目的は、黄連解毒湯が外泌体内の好中球関連ケモカインの発現を調整することにより、中大脳動脈閉塞（MCAO）マウスの脳内好中球の浸潤を抑制し、治療効果を得られるかを探ることである。方法は、130匹のSPF級C57BL/6J雄マウスを無作為に4群に分けた：偽手術群、MCAOモデル群、黄連解毒湯群（6 g·kg^-1）およびジンナド群（21.6 mg·kg^-1）、ジンナド群は10匹、その他3群はそれぞれ40匹。黄連解毒湯群とジンナド群のマウスには、7日間連続して0.15 mL·（10 g）^-1の投薬量で経口投与を行い、偽手術群とモデル群には同量の生理食塩水を同じ経路で投与した。7日後にマウスに対し中大脳動脈閉塞手術を行い、右総頸動脈（CCA）の遠位・近位を結紮し、結紮間に小切開を加え、丸頭のシリコーンコーティング単糸を挿入して総頸動脈を閉塞した。単糸は1時間設置し、局所脳虚血モデルを構築した。モデル作製後24時間に神経機能障害スコア（Longaスコア）で神経機能状態を判定し、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド（TTC）染色で脳梗塞体積を測定し、レーザースペックルイメージングで脳血流状態を観察した。ヘマトキシリン-エオシン（HE）染色およびニスル染色で脳組織病理変化を観察し、超高速遠心分離とサイズ別分画でマウス血漿及び脳組織から外泌体を分離し、透過型電子顕微鏡（TEM）、粒径検査及びタンパク免疫ブロット法（Western blot）で外泌体を同定した。外泌体の長鎖RNAについてライブラリー構築とシーケンス解析を行い、リアルタイムPCRで血漿及び脳組織外泌体内の炎症及び好中球関連ケモカインmRNAの発現を検出した。酵素結合免疫吸着法（ELISA）で脳組織外泌体内の炎症及び好中球関連ケモカインタンパク質の発現を測定し、免疫組織化学で脳内好中球特異的タンパク質であるミエロペルオキシダーゼ（MPO）の発現量を検出した。結果は偽手術群と比較して、モデル群は神経機能スコアが著しく低下し（P<0.01）、脳梗塞が著明で（P<0.01）、脳血流が有意に減少し（P<0.01）、脳内に細胞壊死が出現し、ニスル小体数が著しく減少した（P<0.01）。血漿及び脳組織外泌体内のIL-1β、MPO、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL10、CCL2及びCCL3のmRNA発現が明らかに上昇し（P<0.05、P<0.01）、脳組織外泌体内のIL-1β、MPO、CXCL2及びCXCL10タンパク質発現も著しく増加し（P<0.05、P<0.01）、脳内のMPOタンパク陽性率及び平均光学濃度値が有意に上昇した（P<0.01）。モデル群と比較して、黄連解毒湯群及びジンナド群は神経機能スコアが有意に上昇し（P<0.05）、脳梗塞体積が著しく減少し（P<0.01）、脳血流量が有意に回復し（P<0.01）、脳内の壊死細胞が減少しニスル小体数が著しく増加し（P<0.01）、黄連解毒湯群の血漿及び脳組織外泌体内のIL-1β、MPO、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL10、CCL2及びCCL3のmRNA発現が明らかに低下し（P<0.05、P<0.01）、脳組織外泌体内のIL-1β、MPO、CXCL2及びCXCL10タンパク質発現も著しく減少し（P<0.05、P<0.01）、脳内のMPOタンパク陽性率及び平均光学濃度値が有意に低下した（P<0.01）。結論として、黄連解毒湯はMCAOマウスの血漿及び脳組織外泌体内の好中球関連ケモカイン発現を有効に調節し、脳内好中球浸潤を減少させて治療効果を得ることができる。

黄連解毒湯;虚血性脳卒中;外泌体;ケモカイン;好中球浸潤