목적은 이파틸린(Eup)이 zeste 유전자 증폭체 2/히스톤 H3 27번 위치 리신 삼중 메틸화 (EZH2/H3k27me3) 신호 경로를 통해 비소세포폐암(NSCLC)의 증식 및 침습 전이를 억제하는 기전을 탐구하는 것이다. 방법: 체내 실험에서 H1299 무균 흰쥐 피하 종양 모델을 구축하여 Eup의 항 NSCLC 효과를 평가하였고, 면역조직화학(IHC-P)과 세포 증식 및 침습 전이 관련 단백질(증식 세포 핵 항원(PCNA), 기질 금속 단백분해효소(MMP)-2 및 MMP-9, 혈관 내피 성장 인자 A(VEGFA)) 발현에 미치는 영향을 분석하였다. 체외 세포 실험에서는 세포 증식 및 활력 측정(CCK-8)을 통해 서로 다른 농도의 Eup (0~200 μmol·L^-1)이 H1299 세포 활성에 미치는 영향을 평가하여 적절한 약물 농도를 선별하였다. 평판 클론 형성 및 5-에틴-2'-디옥시유리딘(EdU) 검사를 통해 Eup가 H1299 세포 증식에 미치는 영향을 평가하고, 스크래치 실험 및 침습 실험을 통해 Eup가 H1299 세포의 이동 및 침습에 미치는 영향을 확인하였다. 인체 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)를 이용한 혈관 생성 실험으로 Eup의 혈관 생성 효과를 평가하였다. 전사체 분석을 통해 Eup가 H1299 세포에 미치는 작용 표적과 주요 기능을 선별하였고, 분자 도킹 및 분자 동역학 시뮬레이션으로 Eup 약물 분자와 작용 표적 간 결합 능력 및 결합 상태를 예측하였다. 웨스턴 블랏법(Western blot)을 채택하여 Eup가 EZH2/H3K27me3 신호 경로 단백질과 증식, 침습 전이 관련 단백질인 PCNA, MMP-2, MMP-9 및 VEGFA 발현에 미치는 영향을 검출하였다. 결과: 무균 흰쥐 피하 종양 모델에서, 모델군과 비교 시 Eup 처리군은 용량 의존적으로 H1299 세포 이종 이식 종양 성장 억제를 보였으며, 종양 억제율이 유의하게 증가하였다(p<0.05). IHC-P 결과 고용량 Eup 처리군에서 체내 PCNA, MMP-2, MMP-9 및 VEGFA 단백질 발현이 유의미하게 억제되었다(p<0.05). 체외 세포 실험에서 무처리군과 비교 시 Eup 처리군은 농도 의존적으로 NSCLC 세포 증식, 침습 및 전이를 억제하였다. 전사체 분석 결과 Eup 처리군에서 EZH2 발현이 유의미하게 하향 조절되었으며, 항종양 전이 기능과 관련성이 나타났다. 분자 도킹 및 분자 동역학 시뮬레이션은 Eup와 EZH2 간 강한 결합력과 안정적인 결합 상태를 보여주었다. 웨스턴 블랏 검출 결과, 모델군 대비 Eup 처리군은 체내외에서 용량 의존적으로 EZH2, H3K27me3, PCNA, MMP-2, MMP-9 및 VEGFA 단백질 발현을 유의미하게 억제하였으며(p<0.05), 체외 실험에서 플라스미드 형질감염에 의한 EZH2 과발현은 Eup에 의한 H1299 세포 증식 및 침습 전이 관련 주요 단백질 억제 효과를 부분적으로 역전시켰다. 결론: Eup는 체내외에서 H1299 세포 증식, 이동 및 침습을 효과적으로 억제하며, 그 기전은 EZH2/H3K27me3 신호 경로의 억제 및 증식, 침습 전이 관련 단백질 PCNA, MMP-2, MMP-9, VEGFA 발현의 억제와 연관이 있다. Eupatilin은 NSCLC 증식 및 침습 전이를 억제할 수 있는 잠재적 활성 약물이다.

비소세포폐암;Eupatilin;Zeste 유전자 증폭체 2/히스톤 H3 27번 위치 리신 삼중 메틸화 (EZH2/H3K27me3) 신호 경로;증식;침습 전이