목적은 康复新液(KFX) 액체의 체외 건선 항염증 활성 및 잠재적 작용 메커니즘을 탐구하여 KFX 액체의 건선 억제 효과에 대한 실험적 근거를 제공하는 것이다. 방법은 먼저 유도되지 않은 인간 불멸화 각질세포(HaCaT 세포)를 7개 그룹으로 나누었으며, 대조군과 서로 다른 농도의 KFX 액체(5, 10, 20, 40, 80, 160 g·L-1) 그룹으로 구분했다. 각 농도의 KFX로 처리 후 세포 증식 및 활성을 세포 증식 시험 키트(CCK-8)로 검사했다. 다음으로 유도되지 않은 HaCaT 세포를 6개 그룹(대조군, 서로 다른 농도의 rh-IL-17A(5, 10, 50, 100, 120 g·L-1))으로 나누어 재조합 인간 인터루킨-17A(rh IL-17A) 처리 후 세포 증식 영향을 검사하여 최적 유도 농도를 선별했다. 그 후 정상 HaCaT 세포를 대조군과 KFX 액체 그룹(5, 10, 20, 40, 80, 160 g·L-1)으로 나누었으며, 대조군을 제외한 그룹은 최적 유도 농도의 rh IL-17A로 건선 세포 모델을 구축하여 KFX 액체가 건선 유사 HaCaT 세포 증식에 미치는 영향을 관찰했다. 마지막으로 유도되지 않은 HaCaT 세포를 6개 그룹(대조군, rh IL-17A, MTX, 서로 다른 농도의 KFX 액체(20, 40, 80 g·L-1))으로 나누었고, 대조군을 제외한 그룹은 최적 유도 농도의 rh IL-17A로 건선 세포 모델을 구축한 후 약물 처리 후 긁기 실험으로 세포 이동 수준을 측정하고 실시간 형광 정량중합효소연쇄반응(Real-time PCR)으로 Ki-67 항원(Ki67), S100 칼슘 결합 단백질 A7(S100A7), S100 칼슘 결합 단백질 A8(S100A8), S100 칼슘 결합 단백질 A9(S100A9) mRNA의 상대적 발현 수준을 검출하여 KFX 액체의 체외 항건선 활성을 종합 평가했다. 또한 건선 유사 HaCaT 세포에서 인터루킨-1β(IL-1β), 인터루킨-6(IL-6), 케모카인-20(CXCL-20) 염증 관련 인자 mRNA 상대 발현과 티로신 키나제 3(JAK3), 인산화 티로신 키나제 3(p-JAK3), 신호 전달 및 전사 활성화 인자 3(STAT3), 인산화 신호 전달 및 전사 활성화 인자 3(p-STAT3) 단백질 발현 수준을 통해 작용 메커니즘을 탐구했다. 결과는 대조군과 비교했을 때 80 g·L-1 KFX 액체 처리 72시간 후(P<0.05) 및 160 g·L-1 KFX 액체 처리 각 시점마다 HaCaT 세포 증식 활성이 현저히 영향받았으며(P<0.01), 기타 농도의 KFX 액체는 세포 형태 및 증식에 유의한 차이가 없어 KFX 액체가 HaCaT 세포에 비교적 안전함을 나타냈다. 대조군과 달리 다양한 농도의 rh IL-17A 처리 후 24시간 동안 세포 증식 활성이 현저히 증가했으며, 100 μg·L-1 농도에서 세포 활성이 가장 높았고(P<0.05) 세포 밀도는 100%에 가깝고 형태도 완전하여 최적 유도 농도를 확인했다. KFX 액체가 rh IL-17A 유도 건선 유사 세포에 미치는 결과는 KFX 액체가 rh IL-17A 유도 건선 유사 HaCaT 세포의 증식 활성을 효과적으로 억제(P<0.01)할 뿐만 아니라 세포 이동 능력도 현저히 감소시키고(P<0.01), Ki67, S100A7, S100A8, S100A9 mRNA 상대 발현 수준도 유의미하게 낮춘(P<0.01)다는 점을 보여주었다. 또한 KFX 액체는 rh IL-17A 유도된 건선 유사 세포 내 IL-1β, IL-6, CXCL-20 mRNA의 상대 발현 수준을 유의하게 감소시키고(P<0.01) JAK3, STAT3 단백질 인산화 수준도 현저히 억제하였다(P<0.05, P<0.01). 결론적으로 KFX 액체는 유도되지 않은 HaCaT 세포에 독성이 없으며 rh IL-17A 유도 건선 유사 HaCaT 세포의 증식을 억제하고 세포 이동 능력을 줄여 체외에서 우수한 항건선 활성을 나타내며, 그 메커니즘은 JAK3/STAT3 신호 경로 및 관련 염증 세포 인자 발현 조절과 단백질 인산화 억제와 관련이 있을 수 있다.
关键词
건선;康复新液;세포 증식;이동 능력;염증 인자;티로신 키나제 3 (JAK3)/신호 전달 및 전사 활성화 인자 3 (STAT3) 신호 경로