Herb-Q法に基づく当帰薬材及び加工品の分子定量検出

ZHANG Mingyu ,  

JIANG Wenjun ,  

JI Baoyu ,  

WANG Yue ,  

ZHANG Haitao ,  

ZHANG Haobo ,  

FENG Xue ,  

LI Xiwen ,  

摘要

目的:当帰は一般的によく使用される大量の薬食同源薬材ですが、市場では混入偽造が頻発しており、製剤の臨床効果に深刻な影響を及ぼしています。現在、その混入品の定性的鑑別技術は比較的成熟していますが、加工品の混入定量検出方法はまだ確立されていません。本研究では、当帰および主な近縁容易混同品である「土当帰」(朝鮮当帰)を例に定量検出研究を行い、当帰およびその加工品の薬草分子定量検出法(Herb-Q)の確立を目指し、市販の当帰薬材および関連健康製品の定量検出技術の確立に示範を提供することを目的とします。方法:葉緑体ゲノム全配列を基に、当帰および朝鮮当帰の特異的単一塩基多型(SNP)座を選別しました。当帰特異的座を選び、異なる混入比率の混合薬材粉末を用いて定量法の線形性、定量下限、検出下限、再現性を検討しました。活血止痛散の異なる3つの混入比率(15%、25%、35%)でHerb-Q法の当帰含有中成薬の定量検出精度を検証しました。結果:当帰属123件の葉緑体ゲノム配列を比較し、種内保存性、種間特異性、およびピロリン酸高速シーケンスの要件を満たす原則に基づき、葉緑体ゲノム配列NC_042826.1の9674位点(A/G)、およびNC_029393.1の38592位点(T/C)がそれぞれ当帰および朝鮮当帰の専属性分子鑑別座として特定されました。当帰専属性の9674位点(A/G)を選択し、構築したHerb-Q法の線形関係のR²値は0.9974(R²>0.99)で良好な線形性を示しました。定量下限および検出下限はいずれも2.0%であり、再現性も良好(相対標準偏差(RSD)<2.0%)でした。Herb-Q法に基づく定量系を用いて活血止痛散中の偽品朝鮮当帰混入量を検出したところ、3回の分子定量反復平均偏差は1.3%でした。結論:本研究は、当帰葉緑体ゲノム配列NC_042826.1の9674位点(A/G)に基づくHerb-Q定量検出法が、当帰および「土当帰」、ならびにその加工品に対して優れた適用性、客観性および正確性を有し、市販されている当帰由来製品(漢方製剤、食事栄養補助食品および健康食品等)の定量検出技術の支援となることを示しています。

关键词

薬草分子定量検出法(Herb-Q);当帰;混入;ピロリン酸シーケンス;定量研究

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