目的は、血瘀解毒方が低糖低酸素（OGD）損傷後の脳微小血管内皮細胞（BMECs）に及ぼす影響および介入メカニズムを探討することである。方法は、細胞増殖および活性検出（CCK-8）法を用いてOGD時間を決定し、血瘀解毒方含有薬物血清の作用濃度を選択した。細胞は完全無作為に空白血清培地群（KBXQ）、モデル群（OGD）、HYXQ群（OGD＋血瘀解毒方含有薬物血清）、3-メチルアデニン（3-MA）群（OGD＋3-MA）に分けた。倒立顕微鏡下で細胞形態を観察し、電顕下で細胞内のオートファゴソームおよびオートリソソームの数を観察した。CCK-8法で細胞生存率を検出し、in situ末端標識法（TUNEL）で細胞アポトーシス率を検出し、免疫蛍光法で細胞中の微小管関連タンパク質1軽鎖3（LC3）、閉塞タンパク（Occludin）発現を検出し、単層細胞の透過性を測定した。細胞は完全無作為にKBXQ群、モデル群（OGD）、HYXQ群、ホスファチジルイノシトール3キナーゼ（PI3K）阻害剤（LY294002）群（OGD＋LY294002）、HYXQ＋LY294002群（OGD＋血瘀解毒方含有薬物血清＋LY294002）に分け、ウェスタンブロット法により自己食作用関連分子酵母Atg6相同体1（Beclin1）、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、選択的自己食結合タンパク質（p62）、Occludin、リン酸化（p）-PI3K、PI3K、p-プロテインキナーゼB（Akt）、Akt、p-哺乳類ラパマイシン標的タンパク（mTOR）、mTORの発現レベルを検出した。結果は、OGD 6時間を最適モデル条件、血瘀解毒方含有薬物血清5%を最適作用体積とした。KBXQ群と比較してモデル群は倒立顕微鏡で明らかな細胞損傷が見られ、電顕ではオートファゴソームおよびオートリソソーム数が著増し、細胞生存率は著しく低下（P<0.01）、アポトーシス率は著しく上昇（P<0.01）、LC3タンパク蛍光強度は著しく上昇（P<0.01）、Occludin蛍光強度は著しく低下（P<0.01）、単層細胞透過性は著しく上昇（P<0.01）した。モデル群と比較しHYXQ群および3-MA群は細胞損傷が明らかに改善し、細胞内オートファゴソームおよびオートリソソーム数は明らかに減少し、生存率は著しく増加（P<0.01）、アポトーシス率は著しく低下（P<0.01）、LC3蛍光強度は著しく低下（P<0.01）、Occludin蛍光強度は著しく上昇（P<0.01）、単層細胞透過性は低下（P<0.05）した。ウェスタンブロットの結果は、KBXQ群と比較してモデル群はBeclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰの発現が著しく上昇（P<0.01）、p62、Occludin、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Aktおよびp-mTOR/mTORの発現レベルが著しく低下（P<0.01）した。モデル群と比較してHYXQ群はBeclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰの発現が著しく低下（P<0.01）、p62、Occludin、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Aktおよびp-mTOR/mTORの発現が著しく上昇（P<0.01）した。LY294002群はBeclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰの発現が明らかに上昇（P<0.05、P<0.01）、p62、Occludin、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Aktおよびp-mTOR/mTORの発現が著しく低下（P<0.01）した。LY294002群と比較してHYXQ+LY294002群はBeclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰの発現が著しく低下（P<0.01）、p62、Occludin、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Aktおよびp-mTOR/mTORの発現が著しく上昇（P<0.01）した。結論は、血瘀解毒方はOGD損傷を受けたBMECsを保護する作用があり、PI3K/Akt/mTOR自己食作用関連経路を活性化して自己食作用の過剰発現を抑制し、Occludinタンパク質および内皮バリア機能を保護する可能性があると考えられる。

脳微小血管内皮細胞;自己食作用;血瘀解毒方;ホスファチジルイノシトール3キナーゼ（PI3K）;プロテインキナーゼB（Akt）