据全球癌症调查结果显示，卵巢癌是全球第3常见的妇科癌症，妇科癌症患者死亡的第2大常见原因［1］。其早期症状不明显，大多数妇女被诊断时已处于晚期。卵巢癌预后不佳，晚期患者的5年生存率仅17%［2］。因此，深入研究卵巢癌的病因病机对人们预防或治疗卵巢癌极为重要。西医治疗卵巢癌通常采用肿瘤细胞减灭术，结合铂类和紫衫烷类化疗的综合性疗法，此种方式治疗后容易出现复发［3］。中医药在卵巢癌领域的治疗研究不断发展进步，现已有研究证明中药成分单体能够逆转卵巢癌顺铂耐药［4］，中药方剂能够进行免疫调节，抑制卵巢癌肿瘤生长，提高正常免疫功能等［5］，且不良反应较少。当前，人们对卵巢癌中医理论的研究探讨也日益增多。有从“阴阳平衡观”等观点去探讨卵巢癌炎性微环境的防治［6］，亦有从女性长期处于易焦虑状态而形成卵巢癌的角度出发［7］，探究卵巢癌的病理机制，对卵巢癌术后的复发转移也提出了“清补冲任”等治疗原则［8］。基于完整的中医理论体系，中医医师在卵巢癌各个时期均能灵活辨证处方用药［9］。不论是现代医学还是传统医学，对卵巢癌预防和治疗均可提供科学且有效的思路方法。因此，构建中西医病证结合的卵巢癌动物模型十分必要。本文基于卵巢癌中西医临床病证特点，总结了现有卵巢癌动物模型的应用情况，比较了卵巢癌动物模型的中西医临床症状的吻合度，指出了目前卵巢癌动物模型存在的问题，为建立标准的卵巢癌动物模型提供思路。1 材料与方法1.1　文献来源以“卵巢癌”和“动物模型”为主题词，对中国知网、万方、维普及PubMed数据库进行检索，时间范围设置为“建库至2023年3月”。1.2　纳入、排除标准排除硕博论文、会议、体外实验、资料不全面及综述等文献。通过阅读标题、摘要、全文进行逐步筛选，纳入记载有卵巢癌动物造模方法的实验性文献。录入卵巢癌动物模型动物种类、造模方法、检测指标等数据，构建卵巢癌动物模型相关数据库。1.3　数据整理将符合标准的文献用Excel 2013进行归纳整理，共178篇文献。对造模方法应用情况进行统计分析，统计情况见图1。10.13422/j.cnki.syfjx.20231325.F001图1卵巢癌动物模型造模方法应用情况Fig. 1Application of ovarian cancer animal model establishment methods2 卵巢癌的发病机制研究2.1　中医病因病机传统中医学中缺乏对卵巢癌的直接记载。卵巢癌临床多表现为女子下腹有包块，胀满、疼痛、坚硬，中医按其症状表现将其归于“癥瘕”“积聚”或“腹痛”。《肘后备急方》中记载：“凡症坚之起，多以渐生，如有卒觉，便牢大自难治也。腹中症有结积，便害饮食，转羸瘦。”《诸病源候论》中对癥积描述如下：“若积引岁月，人即柴瘦，腹转大，诊其脉弦而伏，其症不转动者，必死。”《备急千金要方·妇人方下》记载：“小如鸡子，大者如拳”“或月经不通，或下如腐肉，青黄赤白黑等如豆汁”等表现与卵巢癌的临床症状表现极为类似。历代医家认为，卵巢癌多由外感六淫、饮食失节、情志失常等因素导致正气亏虚，邪毒侵犯冲任，脏腑功能失常，气机受阻，病理产物停积于下腹胞宫致病［10］。2.2　西医发病机制目前，卵巢癌的西医病因尚未明确。卵巢癌发病机制涉及多个方面，主要包括①内分泌改变：现有理论认为促性腺激素与雌激素作用于卵巢上皮，可导致卵巢上皮恶性转化；绝经后的激素替代治疗、不育或使用促排卵药物均可导致卵巢癌发病率上升；②遗传学改变及家族史：存在卵巢癌家族史；或乳腺癌患者合并家族史的BRCA1/2基因突变人群，患病危险随着年龄的增长增加；③饮食因素：高脂饮食可增加卵巢患病风险，而水果蔬菜等低脂高纤维素的饮食可以降低危险；④微生物感染：持续的炎症反应和免疫损伤；微生物能够通过调节炎症因子水平，刺激癌细胞上皮间质转化，影响卵巢癌的免疫调节机制，促使卵巢癌的发展［11-13］。临床上卵巢癌可分为两类：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型患者较多，预后较好，主要以基因突变、高频微卫星不稳定性为分子遗传学特征；Ⅱ型患者病情进展迅速，且预后不良，以p53基因突变为主要分子遗传学特征［14］。大部分卵巢癌呈散发状态，而遗传性的占15%，一般女性患卵巢癌概率为1%~2%。对于具有卵巢癌家族史、子宫内膜异位症、吸烟、肥胖、长期接受激素治疗等高风险因素的女性人群［15］，尤应注意预防卵巢癌，具体预防可表现在日常饮食中尽量减少摄入咖啡、鸡蛋和脂肪类食物等方面［16］。3 卵巢癌诊断与辨证3.1　西医诊断标准现代医学诊断卵巢癌主要从以下几个方面入手，详细的病史采集、全面体格检查、影像学检查及肿瘤标志物等实验室检查［17］。根据患者不同症状分别考虑加以胃肠镜、腹腔镜探查等，方便与卵巢癌作鉴别区分。根据《临床肿瘤学》［13］、《卵巢恶性肿瘤诊断与治疗指南（2021年版）》［17］及NCCN2022版指南［18］，卵巢癌西医诊断标准及临床表现见表1。依据田硕等［19］建立的中医药动物模型评价新方法，符合病理诊断赋值60%，符合临床症状、体格检查及影像学检查赋值共30%，各项占10%，符合实验室检验及除影像学检查外的其他检查结果等间接指标各赋值5%，具体每项按权重比计算。10.13422/j.cnki.syfjx.20231325.T001表1卵巢癌西医诊断标准Table 1Western medicine diagnostic criteria for ovarian cancer序号诊断内容诊断指标1病理学诊断肿物穿刺活检，腹腔镜探查对盆腔肿块或可疑部位取组织检测2临床症状① 早期症状：常无症状或有较轻微的症状，常在体格检查或因其他疾病就医做妇科检查或无意中发现。首发症状常表现在消化道，如食欲减退、消化不良、腹胀、恶心感；② 压迫症状：肿瘤生长较大时压迫、牵拉或浸润邻近器官组织时，可致腹痛、腰痛、消化道症状及尿频，若压迫致盆腔静脉，会出现下肢浮肿；③ 并发症：肿瘤扭转、破裂、出血、感染等急腹症；④ 一般情况：晚期明显消瘦、虚弱、贫血等症状3体格检查① 盆腔肿块：肿瘤位于盆腔时，可扪及肿物在子宫一侧或双侧，增大时进入腹腔。表面呈结节状，实性或囊实性；② 腹水征：少量腹水时叩诊呈移动性浊音阳性；大量腹水时，腹部膨隆呈蛙状腹；③ 第二性征异常：性早熟、男性化、闭经、月经紊乱及绝经后出血等；④ 远处转移征：锁骨上淋巴结肿大；胸水；肝脾肿大等4实验室检验血清肿瘤标志物检测：①甲胎蛋白（AFP）；②绒毛膜促性腺激素β亚单位（β-HCG）；③糖类抗原125（CA125）；④人附睾蛋白4（HE4）5检查结果① 影像学检查：电子计算机断层扫描（CT）、核磁共振、超声检查、正电子发射断层显像/X射线计算机体层成像（PET-CT）和X射线等；②细胞学检查：腹水或胸水细胞学检查；③基因检测；④其他全身检查：骨扫描、胃肠镜、腹腔镜和循环肿瘤细胞检测等3.2　中医辨证标准参照《恶性肿瘤中医诊疗指南》［20］的卵巢癌的中医辨证进行归纳总结，将卵巢癌中医证候分为6个证型：气虚证、血虚证、气滞证、血瘀证、热毒证、阳虚证。依据田硕等［19］的赋值方法，主证赋值60%，次证赋值40%，每满足一项按权重比计算，具体证候表现见表2。10.13422/j.cnki.syfjx.20231325.T002表2卵巢癌中医辨证分型Table 2Traditional Chinese medicine syndrome differentiation of ovarian cancer证型主证次证主舌或见舌主脉或见脉气虚证①腹痛绵绵；②神疲乏力；③少气懒言①食少纳呆；②形体消瘦；③气短；④自汗；⑤畏寒肢冷舌淡胖舌边有齿痕，苔白滑，苔薄白脉虚脉细弱，脉沉细血虚证①面色无华；②头晕眼花；③爪甲色淡白；④少腹胀满①心悸怔忡；②失眠健忘；③月经闭止或阴道出血色淡量少舌淡苔白，苔薄白脉细脉沉细，脉细弱气滞证①少腹胀满；②痛无定处①烦躁易怒；②口苦咽干；③嗳气；④少腹包块，攻撑作痛；⑤腹胀胁痛舌淡红舌边红，苔薄白，苔薄黄，苔白腻或黄腻脉弦脉弦细血瘀证①少腹包块；②刺痛固定；③肌肤甲错①面色黧黑；②唇甲青紫；③阴道出血色黯瘀，或夹血块舌黯舌紫黯或见瘀斑、瘀点，舌边青紫，舌下脉络曲张脉涩脉细涩，脉结代热毒证①口苦身热；②尿赤便结①面红目赤；②便秘；③小便黄；④出血；⑤疮疡痈肿；⑥口渴饮冷；⑦发热苔腻舌淡或红，苔白腻或黄腻脉滑脉细滑，脉滑数阳虚证①面色晄白；②畏寒肢冷；③少腹冷痛①倦怠乏力；②少气难言；③小便清长，或短少色淡；④大便溏泄；⑤身体浮肿；⑥眩晕；⑦口淡不渴，痰涎清稀；⑧面色晄白或黧黑；⑨局部冷痛喜温喜按；⑩精神萎靡舌淡苔白舌胖大苔滑脉沉迟脉细弱4 卵巢癌动物模型分析4.1　卵巢癌动物模型的应用现状制备卵巢癌动物模型所使用的动物种类有小鼠、大鼠、裸鼠等［21］。大鼠、小鼠自身具有免疫功能，接种人源性肿瘤细胞常常会发生免疫反应。因此，多接种同种同源系的肿瘤细胞。目前，多数卵巢癌动物模型构建时使用人源性卵巢癌细胞。移植人源肿瘤细胞时大多数使用免疫缺陷的裸鼠，使用的小鼠从单一T细胞缺陷的裸小鼠扩展到几种免疫细胞联合缺陷小鼠，如T、B细胞联合免疫缺陷的重度联免疫缺陷（SCID）小鼠，T、B、NK细胞联合免疫缺陷的非肥胖糖尿病重症联合免疫缺陷（NOD-SCID）小鼠等［22］。构建卵巢癌动物模型时，有自发性动物模型、诱发性动物模型、移植性动物模型和转基因动物模型等类型。自发性卵巢癌动物模型虽符合卵巢癌自然发生发展过程，但是具有肿瘤发生率低、周期过长和不能稳定建立等缺点。诱发性卵巢癌动物模型构建时，多使用致癌物二甲基苯并蒽（DMBA）诱导，诱导时间相对较长，但重复性好。移植性卵巢癌模型中，仔猪这类新兴动物实验模型值得关注。其创新初衷是猪在解剖学和生理学上与人类相似，且具有物种优势，属于中型动物模型。猪的腹腔大小与人相似，免疫系统、多种疾病与人类的功能等效。目标疾病进行有效评分时影像学上可行，人源细胞和组织异种移植后免疫排斥反应相对减少，相较于灵长类动物，仔猪有更好地伦理接受度［23］。移植性模型有更广阔的研究空间，为人肿瘤细胞在其他动物体内实验的实施奠定坚实的基础。转基因卵巢癌动物模型能够直接分析卵巢癌发病的具体分子生物学细节，从微观的角度研究卵巢癌发病的原因。通过研究基因可以从源头上控制卵巢癌的发生发展，如肿瘤抑制基因治疗，自杀基因疗法，免疫增强，多重耐药性等［24］。利用转基因技术制作转基因卵巢癌动物模型时，操作技术要求高，且人们无法确定是一个或哪几个基因对于卵巢癌的发生发展起主导作用，抑或是多个基因共同作用改变，影响卵巢癌发生发展。因此，转基因动物模型制作过程中，基因的选择也是个难题。在构建卵巢癌动物模型时，造模成功率也是需要考虑的因素之一。在实验中已证明诱发性卵巢癌动物模型造模成功率可达87%［25］；原位移植卵巢癌动物模型造模成功率可达57.14%［26］；异位移植卵巢癌动物模型造模成功率可达100%［27］；人源组织异位移植卵巢癌动物模型造模成功率可达40%［28］；基因修饰模型中转基因卵巢癌动物模型的造模成功率可达50%［29］。自发性卵巢癌动物模型不需要人为进行干预造模，只需要观察实验动物卵巢癌的发生率。其中，BALB/C小鼠卵巢癌发病率75.8%；RⅢ系小鼠卵巢癌发病率50%~60%；C3H系小鼠卵巢癌发病率22%~64%；CE系小鼠卵巢癌发病率33%；RF系小鼠卵巢癌发病率2.1%［22］。4.2　卵巢癌动物模型症状吻合度本文以卵巢癌西医临床诊断标准及中医辨证分型为参照，以已发表的实验性文献中构建的卵巢癌动物模型为依据，结合卵巢癌动物模型造模成功后的外在症状表现，腹部包块、腹水等体征、西医病理学检查及生化指标等检查结果来进行中西医吻合度评价分析，确保吻合度的科学性和准确性。以模型动物客观指标（如体质量、饮食量、毛色等表现）为根据进行证候归类，与西医卵巢癌诊断标准和中医辨证分型进行比较，症状符合越多即该动物模型与该证型吻合度越高。具体可表现在以下几点：体质量减轻可类比消瘦；饮食量减少可与中医食少纳呆证候相类似；精神萎靡，活动减少可与中医神疲乏力证候相吻合等等。吻合度越高即该种模型作为实验动物模型效果越好。构建卵巢癌自发性动物模型，多选用产蛋龄2岁以上的母鸡、RⅢ系、C3H系、CE系、东方田鼠、长爪沙鼠等这类能够自然发生卵巢癌的动物［30］。卵巢癌自发性动物模型优点是相似率高，人工干预少，结果较为准确；缺点是肿瘤发生率低，周期长，影响因素多，均一性差，实验成本高，应用较少。卵巢癌自发性动物模型可出现腹部膨大，体质量增加，活动能力受阻，腹腔有腹水；卵巢肿大，内有积水，肠系膜淋巴结、隔膜等处有癌细胞转移，肝淋巴结增大；病理检查细胞有明显异型，上皮细胞呈乳头分支多或呈实心团块［31］。吻合度评价上看，西医诊断符合1、3①②，西医临床吻合度65%；符合中医主证2④、3①、4①，次证3④⑤，中医临床吻合度13%。构建卵巢癌诱发性动物模型，常用DMBA皮膜下注射、涂层布片或局部埋线［32］。优点是能原位诱发小鼠卵巢肿瘤，癌变率高，重复性好；缺点是诱导时间长，成瘤率不高。构建卵巢癌诱发性动物模型多选用Fischer344雌性大鼠，C57BL6雌性小鼠、B6C3F1雌性小鼠、Wistar雌性大鼠等动物。沈忠飞等［25］使用两根含0.3 mg的DMBA的棉线缝入小鼠两侧卵巢，连续观察72周，构建诱发性卵巢恶性肿瘤大鼠模型。模型构建成功后，腹部可扪及肿块，呈进行性增大，质地较硬，边界不清；精神萎靡、进食少、消瘦、腹部膨隆或蛙形腹，并逐渐加重；卵巢明显增大，形态不规则，表面呈结节状或较光滑，伴出血及坏死；肿瘤与周围组织有不同程度的粘连，多处见大小不等的肿瘤结节；病理学检查以腺癌为主，有局部浸润，腹膜等种植性转移、肺的血行转移，并出现血性腹水和胸水［25］。西医诊断符合1、2①③④、3①②④，西医临床吻合度75%；符合中医主证1②、2④、3①、4①，次证1①②、3④⑤、6①⑩，中医临床吻合度21%。移植性动物模型可分为原位移植动物模型和异位移植动物模型。构建卵巢癌原位移植模型，是将卵巢肿瘤组织或细胞悬液移植到与肿瘤原发部位相对应的移植宿主卵巢器官组织内。如同源小鼠的卵巢囊下原位注射ID8小鼠卵巢表面上皮细胞系（MOSEC）生成上皮卵巢癌（EOC）小鼠模型［33］。优点是操作相对简单、建模周期短、移植瘤成功率高，生长速度快，来源容易；缺点是缺少肿瘤发生过程，不能与临床肿瘤发生发展过程全吻合。构建卵巢癌原位移植模型多选用C57BL6雌性小鼠、BALB/c雌性小鼠、SD雌性大鼠等作为模型动物。张骄等［26］取皮下移植瘤构建成功的裸鼠肿瘤组织，在肋骨与股骨之间的空虚部位做平行于脊椎的长约1 cm的纵切口，暴露腹腔，用眼科镊牵出卵巢，塞入已准备好的肿瘤组织块，于卵巢破口深处缝合，历时4周成功构建模型。卵巢癌原位移植模型中，成瘤的裸鼠腹部可触及肿块，逐渐消瘦，腹围增加，活动减少，对外界反应迟钝；有病理学检查，肿瘤转移至肺、膈肌、肝、胰、胃、髂窝淋巴结等处［26］。西医诊断符合1、2④、3①④，西医临床吻合度67.5%；符合中医主证1②、2④、3①、4①，次证1②、3④⑤、6①，中医临床吻合度19%。卵巢癌异位移植模型分为腹腔种植模型、淋巴转移模型、皮下移植模型。异位移植优点是西医构建模型相似度高，所呈现病理指标与患者肿瘤组织表达的高度一致，很好地保留了来源肿瘤特征；缺点是手术复杂、耗时，要求技术高，需免疫缺陷动物，成本高，术后并发症多。卵巢癌腹腔种植模型可选用Fischer344雌性大鼠、SCID雌性裸鼠、仔猪等动物。以卵巢癌腹腔种植动物模型为例，张辉等［27］通过对SCID鼠腹腔注射人卵巢癌SKOV3细胞，观察40 d，构建卵巢癌腹腔种植动物模型。模型构建成功后，小鼠腹部均能触及包块，小鼠出现不同程度的行为迟钝、目光呆滞、腹部膨隆或蛙形腹、消瘦明显，盆腔、横膈、肝周出现移植瘤；光镜下能发现小鼠肿瘤组织均保持了人卵巢癌的特点，且有CA125表达［27］。西医诊断符合1、2④、3①②④、4③，西医临床吻合度71.2%；符合中医主证2④、3①、4①，次证1②、3④⑤，中医临床吻合度14%。另外，构建淋巴转移动物模型可将VEGF-D重组质粒DNA或对照载体转染人卵巢浆液性腺癌SKOV3细胞皮下注射到裸鼠的足垫中，建模时间12~15周，建模成功后取材，通过苏木精-伊红染色和CA125/CD40染色评估肿瘤向淋巴结的转移［34］。皮下移植动物模型多选用Fischer344大鼠、BALB/c雌性小鼠，如蔡智慧等［35］将卵巢癌SKOV-3细胞悬液皮下注射于BALB/c雌性小鼠右前肢腋窝外侧，7 d后测量肿瘤体积达到3~4 mm³，即认为卵巢癌皮下移植动物模型构建成功。人源肿瘤组织异种移植模型的优点是保留了肿瘤原始特征，同时通过小鼠多次传代保持生物学稳定性；缺点是人组织标本难获得、动物维护成本高、植入率不稳定及植入后潜伏期长。构建人源卵巢肿瘤组织异种移植模型多选用NOD/SCID小鼠、SCID裸鼠、雌性无胸腺BALB/c-nu/nu小鼠等。李巍等［28］取卵巢癌患者新鲜手术切除组织样本利用25号套管针将卵巢肿瘤组织1~2块接种于NOD/SCID小鼠腋背部皮下，每周监测肿瘤生长，当移植瘤体积为500~1 000 mm3时即认为建模成功，成功后进行传代移植。小鼠活动、精神状态、外界反应、饮食、二便等均正常，肿瘤病理检查与人卵巢癌结构及瘤细胞异型特征基本一致，免疫组化证实移植瘤组织与患者肿瘤组织高度一致［28］。此种方法吻合度低，西医诊断符合1，西医临床吻合度60%。卵巢癌基因修饰动物模型分为卵巢癌基因敲除动物模型和卵巢癌转基因动物模型。基因敲除模型通过使外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组，使之整合到预定位点上并代替原有基因。该模型的优点是肿瘤模型的致癌过程和病理表现更接近人体，为探索人卵巢癌的病因及发病机制、发病过程、转移、多药耐药等生物学行为提供了一种可靠的手段；缺点是操作复杂、成功率低、肿瘤缺乏异质性，费用高，不易被影像学检测。卵巢癌基因敲除动物模型选用有FORKO雌性小鼠等［36］。卵巢癌转基因动物模型是将外源基因导入小鼠受精卵或用重组病毒携带目的基因感染早期胚胎，产生携带外源基因的小鼠品系［37］。优点是增强研究的指向性，能研究卵巢癌的发生发展过程；缺点是要求技术高，操作复杂，可操作性不强。卵巢癌转基因动物模型选用有Amhr2cre/+雌性小鼠，通过将腺病毒-Cre注射到卵巢法氏囊和/或与Amhr2cre/+小鼠杂交来删除调节性floxed基因，可以将卵巢表面上皮细胞（OSE）转化为卵巢癌细胞［38］。卵巢癌基因修饰动物模型均可出现腹部肿块，大小不等，腹腔中有血性腹水，有子宫肿块，增大的囊性肾脏；肿瘤广泛扩散并侵犯网膜；组织病理学检查卵巢表面几乎完全被深染的细胞核和多边形或椭圆形的嗜酸性细胞质肿瘤细胞取代。西医诊断符合1、3①②，西医临床吻合度65%；符合中医主证2④、3①、4①，次证3④⑤，中医临床吻合度13%。卵巢癌动物模型具体吻合度情况见增强出版附加材料。5 讨论本文结合卵巢癌西医临床诊断标准及中医辨证分型对卵巢癌动物模型进行评价，十分有利于基础研究与临床之间产生更为密切的联系。通过对卵巢癌动物模型应用情况进行统计，发现移植性动物模型最为常见。本文以造模成功的动物模型的客观表现为依据，进行吻合度分析，得出人源肿瘤组织异种移植卵巢癌动物模型的吻合度最低，诱发性卵巢癌动物模型的临床吻合度最高，各卵巢癌动物模型的中医吻合度均比西医吻合度低。诱发性卵巢癌动物模型在肿瘤生长方式、疾病进展过程、并发症等方面与人卵巢癌类似，是较为理想的卵巢癌动物模型。该动物模型虽然在一定程度上能够模拟卵巢癌发病的病因病机，能够体现中西医的部分指标，但对中医证候的区分欠缺。基于各模型的证候表现，比较分析认为，除人源肿瘤组织异种移植模型外，各模型均可适用于气滞证；诱发性模型及原位移植模型还较适用于气虚证。除此之外，各模型对其他证型的体现还有待提高。以上卵巢癌动物模型辨证分型结果可供科研者们进行卵巢癌动物模型构建时参考。目前构建的卵巢癌动物模型均存在一定局限性，如对小鼠的中医证候指标的观察不全面，大部分动物模型构建中缺乏对小鼠舌象的记录观察，且观察指标不统一，缺乏规范性。在一定程度上反映了当前研究者们构建卵巢癌动物模型时对中医证候重视度的欠缺。对此，本文提出几点建议，以期后续科研者们能够不断优化卵巢癌造模方法。5.1　构建病证结合动物模型动物模型中增加中医证候的构建，有利于提高动物模型的中医证候吻合度。目前，中医病证结合模型的研究日益增多。如周晟芳等［39］根据中医学“恐伤肾”和“寒凝血瘀”的理论，每日以冰水冷敷在大鼠胸前区并惊扰大鼠半小时，皮下加注相应剂量的氢化可的松，构建肾虚血瘀证动物模型；左冠状动脉前降支结扎，最后以检查大鼠心电图，观察大鼠体征及西医的生化指标等方式，以验证心肌缺血型冠心病肾虚血瘀病证结合模型制备成功。买鹏宇等［40］对小鼠进行了实验性自身免疫性前列腺炎造模后，采取高脂饲料（含胆固醇、蛋黄粉、猪油）喂食，饮水予特制饮料（单日米酒、双日蜂蜜）饲养，每日10：00至14：00放入湿热环境为主的模室［温度（35±2） ℃、湿度（90±5）%］成功构造湿热证前列腺炎模型。倪喆鑫等［41］将小鼠进行为时6 min的冷水浴1周，出现耳廓血流变缓，爪甲青紫时，即认为构造寒凝血瘀证小鼠模型成功；再注射雌激素溶液，将内膜碎片进行腹腔移植，小鼠自然生长3周后检出腹腔内出现明显内异病灶，即寒凝血瘀型的子宫内膜异位症小鼠模型造模成功。这些动物模型造模方法为构建卵巢癌病证结合动物模型提供了参考依据。5.2　西医指标“中医化”在构建卵巢癌动物模型时，除了检测卵巢癌西医病理指标外，还可以检测中医证候的“西医指标”。如卵巢癌出现血瘀证候时，可分析血液流变学。恶性肿瘤的血液流变学改变主要以高黏滞血症、血清中纤维蛋白原含量增加为主要表现，通过观察这类症状的出现和检测理化指标的变化，将其与中医血瘀证巧妙地联系到一起［42］。刘悦等［43］研究瘀毒互结型动物模型，在造模24 h后观察大鼠中医证候宏观评价指标，根据血氧仪监测出的脉象，中医舌象图片及表现在外的黑尾长度判定瘀毒互结证是否形成。在宏观指标的把控上，卵巢癌动物模型的外在表现也需要进行相应观察记录，将观察结果与中医证型证候表现作对比。构建的模型有了更多的数据结果作支撑，将会更具有说服力，也更科学，全面。5.3　以方测证通过选用该证型代表方，观察疗效，反证中医证候模型的成功构建。如刘欣等［44］对大鼠分组，除正常组外，均灌薄荷油进行造模，造模成功后，实验组灌右归丸，观测动物宏观状态表现及客观生化指标，21 d后发现模型组发生的改变基本符合阳虚状态表现，而右归丸组表现出一定治疗作用，研究采用以方测证的方法验证模型的成功构建。郭春荣等［45］通过以地塞米松灌胃和卵蛋白注射、吸入，构造大鼠肾阳虚哮喘模型，比较六味地黄汤和金匮肾气方治疗肾阳虚哮喘后大鼠RhoA、Rock2蛋白表达量及病理学检查等结果，发现金匮肾气汤对此模型治疗有效，反证肾阳虚模型的构建成功。王明珠等［46］研究小鼠脾虚与诱导性关节炎之间关系，采用潮湿环境和饮用冰水诱导DBA/1小鼠脾虚证，给予牛源性Ⅱ型胶原建立诱导性关节炎模型，采用以方测证，用参苓白术散治疗脾虚胶原诱导型关节炎小鼠，发现脾虚证缓解，反证脾虚模型的构建。除了考虑症状因素，对于动物自身的体质因素、自身发病情况、外界环境因素也应严格掌握［47］。卵巢癌动物模型的构建方法还有待进一步提高。可从以下两个方面考虑，一是达到中医药可发挥疗效的现代医学疾病病理阶段标准，二是达到与中医药主治相吻合的中医“证”的标准［48］。疾病处在不断发展的阶段，证候的形成与疾病所处的阶段密切相关，掌握疾病动物模型现代医学不同的病理阶段与中医“证”的关系，对卵巢癌动物模型的成功构建至关重要。6 结语在动物模型建立过程中，不仅要求症状符合，其病因、病机和证候之间的关联性也应有所体现。期望后续科研者们能够不断优化造模方法。通过不断观察总结，构建系统规范的中西医结合卵巢癌动物模型。提高中医证候的吻合度，以便更好地实现中西医融合，为解决卵巢癌的防治问题提供新思路与新方法。