목적은 인산지질이노시톨 3-키나제(PI3K)/단백질 키나제 B(Akt)/래파마이신 표적 단백질(mTOR) 신호 경로를 기반으로 주란탕이 인간 난소 과립 세포(KGN)의 과도한 자가포식을 억제하여 조기 난소 기능 부전(POI)을 개선하는 작용 기전을 탐구하는 것이다. 방법: 세포 증식 및 활성 검사(CCK-8)법을 통해 싸이클로포스파미드가 KGN에 미치는 최적 농도를 결정하여 POI 세포 모델을 구축하였고, 이를 기반으로 주란탕 약물이 들어있는 혈청이 KGN 세포 모델 활력에 미치는 영향을 평가하였다. 최적 투여 농도를 확정한 후, KGN 세포를 공백군(20% 공백 혈청), 모델군(20% 공백 혈청+5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드), 주란탕 약물 혈청군(20% 주란탕 약물 혈청+5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드), 자가포식 억제제군(20% 공백 혈청+5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드+20 μmol·L^-1 하이드록시클로로퀸), 자가포식 억제제+주란탕 약물 혈청군(20% 주란탕 약물 혈청+5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드+20 μmol·L^-1 하이드록시클로로퀸), 부가레군(20% 부가레 약물 혈청+5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드)으로 나누어 48시간 배양 후 유세포분석법으로 각 군 KGN 세포의 세포자멸사율을 측정하고, 웨스턴블랏법으로 각 군 KGN에서 PI3K, p-Akt 및 Akt, 인산화(p)-mTOR 및 mTOR 신호 경로 단백질 발현과 자가포식 관련 단백질인 Beclin1, ATG5, 미세관 관련 단백질 1 경쇄 3(LC3) 발현을 확인하였다. 단일 단황설 서민염(MDC) 염색법으로 각 군 자가포식 정도를 평가하였다. 결과: 5 μmol·L^-1 싸이클로포스파미드로 KGN 세포를 48시간 처리하여 POI 세포 모델을 성공적으로 구축하였고, KGN 세포 증식을 유의하게 억제하였으며, 싸이클로포스파미드의 억제 효과는 농도 의존적이었다. 20%, 30% 농도의 주란탕 약물 혈청은 세포 증식을 촉진하고, 싸이클로포스파미드의 억제 작용을 완화하였으며, 두 농도간 효능에는 차이가 없었다. 공백군과 비교하여 모델군 세포 자멸사율이 유의하게 증가하였고(p<0.01), PI3K, p-Akt, p-mTOR 단백질 발현이 유의하게 감소하였으며(p<0.01), Beclin1, LC3, ATG5 자가포식 관련 단백질 발현이 유의하게 증가하였고(p<0.01), Akt와 mTOR 단백질 발현은 유의한 변화가 없었으며, MDC 자가포식 형광 강도는 크게 증가하였다(p<0.01). 모델군과 비교하여 공백군, 모델군, 주란탕 약물 혈청군, 자가포식 억제제군, 자가포식 억제제+주란탕 약물 혈청군, 부가레군 세포 자멸사율은 모두 유의하게 감소하였으며(p<0.05, p<0.01), 자가포식 억제제+주란탕 약물 혈청군에서 가장 효과가 우수하였다. PI3K, p-Akt, p-mTOR 단백질 발현은 유의하게 증가하였고(p<0.05, p<0.01), 자가포식 억제제+주란탕 약물 혈청군에서 가장 뚜렷하게 증가하였다(p<0.01). 자가포식 관련 단백질인 Beclin1, ATG5 발현은 유의하게 감소하였으며(p<0.05, p<0.01), 주란탕 약물 혈청군과 부가레군에서 LC3 단백질 발현은 유의하게 감소하였다(p<0.05, p<0.01). 자가포식 억제제군과 자가포식 억제제+주란탕 약물 혈청군에서 LC3 단백질 발현이 감소하였으나 통계적 유의성은 없었다. 결론: 주란탕은 아마도 PI3K/Akt/mTOR 경로를 활성화하여 세포의 과도한 자가포식을 억제하고, 싸이클로포스파미드가 KGN 세포 모델에 미치는 손상을 역전시켜 POI를 개선하는 것으로 판단된다.

주란탕; 조기 난소 기능 부전; 싸이클로포스파미드; 자가포식