목적은 황련해독탕이 외포체 내 중성구 관련 케모카인의 발현을 조절하여 중뇌동맥폐쇄(MCAO) 마우스의 뇌 내 중성구 침윤을 억제함으로써 치료 효과를 얻을 수 있는지 여부를 연구하는 것이다. 방법은 SPF 급 C57BL/6J 수컷 마우스 130마리를 무작위로 4개 그룹으로 나누었다: 가짜 수술군, MCAO 모델군, 황련해독탕군(6 g·kg^-1), 그리고 진나도군(21.6 mg·kg^-1)으로, 진나도군은 10마리, 나머지 3개 군은 각 40마리였다. 황련해독탕군과 진나도군에는 하루 0.15 mL·(10 g)^-1 용량으로 경구 투여를 7일간 연속으로 실시하였으며, 가짜 수술군과 모델군에는 동일한 방법으로 같은 양의 생리식염수를 투여하였다. 7일 후 마우스에게 중뇌동맥폐쇄 수술을 시행하였고, 오른쪽 총경동맥(CCA)의 원위 및 근위부를 결찰하였으며, 두 결찰선 사이에 작은 절개를 하여 둥근 머리의 실리콘 코팅 단사를 삽입하여 경동맥을 폐쇄하였고, 단사는 1시간 동안 유지하여 국소 뇌 허혈 모델을 구축하였다. 모델링 후 24시간에 신경 기능 장애 점수(Longa 점수)를 평가하여 각 군 마우스의 신경 기능 상태를 판단하였고, 2,3,5-트리페닐테트라졸리움염화물(TTC) 염색으로 각 군 마우스의 뇌경색 크기를 측정하였으며, 레이저 스펙클 영상법으로 뇌혈류 상태를 관찰하였다. 또한 헤마톡실린-에오신(HE) 염색 및 니슬 염색으로 뇌 조직 병리 변화를 관찰하였고, 초고속 원심분리 및 크기별 분리를 통해 마우스 혈장 및 뇌 조직에서 외포체를 분리한 후, 투과 전자 현미경(TEM), 입자 크기 검사 및 웨스턴 블랏(Western blot) 분석으로 외포체를 확인하였다. 외포체의 장쇄 RNA 라이브러리를 구축하고 시퀀싱 분석을 실시했으며, 실시간 형광 정량 중합효소 연쇄반응(Real-time PCR)으로 각 군 마우스 혈장 및 뇌 조직 외포체 내 염증 및 중성구 관련 케모카인 mRNA 발현을 검출하였다. 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA)으로 각 군 마우스 뇌 조직 외포체 내 염증 및 중성구 관련 케모카인 단백질 발현을 측정하였으며, 면역조직화학으로 뇌 내 중성구 특이 단백질인 마이엘로퍼옥시다제(MPO) 발현량을 검출하였다. 결과는 가짜 수술군과 비교했을 때, 모델군 마우스는 신경 기능 점수가 유의하게 감소(P<0.01)하였고, 뇌경색이 뚜렷하게 발생하였으며(P<0.01), 뇌혈류가 크게 감소(P<0.01)했으며, 뇌 내 세포 괴사가 발생하고 니슬 소체 수가 유의하게 감소(P<0.01)하였고, 혈장 및 뇌 조직 외포체 내 IL-1β, MPO, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL10, CCL2 및 CCL3 mRNA 발현이 현저히 증가(P<0.05, P<0.01)하였고, 뇌 조직 외포체 내 IL-1β, MPO, CXCL2 및 CXCL10 단백질 발현도 크게 증가(P<0.05, P<0.01)하였으며, 뇌 내 MPO 단백질 양성률 및 평균 광학 밀도도 유의하게 상승(P<0.01)하였다. 모델군과 비교했을 때, 황련해독탕군 및 진나도군 마우스는 신경 기능 점수가 현저히 증가(P<0.05)하였고, 뇌경색 부피가 크게 감소(P<0.01)하였으며, 뇌혈류가 뚜렷하게 회복(P<0.01)되었고, 뇌 내 괴사 세포가 줄어들고 니슬 소체 수가 유의하게 증가(P<0.01)하였으며, 황련해독탕군 마우스 혈장 및 뇌 조직 외포체 내 IL-1β, MPO, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL10, CCL2 및 CCL3 mRNA 발현이 현저히 감소(P<0.05, P<0.01)하였고, 뇌 조직 외포체 내 IL-1β, MPO, CXCL2 및 CXCL10 단백질 발현도 현저히 감소(P<0.05, P<0.01)하였으며, 뇌 내 MPO 단백질 양성률 및 평균 광학 밀도는 유의하게 낮아졌다(P<0.01). 결론적으로 황련해독탕은 MCAO 마우스 혈장 및 뇌 조직 외포체 내 중성구 관련 케모카인 발현을 효과적으로 조절하여 뇌 내 중성구 침윤을 감소시키고 치료 효과를 달성할 수 있다.

황련해독탕;허혈성 뇌졸중;외포체;케모카인;중성구 침윤