒检测蛋白的浓度。电泳分离（恒压100 V）15 min，200 mA恒流湿转至PVDF膜。5%脱脂奶粉轻摇封闭2 h，TBST洗膜3次，稀释一抗（α-SMA，1∶1 000；ColⅠ，1∶500；ColⅢ，1∶500）和GAPDH（1∶5 000），4 oC摇床孵育过夜。次日，用TBST洗膜3次，每次5 min。将膜放入稀释好的二抗（1∶10 000）中，室温摇床孵育2~3 h。将ECL发光液A、B试剂按等体积混合均匀后滴到PVDF膜上反应1 min，暗室曝光，以β-actin条带灰度值为参考，Image J软件数据分析，计算α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白的相对表达量。2.6　粪便样本采集与16S rDNA法测序大鼠的粪便于干预的最后1周采集。大鼠放于无菌代谢笼上，将刚排出的粪便样品收集于无菌的冻存管中（若无粪便排出，可用消毒棉签轻轻刺激大鼠的腹部，即可排便），然后立即放入液氮中冷冻30 min后转移至-80 ℃冰箱进行保存。对粪便样本进行总DNA的提取与检测，并对目标片段V3-V4区：F（5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'），R（5'-GACTA CHVGGGTATCTAATCC-3'），长度464 bp，用聚合酶链式反应（PCR）扩增，随后回收扩增产物并进行纯化、荧光定量、使用Illumina平台进行双端测序，然后利用overlap将双端数据进行拼接、质控、嵌合体过滤、去噪，最终通过QIIME2获得ASV（feature）特征表及特征序列并使用R-3.4.4软件进行物种差异性分析等。2.7　统计学分析数据采用SPSS 25.0软件进行分析。计量资料以x¯±s表示。组内比较，若符合正态分布采用配对t检验，非正态分布采用秩和检验。组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），方差齐则采用最小显著性差异法（LSD）检验，方差不齐则采用Tamhane's T2检验。以P0.05为差异具有统计学意义。3 结果3.1　对大鼠肾脏组织病理学的影响HE染色结果显示，NC组结构正常，未见明显病理损伤改变。MC组有血管周围大量淋巴细胞浸润，淋巴细胞血管套形成，同时见肾内多处矿化灶。纤维化改变，小管内蛋白管型，肾间质纤维组织增生，肾小球囊壁增厚。DHZCW高剂量组和PC组组织结构基本正常，未见明显病理损伤改变。DHZCW中剂量组可见纤维化改变，小管内蛋白管型，肾间质纤维组织增生，肾小球囊壁增厚，DHZCW低剂量组局部纤维化改变，小管内蛋白管型，肾间质纤维组织增生，肾小球囊壁增厚，有血管周围大量淋巴细胞浸润，淋巴细胞血管套形成。Masson染色结果显示，NC组未见蓝染，无胶原沉积。MC组蓝染明显，肾脏组织样本有严重的胶原沉积，呈大范围纤维化。DHZCW高剂量、PC组蓝染面积明显减少，胶原沉积减轻。DHZCW中剂量组相对模型组蓝染面积变小，低剂量组相对中剂量组蓝染面积较大，仍有较严重的胶原沉积。见图1、表1。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F001图1DHZCW对肾纤维化大鼠肾脏组织病理学的影响 （×100）Fig.1Effect of DHZCW on renal histopathology in rats with renal fibrosis （×100）注：A.正常组；B.模型组；C~E.DHZCW高、中、低剂量组；F.PC组（图2同）10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.T001表1DHZCW对肾纤维化大鼠肾脏组织胶原纤维的影响 （x¯±s，n=6）Table 1Effect of DHZCW on collagen fibers in renal tissue of rats with renal fibrosis （x¯±s，n=6）组别剂量/g·kg-1胶原纤维面积百分比%NC组11.557±3.876MC组38.356±5.5321）DHZCW高剂量组0.16817.282±4.8152）DHZCW中剂量组0.08418.556±5.1882）DHZCW低剂量组0.04221.400±2.6772）PC组0.20021.750±0.5422）注：与空白组比较1）P0.01；与模型组比较2）P0.013.2　对大鼠尿液BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP的影响与NC组比较，MC组的BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量显著升高（P0.01）；与MC组比较，DHZCW高、中、低剂量组和PC组BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP均明显降低（P0.05，P0.01），且在0.042~0.168 g·kg-1的剂量范围内，DHZCW3个剂量组呈现出明显的剂量依赖性，3个剂量组中DHZCW高剂量组效果最佳。见表2。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.T002表 2DHZCW对肾纤维化大鼠尿液中BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP含量的影响 （x¯±s，n=6）Table 2Effect of DHZCW on BUN，Urea，Crea，Cys C，24 h TP ccontent in urine of rats with renal fibrosis （x¯±s，n=6）组别剂量/g·kg-1BUN/mmol·L-1Urea/mmol·L-1Crea/μmol·L-1Cys C/mg·L-124 h TP/g·L-1NC组61.559±3.399132.100±7.2935 106.867±63.2440.512±0.0231.450±0.187MC组293.404±9.5201）629.623±20.4291）11 633.883±608.9771）1.277±0.0531）5.800±0.1411）DHZCW高剂量组0.16895.742±8.3673）205.455±17.9553）6 170.067±244.5973）0.773±0.0383）2.433±0.1633）DHZCW中剂量组0.084179.151±3.3143）384.443±7.1123）8 826.733±126.1573）1.043±0.0922）4.367±0.1753）DHZCW低剂量组0.042220.597±6.4543）473.385±13.8503）10 239.533±553.7162）1.133±0.0612）5.417±0.2323）PC组0.200144.685±7.5003）310.482±16.0953）7 554.117±368.1863）0.873±0.0263）3.233±0.2733）注：与空白组比较1）P0.01；与模型组比较2）P0.05，3）P0.01（表3同）3.3　对大鼠肾脏α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达的影响与空白组比较，模型组大鼠α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达量升高（P0.01）；与模型组比较，DHZCW高剂量组及PC组α-SMA蛋白表达显著降低（P0.01），DHZCW中、低剂量组α-SMA、ColⅢ蛋白表达均显著降低（P0.01），DHZCW中剂量组ColⅠ蛋白表达明显降低，差异具有统计学意义（P0.05）。见表3、图2。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.T003表3DHZCW对肾纤维化大鼠肾组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达的影响 （x¯±s，n=3）Table 3Effect of DHZCW on α-SMA，ColⅠ and ColⅢ protein expression in renal fibrosis rats （x¯±s，n=3）组别剂量/g·kg-1α-SMA/GAPDHColⅠ/GAPDHColⅢ/GAPDHNC组0.083±0.0340.205±0.0920.236±0.053MC组0.912±0.0541）1.208±0.4901）0.910±0.0611）DHZCW高剂量组0.1680.261±0.0273）0.437±0.1823）0.382±0.0903）DHZCW中剂量组0.0840.391±0.0473）0.649±0.2372）0.543±0.0163）DHZCW低剂量组0.0420.552±0.1023）0.812±0.2950.643±0.0183）PC组0.2000.246±0.0363）0.445±0.1874）0.379±0.0973）10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F002图2肾纤维化大鼠纤维化相关蛋白表达电泳Fig.2Electrophoresis of fibrosis-related protein levels in rats with renal fibrosis3.4　肠道微生物组分析基于前述肾功能指标及病理结果可以看出DHZCW 3个剂量组中，DHZCW高剂量组效果最好，故肠道微生物分析中以NC、MC、DHZCW和PC组4个组进行分析。3.4.1　质控分析各样本稀释曲线shannon指数趋于平缓，表明肠道菌群α多样性在四组间无统计学差异；coverage指数趋近于1，表明该测序结果基本可以反应样本的真实情况。对不同处理下的样本采用主成分分析（PCA）、主坐标分析（PCoA）的β多样性分析肠道菌群群落变化。PCA和PCoA都是研究数据相似性或差异性的可视化方法，PCA结果显示，NC组与其他组距离较远且椭圆没有交集，说明NC组与其他组肠道菌群分布存在显著差异，反映出腺嘌呤、大黄䗪虫丸、吡非尼酮都能改变肠道菌群。从PCoA来看，R2=0.634、P0.05，说明4组样本在相似性上存在显著的差异。见增强出版附加材料。3.4.2　对ASV的影响群落丰富度指数chao 1指数估算出各组物种总数：DHZCW组最高，NC组次之，PC组最后。在各组的肠道微生物组中，328个为4组共有，有4 670个ASV为DHZCW组独有数量最多，其次为NC组独有4 589个，再次为MC组特有的4 068个ASV，最后为PC组独有3 610个。见图3。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F003图3不同干预情况对ASV的影响Fig.3Effect of different interventions on ASV3.4.3　肠道菌群特征在门水平上将各个菌群排序，选择相对丰度排名前5的进行分析，可以看出本次实验所用大鼠肠道内主要的门为厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）。与NC组比较，MC组腺嘌呤诱导增加了厚壁菌门的相对丰度而减少了拟杆菌门的相对丰度，DHZCW的干预抑制了厚壁菌门的上升趋势和拟杆菌门的下降；与DHZCW组比较，PC的抑制作用并不明显。见图4。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F004图4各组大鼠肠道菌群在门水平上不同细菌的丰度Fig 4Abundance of different bacterials at phylum level in each group在科水平上，通过聚类柱状堆叠图可看出，4个组中DHZCW与NC组相似度最高。与NC组比较，腺嘌呤的诱导降低了毛螺菌科（Lachnospiraceae）、前蹄菌科（Prevotellaceae）、未分类拟杆菌科（Bacteroidota_unclassified）等菌群的丰度，DHZCW加入后这些科的细菌相对丰度增加；同时腺嘌呤的诱导增加了瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、乳杆菌科（Lactobacillaceae）、颤螺旋菌科（Oscillospiraceae）等菌群的丰度，DHZCW加入后这些科的细菌相对丰度降低，与之相反的是DHZCW的加入增加了Muribaculaceae等菌群的丰度。与MC组比较PC组Muribaculaceae、Lachnospiraceae等菌群丰度显著增加，而Prevotellaceae、Oscillospiraceae等菌群丰度降低，见图5。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F005图5各组大鼠肠道菌群在科水平上不同细菌的丰度Fig. 5Abundance of different bacterials at family level in each group在属水平上，MC组与PC组菌群差异较小。与NC组比较，MC组Firmicutes_unclassified、Bacteroidota_unclassified、Prevotellaceae_UCG-001等菌群丰度显著降低，DHZCW加入后这些菌群丰度降低幅度减小，但与DHZCW比较吡非尼酮作用不明显；同时MC组UCG-005、Clostridia_UCG-014_unclassified等菌群丰度较NC组增加，DHZCW加入后这些菌群丰度相对减小，见图6。10.13422/j.cnki.syfjx.20231236.F006图6各组大鼠肠道菌群在属水平上不同细菌的丰度Fig.6Aabundance of different bacterials at genus level in each group4 讨论RF是CKD发展至终末期的最终表现，尽早抑制RF的进程对保护肾脏功能有着积极的意义。经方DHZCW由大黄、䗪虫、黄芩、甘草、桃仁、苦杏仁、白芍、地黃、干漆、虻虫、水蛭、蛴螬12味药组成，虫类药与补虚药配伍，比例得当，峻药轻投，缓中补虚。肾纤维化病机为肾虚络瘀，DHZCW中虫类药物祛瘀生新，搜风剔络，补虚药滋肾补脾，益阴和中。从病理实验结果也可以看出，经DHZCW治疗腺嘌呤造模的大鼠肾脏纤维化病理改变有好转，且高剂量组改善明显。同时，大鼠尿液中的BUN、Urea、Crea、Cys C、24 h TP的含量也明显降低，说明在一定程度上DHZCW能够改善肾纤维化小鼠肾脏功能。α-SMA是肌成纤维细胞重要的标志物［16］，当导致成纤维细胞转化为表达含有α-SMA的肌成纤维细胞增多时，表明脏器纤维化程度加重。ColⅠ和ColⅢ是ECM中的不溶性纤维蛋白的主要成分，其表达水平与脏器纤维化程度密切相关［17］。从蛋白含量测定可以看出，α-SMA、ColⅠ、ColⅢ的含量相对模型组显著降低。结合临床研究证明DHZCW可祛除瘀血，保护肾络，延缓肾脏损害［18］，进一步肯定了本次实验结果的客观性。在对肠道菌群的作用上，DHZCW增加了门水平Bacteroide丰度，降低Firmicutes丰度。Firmicutes和Bacteroidetes同为肠道主要菌群之一，其丰度比与多种疾病有关，是反映肠道菌群失衡的重要指标。因此，肠道菌群的紊乱程度可以通过Firmicutes和Bacteroidetes的丰度比（F/B）来判断［19］。在本研究中，Firmicutes和Bacteroidetes是2个优势菌门，从图4可以看出NC组和DHZCW组两种菌门比例相对接近，与MC组有明显的差别。因此，可以推测DHZCW能够有效维持肠道F/B平衡的能力。同时，两种菌门的比例与肾纤维化疾病进程息息相关，其能够通过影响机体小分子代谢介导短链脂肪酸和尿毒症毒素的产生影响肾纤维化的疾病进展［20］。研究证明，高纤维饮食和乙酸盐补充可以降低Firmicutes的丰度，并提高Bacteroidete的丰度，可以显著减少肾脏纤维化［21］。肠道SGLT1抑制剂SGL5213在肾功能衰竭模型中，可以通过增加Bacteroidetes和减少Firmicutes改善肾脏纤维化和炎症［22］。因此，DHZCW维持肠道F/B平衡的能力可能是改善大鼠肾纤维化的关键机制所在。从科水平来看，DHZCW干预后相对模型组而言，增加了Lachnospiraceae、Prevotellaceae等菌群这些科的细菌的丰度，其中毛螺菌科（Lachnospiraceae）存在于大多数健康人的肠道里，是肠道微生物群的核心，可能是一种潜在的有益菌，从出生开始就在肠道内定植，并且在宿主一生中物种丰富度和相对丰度都在不断增加。研究表明该科的成员是短链脂肪酸的主要生产者之一［23］。普氏菌科（Prevotellaceae）是与炎症因子相关的一种菌科，同样也能产生短链脂肪酸［24］。另外，有研究通过对41名透析患者肠道菌群分布和血清代谢物浓度之间的关系进行分析显示Lachnospiraceae同L-（-）-3-苯乳酸和IAA成负相关［25］，单侧输尿管梗阻小鼠模型手术后Lachnospiraceae和Prevotellaceae明显减少，均证明Lachnospiraceae及Prevotellacea对肾功能有保护作用［26］，且Prevotellace同总抗氧化能力成正相关［27］。反之，DHZCW降低了Ruminococcaceae、Lactobacillaceae、Oscillospiraceae等菌群的丰度。这3种菌科均属于Firmicutes门，且Ruminococcaceae和Lactobacillaceae与炎症性肠病的程度呈明显相关性［28］；在利福昔明对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的干预作用机制研究中显示，利福昔明治疗蛋氨酸和胆碱缺乏饮食引起的NASH小鼠，改善小鼠的肝脂肪变性、小叶炎症和纤维生成潜在作用机制可能与减少Oscillospiraceae等潜在致病菌的丰度有关［29］。从属水平来看，与正常组比较，模型组Firmicutes_unclassified、Bacteroidota_unclassified、Prevotellaceae_UCG-001等菌群丰度显著降低，DHZCW加入后这些菌群丰度降低幅度减小，而这几种菌属均与短链脂肪酸的产生有密切关系。此外，Bacteroidota_unclassified、Prevotellaceae_UCG-001等菌属在炎症性肠病、预防结直肠癌、治疗2型糖尿病等疾病中起到了积极的影响作用［30-31］。同时MC组UCG-005、Clostridia_UCG-014_unclassified等菌群丰度较NC组增加，DHZCW加入后这些菌群丰度相对减小。本次研究也是首次呈现肾纤维化大鼠粪便代谢物中Bacteroidota_unclassified、Prevotellaceae_UCG-001的变化趋势。同时，也能反应经DHZCW干预后，此类菌属呈现增加态势。综上，本研究证实了DHZCW能有效降低肾组织中胶原的异常沉积从而抑制肾纤维化，由肠道菌群门、科、属3个水平中，均能发现DHZCW有效调节肠道菌群，增加了有益菌的丰度，降低与肾纤维化相关的潜在致病菌丰度。可以发现，DHZCW升高丰度的有益菌均与短链脂肪酸的产生密切相关短链脂肪酸有抗炎、参与维持肠道屏障完整性的作用，对短链脂肪酸的修饰可能成为预防肾脏炎症和延缓纤维化进展的一种新的治疗手段［32］。同时，DHZCW降低丰度的菌群主要与炎症有关，这与课题组之前的研究结果相一致。因此，推测DHZCW可能是调节肠道菌群，间接提高了肠道短链脂肪酸的含量，控制了前期炎症的发展，因而抑制后期纤维化进程。同时，本次研究也是首次呈现经治疗后肾纤维化大鼠粪便代谢物中Bacteroidota_unclassified、Prevotellaceae_UCG-001属呈现增加态势，这也值得下一步进行深入研究。