中药方剂是在中医理论指导下，根据辨证论治，将不同药性药味的中药组合而成的中药复方。由于方剂是将2种或2种以上的中药组合而成，因此方剂配伍后除了具有中药多成分、多靶点的特征外，还会发生药物中成分之间的相互作用，从而产生减毒/增毒、减效/增效、协同/拮抗的作用效果［1］。现代药物的药代动力学研究，可以通过检测药效成分的血药浓度、吸收速率、组织分布等情况，分析方剂配伍前后药效物质在体内代谢方面的变化规律，深入分析药物成分在体内的相互作用产生的协同和拮抗情况，从而更深层次的阐述方剂配伍的规律性和科学性，同时也为方剂配伍的优化、临床实施用药提供科学依据［2-3］。戊己丸是中医古代经典名方，2020年版《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）收录戊己丸由黄连、制吴茱萸和炒白芍按6∶1∶6的配伍比例组成，具有泻肝和胃，降逆止呕的功效，用于治疗肝火犯胃、肝胃不和所致的胃腕灼热疼痛、呕吐吞酸、口苦嘈杂、腹痛泄泻等证，临床上常用于治疗肠易激综合征（IBS）、消化性溃疡（PU）等消化系统疾病。戊己丸最早出自《太平惠民和剂局方》，后在《幼幼新书》《医方考》中也有记载，但诸药配伍比例不同。课题组前期对戊己丸不同配伍的药效作用进行了研究，发现黄连-制吴茱萸-炒白芍三药比例为12∶2∶3时可显著抑制乙酰胆碱所致的结肠运动亢进，对慢性内脏高敏感IBS大鼠有显著的治疗作用；而当三药比例为12∶1∶12时对肠道局部作用较强，使肠道敏感性降低［4-5］；原方6∶1∶6可调节IBS大鼠脑和结肠组织内降钙素基因相关肽（CGRP）、胃动素（MTL）、神经肽Y（NPY）、P物质（SP）、生长抑素（SS）等多种脑肠肽的水平，具有神经内分泌调节作用［6］，证明戊己丸不同配伍比例对肠道治疗的侧重点不同。从肠道吸收动力学角度研究正交配伍下9个不同配比的戊己丸处方，发现当配伍不同时，对药效成分的吸收速率和吸收量均有影响，当配伍比例为6∶3∶6时各成分的吸收动力学最强［7］。本研究将在前期研究的基础上，以药典配伍比例（6∶1∶6）的戊己丸为研究对象，进一步从药代动力学和组织分布角度，探究戊己丸在配伍前后，对其组方中药效成分的代谢和分布的影响，以说明方剂配伍的机理和规律。1 材料ACQUITY UPLC Xevo TQ型三重四级杆液质联用仪，配备Masslynx V4.1化学工作站（美国Waters公司），TB-215D型十万分一电子天平［丹佛仪器（北京）有限公司］，RS-1型涡旋混合器（北京昊诺斯科技有限公司），F8（F6/10）型超细匀浆机（上海弗鲁克公司），HGC-24型24位氮气吹干仪（北京恒奥德仪器仪表有限公司）。黄连、制吴茱萸、炒白芍饮片均购自北京卫仁中药饮片厂，经中国中医科学院中药研究所何希荣主管药师鉴定，均符合2020年版《中国药典》的相关要求。对照品盐酸小檗碱（Ber，批号110713-201212）、盐酸巴马汀（Pal，批号110732-201108）、吴茱萸碱（Evo，批号110802-200606）、吴茱萸次碱（Rut，批号110801-201006）、芍药苷（Pae，批号110736-201136）、盐酸苯海拉明（Dip，批号100066-200807）和栀子苷（Gar，批号110749-200714）均购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇均为色谱级，其他试剂为分析级，水为超纯水。健康SPF级雄性SD大鼠260只，体质量（200±20） g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。许合格证号SCXK（京）2009-0017。标准动物房环境（室温20~26 ℃，相对湿度40%~70%，12 h光照/12 h黑暗循环）中适应性饲养1周，每日自由摄取纯净水和标准饲料。实验前禁食12 h，自由饮水。中国中医科学院广安门医院实验动物伦理委员会批号IACUC-GAMH-2019-008（2019-7-31）。2 方法2.1　戊己丸提取物的制备黄连提取物、制吴茱萸提取物和炒白芍提取物由中日友好医院剂型室提供。3味药分别采用10倍量溶剂回流提取后真空干燥制备得到固体粉末。黄连用50%乙醇提取，浸膏得率19.33%，其中Ber、Pal质量分数分别为23.03%、5.52%；吴茱萸用85%乙醇提取，浸膏得率17.7%，其中Evo、Rut质量分数分别为0.38%、0.48%；白芍用水提取，浸膏得率9.37%，其中Pae质量分数为13.41%，提取物中代表成分的含量测定由中国中医科学院中药研究所提供。2.2　标准溶液的制备精确称取戊己丸代表成分Ber、Pal、Evo、Rut、Pae对照品分别用甲醇配置成质量浓度为1 000、1 000、200、200、600 mg·L-1的对照品储备液；精密称取内标Dip和内标Gar用甲醇配置成质量浓度分别为200 mg·L-1和1 000 mg·L-1的内标储备液。用50%乙腈水溶液对Ber、Pal、Evo、Rut、Pae储备液进行稀释，配制成不同浓度的系列标准曲线溶液和高、中、低3个浓度的质控溶液。50%乙腈水溶液将内标Dip、Gar分别稀释至2 mg·L-1和20 mg·L-1。2.3　动物分组及给药将大鼠随机分为戊己丸组、黄连组、制吴茱萸组和炒白芍组，每组各65只。按照处方饮片黄连∶制吴茱萸∶炒白芍比例6∶1∶6，根据提取得率折算成每味药物的提取物剂量，戊己丸组由3个提取物混合制成，单味药组剂量与戊己丸中剂量一致。用纯水配置并超声制成混悬溶液，给药前再次将药液混匀，每组药物质量浓度为戊己丸组62.96 g·L-1、黄连组38.4 g·L-1、制吴茱萸组5.88 g·L-1、炒白芍组18.68 g·L-1，每只大鼠灌胃药液2 mL。2.4　生物样品采集及预处理分别在给药前和给药后5、15、30、60、90、120、180、240、340、360、480、720 min经腹主动脉取血，室温下3 000 r·min-1离心15 min（离心半径10 cm，下同），并收集大鼠肝脏、小肠和脑组织，用生理盐水清洗、称质量、分装（每组每个时间点为5只大鼠）。所有样品分析前均在-80 ℃冰箱中保存。取血浆样品200 μL，加入内标溶液20 μL和乙腈660 μL，涡旋10 min，4 ℃、15 000 r·min-1离心15 min，取上清液750 μL于37 ℃氮气吹干，用50%乙腈水溶液200 μL复溶，涡旋5 min，4 ℃、15 000 r·min-1离心15 min，取上清液进行分析。组织样品（肝、小肠、脑），精密称定，剪碎，加入3倍量的含10%氨水的生理盐水，20 000 r·min-1冰浴匀浆，取匀浆液300 μL，加入内标溶液30 μL和乙腈1 470 μL，涡旋5 min，4 ℃、13 000 r·min-1离心15 min，取上清氮气吹干，加乙酸乙酯-甲醇（100∶1）1.8 mL溶解萃取，涡旋，4 ℃、13 000 r·min-1离心15 min，取上清氮气吹干，加50%乙腈250 μL复溶进行分析。2.5　检测条件色谱条件：采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流动相A为乙腈，B为0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱（0~3.5 min，2%~40%A；3.5~4.5 min，40%~90%A；4.5~5.0 min，90%A；5.0~5.1 min，90%~2%A），流速0.4 mL·min-1，柱温35 ℃，进样室温度4 ℃，进样量3 μL。质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），正负离子模式同时检测，多反应监测（MRM）模式进行二级质谱分析，离子源温度150 ℃，脱溶剂温度500 ℃，脱溶剂气体流速800 L·h-1，锥孔气体流速50 L·h-1。采用Intellistart功能对目标化合物和内标的质谱条件进行调谐，每个化合物分别选择最优的2对离子对，其中第1对用于定量分析，第2对用于定性分析，优化结果见表1。正离子模式下毛细管电压1.00 kV，锥孔电压50 V，碰撞能20 eV；负离子模式下毛细管电压2.5 kV，锥孔电压32 V，碰撞能8 eV。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.T001表1待测化合物的质谱条件Table1Optimized MS/MS conditions of each compound化合物母离子m/z子离子m/z锥孔电压/V碰撞能量/eV离子模式Ber335.97320.094030ESI+292.024032ESI+Pal352.12336.144030ESI+308.064028ESI+Evo304.17133.942424ESI+170.942620ESI+Rut288.03115.075632ESI+272.905448ESI+Pae525.16449.112214ESI-120.862226ESI-Dip（内标）256.07166.961414ESI+152.061436ESI+Gar（内标）387.17225.05286ESI-122.972816ESI-2.6　方法学考察生物样品方法学考察按照2020年版《中国药典》“生物样品定量分析方法验证指导原则”规定进行操作。分别对5个代表成分在不同基质下的专属性、最低定量下限、标准曲线范围、精密度、准确度、提取回收率、4 ℃下存放24 h和反复冻融3次的稳定性、基质效应进行考察。2.7　数据分析所得不同脏器不同时间的分布浓度数据用WinNonlin 6.2软件处理，采用非房室模型计算各成分药代动力学参数，采用SPSS 19.0统计软件对主要药动学参数进行组间单因素方差分析。以P0.05为差异具有统计学意义。3 结果3.1　方法学考察实验建立的分析方法对待检测的目标化合物的特异性分析均无干扰。各基质下Ber、Pal、Evo、Rut和Pae在标准曲线范围内，线性关系良好，R2均0.99，最低定量下限（LLOQ）能够满足分析检测需要；各代表成分在不同组织下检测的精密度、准确度、稳定性考察均符合要求，变异系数均15%；各组织中5个代表成分的提取回收率稳定，基质效应的变异系数均15%。具体信息见增强出版附加材料。3.2　5种代表成分血浆药代动力学特征药-时曲线见图1，可以看出Ber和Pal在消除期有双峰出现，而Evo和Rut药-时曲线下面积（AUC0-t）戊己丸组明显高于制吴茱萸组。药代动力学参数分析显示，与黄连组比较，戊己丸组Ber和Pal各药代动力学参数的差异均无统计学意义；与制吴茱萸组比较，戊己丸组Evo和Rut的药峰浓度（Cmax）和AUC0-t均明显升高（P0.05，P0.01），Evo的平均滞留时间（MRT0-t）显著升高，Rut的表观分布容积（Vd）、消除速率（CL）均显著升高（P0.01）；与炒白芍组比较，戊己丸组中Pae的达峰时间（tmax）、MRT0-t显著增加（P0.01），Cmax则明显降低（P0.05）。见表2。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.F001图1戊己丸及其组方药物中代表成分在大鼠血浆中的药-时曲线Fig. 1Time-concentration profiles of representative ingredients from Wujiwan in rat plasma注：A.Ber；B.Pal；C.Evo；D.Rut；E.Pae（图2、图3同）10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.T002表2戊己丸中代表成分在大鼠血浆的药代动力学参数 （x¯±s，n=5）Table 2Pharmacokinetic parameters of representative ingredients from Wujiwan in rat plasma （x¯±s，n=5）参数BerPalEvoRutPae戊己丸组黄连组戊己丸组黄连组戊己丸组制吴茱萸组戊己丸组制吴茱萸组戊己丸组炒白芍组t1/2/h2.2±1.02.3±0.71.8±0.62.1±0.34.1±3.03.3±2.12.4±0.21.8±1.32.3±0.62.0±0.5tmax/min87.0±72.1157.5±89.657.0±69.1142.5±75.022.5±8.723.0±23.121.0±8.216.0±8.948.0±16.416.0±8.92）Cmax/μg·L-1291.4±94.6276.4±82.587.0±10.161.7±24.11.1±0.20.6±0.41）16.9±6.26.3±2.21）126.3±39.2179.6±18.51）AUC0-t/h·μg·L-11 275.9±214.11 342.2±192.4280.5±54.3271.1±49.93.2±0.90.7±0.32）20.4±3.56.7±3.32）609.4±17.0595.9±55.1MRT0-t/h5.4±0.55.3±0.34.8±0.45.3±0.34.6±1.21.7±0.62）2.4±0.31.5±0.94.0±0.33.3±0.22）Vd/L·kg-1484.1±137.0533.1±209.145.1±11.054.9±14.274.7±69.6190.9±95.2116.0±27.423.5±9.52）33.0±7.229.5±8.1CL/L·kg-1·h-1164.9±36.7157.3±17.417.6±3.518.3±3.114.3±2.838.4±26.833.8±6.211.5±4.22）9.8±0.310.3±1.0注：与戊己丸组比较1）P0.05，2）P0.01（表3、表4同）3.3　5种代表成分在肝脏中的分布特征因Pae在肝脏中的含量过低，本实验所建立的分析方法无法检测到。从肝脏中Ber、Pal、Evo和Rut药-时曲线图可以看出在肝脏中消除过程中均存在双峰现象，见图2。药代动力学参数分析显示，配伍前后对各代表成分的tmax均无明显影响，在5 min即迅速达峰；与黄连组比较，戊己丸组中Ber和Pal的Cmax、CL均显著增加（P0.01），Pal的AUC0-t显著降低（P0.01），Ber的MRT0-t显著降低（P0.01）。与制吴茱萸组比较，戊己丸组中Evo和Rut的Cmax、AUC0-t均显著增加，Vd、CL显著降低（P0.01），Rut的半衰期（t1/2）、MRT0-t显著减少（P0.01）。见表3。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.F002图2戊己丸及其组方药物中代表成分在大鼠肝脏中的分布特征Fig. 2Tissue distribution of representative ingredients from Wujiwan in rat liver10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.T003表3戊己丸中代表成分在大鼠肝脏分布中的药代动力学参数 （x¯±s，n=5）Table 3Pharmacokinetic parameters of representative ingredients from Wujiwan in rat liver （x¯±s，n=5）参数BerPalEvoRut戊己丸组黄连组戊己丸组黄连组戊己丸组制吴茱萸组戊己丸组制吴茱萸组t1/2/h1.9±0.42.2±0.22.1±0.72.0±0.11.7±0.42.3±0.91.4±0.32.5±0.52）tmax/min5.0±0.05.0±0.05.0±0.05.0±0.05.0±0.05.0±0.05.0±0.05.0±0.0Cmax/μg·L-118 228.9±4 166.310 530.3±673.62）2 237.7±301.71 582.4±54.92）71.3±7.523.9±4.42）308.1±19.691.6±10.72）AUC0-t/h·μg·L-112 823.0±726.713 052.6±215.62 038.9±225.92 508.4±89.52）146.2±11.355.6±4.62）284.6±17.9158.4±27.52）MRT0-t/h1.8±0.12.5±0.12）2.7±0.22.6±0.14.5±0.34.5±0.31.8±0.12.7±0.22）Vd/L·kg-147.7±7.151.7±16.575.3±18.260.3±1.58.9±2.027.1±5.82）4.9±1.221.2±9.62）CL/L·kg-1·h-117.1±1.14.2±0.32）25.6±3.020.7±0.82）3.7±0.39.5±0.92）2.5±0.24.4±0.82）3.4　5种代表成分在小肠中的分布特征小肠中的药-时曲线图见图3，可以看出Ber和Pal在戊己丸组中比在黄连组中更加缓慢平稳。药代动力学参数分析显示，与黄连组比较，戊己丸组中Ber、Pal的t1/2、AUC0-t、Vd均明显升高（P0.05，P0.01），Ber的Cmax显著降低，MRT0-t显著升高，Pal的tmax显著降低（P0.01）。与制吴茱萸组比较，戊己丸组中Evo、Rut的t1/2、Vd、CL均明显升高，Cmax、AUC0-t均明显降低，Evo的MRT0-t明显升高（P0.05）。与炒白芍组比较，戊己丸组中Pae的MRT0-t、Vd、CL均显著升高（P0.01），见表4。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.F003图3戊己丸及其组方药物中代表成分在大鼠小肠中的分布特征Fig. 3Tissue distribution of representative ingredients from Wujiwan in rat small intestine10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.T004表4戊己丸中代表成分在大鼠小肠分布中的药代动力学参数 （x¯±s，n=5）Table 4Pharmacokinetic parameters of representative ingredients from Wujiwan in rat small intestine （x¯±s，n=5）参数BerPalEvo戊己丸组黄连组戊己丸组黄连组戊己丸组制吴茱萸组t1/2/h11.9±7.22.4±0.91）5.9±1.92.6±0.71）3.1±0.81.5±0.52）tmax/min240.0±120.0360.0±0.090.0±42.4360.0±0.02）13.0±4.569.0±49.3Cmax/μg·L-14 963.3±879.88 535.3±1 121.12）1 855.2±369.31 702.5±488.148.2±18.072.9±12.01）AUC0-t/h·μg·L-142 907.5±4 992.832 945.8±2463.12）12 936.6±843.98 029.9±473.22）116.3±6.3289.9±98.21）MRT0-t/h6.0±0.25.3±0.02）5.6±0.35.2±0.34.8±0.33.8±0.51）Vd/L·kg-179.8±19.824.4±8.92）201.9±31.9104.2±30.92）21.7±8.14.1±0.62）CL/L·kg-1·h-15.5±1.97.2±0.625.2±5.528.2±1.74.2±0.42.1±0.52）参数RutPae戊己丸组制吴茱萸组戊己丸组炒白芍组t1/2/h2.4±0.61.5±0.61）1.2±0.21.0±0.2tmax/min34.0±48.3111.0±73.233.0±24.754.0±13.4Cmax/μg·L-1111.1±33.3189.8±55.41）5 939.4±2 201.18 141.5±1 836.7AUC0-t/h·μg·L-1268.0±37.5685.3±42.82）14 163.4±3 305.815 179.6±2 153.0MRT0-t/h3.2±0.53.4±0.23.6±0.42.3±0.22）Vd/L·kg-19.5±11.91.8±0.42）60.7±15.120.9±4.62）CL/L·kg-1·h-12.5±0.41.0±0.12）37.0±10.314.0±1.92）3.5　5种代表成分在脑中分布特征受血脑屏障的影响，代表成分进入脑内含量极低，以目前建立的前处理和分析方法，无法检测到Pal、Evo、Rut和Pae在脑内的存在。仅戊己丸组中Ber能够检测到，t1/2为（6.17±0.55） h、tmax为30 min、Cmax为（322.95±53.28） μg·L-1、AUC0-t为（604.72±40.65） h·μg·L-1、MRT0-t为（4.18±0.2） h、Vd为（2 297.40±138.73） L·kg-1、CL为（258.86±17.54） L·kg-1·h-1。药-时曲线见图4。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.F004图4戊己丸中Ber在大鼠脑中的药-时曲线Fig. 4Time-concentration profile of Ber from Wujiwan in rat brain3.6　戊己丸配伍后组织分布变化特征通过比较各组织中代表成分的药代动力学参数发现，Ber、Pal血浆及不同组织中的AUC0-t大小排序为小肠肝血浆，Pae为小肠血浆（P0.01）。Evo和Rut的AUC0-t在制吴茱萸组都表现为小肠肝血浆（P0.01），配伍后戊己丸组提高了二者在肝脏中的分布，Evo表现为肝小肠血浆，具有统计学意义（P0.01），Rut在肝脏和小肠的差异无统计学意义，但均显著高于血浆（P0.01）；戊己丸组Ber、Evo和Rut的Cmax均表现为肝脏小肠血浆（P0.05，P0.01），Pal在肝脏和小肠中Cmax的差异无统计学意义，但均显著高于血浆（P0.01），戊己丸在配伍后提高了其在肝脏中的Cmax；各代表成分的tmax均以肝脏最短，戊己丸组及黄连组中Ber血浆的tmax均明显低于小肠（P0.05，P0.01），Pal、Rut、Pae在单味药组血浆中tmax均低于小肠（P0.05，P0.01），但配伍后戊己丸组血浆和小肠差异无统计学意义；单味药组中Ber、Pal和Evo在各组织中的t1/2差异无统计学意义，但戊己丸组中Ber、Pal在小肠中t1/2较血浆和肝脏明显增加（P0.05，P0.01），Evo在小肠中t1/2高于肝脏（P0.01）。制吴茱萸组中Rut在小肠中的t1/2低于肝脏，戊己丸组中Rut在小肠中的t1/2则明显高于肝脏（P0.05）。Pae在配伍前后均表现为血浆t1/2显著高于小肠（P0.01）。见表5。10.13422/j.cnki.syfjx.20231169.T005表5不同组织中5种代表成分的药代动力学参数比较 （x¯±s，n=5）Table 5Comparison of pharmacokinetic parameters of 5 representative components from Wujiwan in different tissues （x¯±s，n=5）参数组织BerPalEvo戊己丸组黄连组戊己丸组黄连组戊己丸组制吴茱萸组AUC0-t/h·μg·L-1血浆1 275.9±214.11 342.2±192.4280.5±54.3271.1±49.93.2±0.90.7±0.3肝12 823.0±726.72）13 052.6±215.62）2 038.9±225.92）2 508.4±89.52）146.2±11.32）55.6±4.62）小肠42 907.5±4 992.82，4）32 945.8±2 463.12，4）12 936.6±843.92，4）8 029.9±473.22，4）116.3±6.32，4）289.9±98.22，4）Cmax/μg·L-1血浆291.4±94.6276.4±82.587.0±10.161.7±24.11.1±0.20.6±0.4肝18 228.9±4 166.32）10 530.3±673.62）2 237.7±301.72）1 582.4±54.92）71.3±7.52）23.9±4.42）小肠4 963.3±879.82，4）8 535.3±1 121.12，4）1 855.2±369.32）1 702.5±488.12）48.2±18.02，3）72.9±12.02，4）tmax/min血浆87.0±84.0157.5±89.657.0±69.1142.5±75.022.5±8.723.0±23.1肝5.0±0.05.0±0.02）5.0±0.05.0±0.02）5.0±0.02）5.0±0.0小肠240.0±120.01，4）360.0±0.02）90.0±42.44）360.0±0.02）13.0±4.54）69.0±49.33）t1/2/h血浆2.2±1.02.3±0.71.8±0.62.1±0.34.1±3.03.3±2.1肝1.9±0.42.2±0.22.1±0.72.0±0.11.7±0.42.3±0.9小肠11.9±7.21，3）2.4±0.95.9±1.92，4）2.6±0.73.1±0.84）1.5±0.5参数组织RutPae戊己丸组制吴茱萸组戊己丸组炒白芍组AUC0-t/h·μg·L-1血浆20.4±3.56.7±3.3609.4±17.0595.9±55.1肝284.6±17.92）158.4±27.52）--小肠268.0±37.52）685.3±42.82，4）14 163.4±3 305.82）15 179.6±2 153.02）Cmax/μg·L-1血浆16.9±6.26.3±2.2126.3±39.2179.6±18.5肝308.1±19.62）91.6±10.72）--小肠111.1±33.32，4）189.8±55.42，4）5 939.4±2 201.12）8 141.5±1 836.72）tmax/min血浆21.0±8.216.0±8.948.0±16.416.0±8.9肝5.0±0.02）5.0±0.01）--小肠34.0±48.3111.0±73.21，3）33.0±24.654.0±13.42）t1/2/h血浆2.4±0.21.8±1.32.3±0.62.0±0.5肝1.4±0.32）2.5±0.5--小肠2.4±0.63）1.5±0.63）1.2±0.22）1.0±0.22）注：与血浆比较1）P0.05，2）P0.01；与肝比较3）P0.05，4）P0.014 讨论为保证同时检测多个不同成分分析方法的可靠性、稳定性，实验采用MRM模式，选择特异性离子对进行质谱信号采集。生物样品的前处理是影响药代动力学分析准确性和灵敏度的重要因素，本研究所检测的5个代表成分理化性质不同，在体内及不同组织中浓度各异，因此对不同生物样品的分离分析要求较高。本实验分别采用不同比例蛋白沉淀法、液液萃取法、微孔滤膜过滤法等前处理方法进行了考察，最终确定了血浆采取3倍量乙腈进行液-液萃取方式，肝、小肠和脑在组织匀浆时加入10%氨水，保证待检测成分以非电离形式存在，再利用蛋白沉淀加液-液萃取的方式进行提取，所获得的提取效率稳定。经方法学考察符合要求。中药多通过口服进入体内，经过肠道吸收、肝脏代谢、经血液循环到达机体各个部分起到治疗作用。因此，了解戊己丸在体内的代谢和分布情况，对理解戊己丸的作用靶点具有重要意义。戊己丸是治疗IBS的有效中药方剂，前期药效学研究发现，戊己丸能够显著抑制乙酰胆碱（ACh）所致的肠管运动亢进，使IBS动物模型结肠痛阈提高，降低内脏高敏感性［4］。本研究通过药代动力学分析发现戊己丸各成分在肠道及肝脏中分布较多，血浆分布相对较少，从药物组织分布角度证明了戊己丸中有效成分可以更多、更长时间的停留在肠道，这对药效作用的发挥更加有利。各成分在肝脏中Cmax更高，肝脏中tmax更短，且肝脏和小肠消除相均出现双峰或多峰现象，提示药物存在肝-肠循环的可能。前期研究也证实了戊己丸不同配伍可影响各成分在肝脏的摄取，同时还会影响胆汁排泄，而肝-肠循环延长了戊己丸在小肠中的作用时间［8-9］。肝脏中未检测到Pae，也有研究证实Pae主要分布在小肠、胃和大肠，在肝中分布较低可能是由于在肝脏中被迅速代谢［10］。血脑屏障是保护中枢神经系统与其他组织相对独立的重要结构，可以阻挡有害物质进入脑内，同时也会使大部分药物难以通过血脑屏障直接作用于大脑，本研究所建立的脑组织分析方法未能检测到除Ber之外的其他成分，这可能是受到血脑屏障的保护阻碍。IBS是一种与精神心理状态密切相关的功能性肠病［11］，肠道和大脑之间可通过肠道微生物、免疫系统、肠神经系统影响神经介质释放和微生物代谢［12-14］。研究证明戊己丸可以降低血清中5羟色胺（5-HT），血浆中SP、SS浓度，减少结肠组织肥大细胞（MC）数量及5-HT、SP、SS和血管活性肠肽（VIP）的表达，调节脑中5-HT、5羟色胺3受体（5-HT3R）、5羟色胺4受体（5-HT4R）、环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）、钙离子（Ca2+）水平［4-5，15-16］，调节肠道微生物群和稳定肠道黏膜屏障来消除IBS的肠道症状，将紊乱的神经-内分泌-免疫网络回调到“平衡状态”［17-18］。本研究进一步说明了戊己丸并非直接作用与脑部神经系统，而是通过脑-肠轴发挥降低肠道高敏感性，抑制肠管运动亢进的作用。中医用药的特征是组方配伍，本研究通过拆方药代动力学研究，比较戊己丸中组成药物在配伍前后血浆代谢和组织分布的差异。可以看出在配伍前后，各代表成分药代动力学行为均发生了明显改变。肝是药物主要的代谢器官，Ber在肝脏中可被细胞色素酶P450（CYP）2D6和CYP1A2代谢，Ber对CYP2E1和CYP2D6具有抑制作用，对CYP3A4和CYP1A2有诱导作用［19-20］。研究发现，黄连配伍吴茱萸后可通过抑制肝中红霉素-N-脱甲基酶（ERD）和氨基比林-N-脱甲基酶（ADM）的活性从而降低Ber的肝代谢［21］，本研究各代表成分药代动力学行为的改变，原因之一可能为配伍后影响了肝脏代谢酶的表达产生的药物间相互作用。此外，戊己丸在配伍后对黄连中Ber和Pal的吸收影响最大，其机制可能与配伍后对肠道黏膜中P-糖蛋白（P-gp）活性的影响有关［6，22-23］。通过检测慢性内脏高敏感性肠易激综合征（CVH-IBS）模型大鼠的肠粘膜和肠道转运蛋白发现［24-25］，戊己丸配伍前后可改变肠道的紧密连接蛋白-1（ZO-1）和肌球蛋白轻链激酶（MLCK），并且影响多药耐药转运蛋白1（MRP1）、MRP2、P-gp的表达。因此配伍后戊己丸中各代表成分的t1/2延长，使其在小肠中停留时间更长，有利于药效作用的发挥。本实验从戊己丸配伍前后5个代表成分在组织中分布变化阐释戊己丸配伍的特征，然而戊己丸中药效成分众多，尚不能完全阐释戊己丸整体的配伍原理与分布特征。从药代动力学角度研究组方特征是阐释方剂配伍科学性的桥梁，探索更符合中药特点的多组分、复杂网络的药代动力学研究方法，发现组方配伍前后体内的代谢特征差异，可以为临床组方配伍提供实验室依据。