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脂肪酸β酸化を通じた疏肝補腎毓麟湯の肝気鬱結ラット精子活力向上作用及び機序の検討
DENG Chaoyang
,
XIAO Min
,
JIANG Xiaocui
,
WANG Chaoyang
,
LYU Yinjuan
,
SHU Jinsong
,
ZHOU Yanyan
,
YU Xiaoming
,
DOI:
10.13422/j.cnki.syfjx.20252409
摘要
目的は、長鎖アシルCoA合成酶4(ACSL4)を介したミトコンドリア脂肪酸β酸化に基づき、疏肝補腎毓麟湯が肝気鬱結ラットの精子活力を向上させる作用およびメカニズムを研究することである。方法:40匹のSD雄ラットをランダム数字表法により正常群、モデル群、疏肝補腎毓麟湯高・低用量群(26、13 g·kg
-1
)、およびフルオキセチン群(1.8 mg·kg
-1
)に分けた。投薬はすべて胃管投与とした。正常群を除き、他の各群には慢性拘束法と尾刺激法を複合し肝気鬱結モデルを作製した。モデル作製終了後、各群に対応する薬物を21日間連続投与した。酵素免疫測定法(ELISA)により肝気鬱結ラットの血清のコルチコステロン(CORT)、テストステロン(T)、エストラジオール(E
2
)を測定した。電子分析天秤により体重、精巣および副精巣の重量を測定し、精巣指数および副精巣指数を計算した。全自動精子分析システムで精子濃度および精子活力を測定した。ヘマトキシリン・エオジン(HE)染色で精巣組織の組織学的変化を観察し、病理形態変化を評価した。フローサイトメトリーとミトコンドリア膜電位検出試薬キット(JC-1)等の蛍光プローブを用いて精子のミトコンドリア膜電位レベルを分析した。液相クロマトグラフィー質量分析(LC-MS)で精子の脂質代謝変化を検出し、代謝差異物をスクリーニングした。ELISAによりアセチルCoA(Acetyl-CoA)、アシルCoA(Acyl-CoA)活性および三リン酸アデノシン(ATP)レベルを測定した。免疫蛍光法(IF)で精巣組織のACSL4発現を検出した。ウエスタンブロット法で精巣組織のACSL4およびカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ1(CPT1)タンパク質発現レベルを測定した。正常群と比較してLC-MSは24の差異脂肪酸代謝産物をスクリーニングし、疏肝補腎毓麟湯介入後11の差異脂肪酸代謝産物が上方調節され、パスウェイ富集解析は主に脂肪酸生合成および脂肪酸代謝を示した。正常群と比較して、モデル群のラットは精子密度と活力、副精巣指数、ミトコンドリア膜電位が有意に低下し、Acetyl-CoA、Acyl-CoA活性、ATP含量が有意に減少し、ACSL4およびCPT1タンパク質発現が有意に低下した(
P
<0.01)。モデル群と比較して、疏肝補腎毓麟湯各用量群は精子密度と活力、副精巣指数、ミトコンドリア膜電位が有意に上昇し、Acetyl-CoA、Acyl-CoA活性、ATP含量が有意に上昇(
P
<0.01)、ACSL4、CPT1タンパク質発現が顕著に上昇した(
P
<0.05、
P
<0.01)。結論:疏肝補腎毓麟湯はACSL4媒介のミトコンドリア脂肪酸β酸化を活性化しATP生成を増加させ、肝気鬱結ラットの精子活力を改善できる。
关键词
疏肝補腎毓麟湯;情志;肝気鬱結;精子活力;ミトコンドリア;脂肪酸β-酸化
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