Detecção molecular quantitativa da angélica chinesa e seus produtos processados com base no método Herb-Q

ZHANG Mingyu ,  

JIANG Wenjun ,  

JI Baoyu ,  

WANG Yue ,  

ZHANG Haitao ,  

ZHANG Haobo ,  

FENG Xue ,  

LI Xiwen ,  

摘要

Objetivo: A angélica chinesa (当归), como uma erva medicinal amplamente utilizada e em grande escala, apresenta frequentes casos de adulteração no mercado, o que afeta seriamente a eficácia clínica dos preparados. Atualmente, as técnicas de identificação qualitativa de adulterações estão relativamente maduras, mas os métodos quantitativos para detecção de adulterações em produtos processados ainda são inexistentes. Este estudo realiza uma pesquisa quantitativa usando como exemplo a angélica chinesa e seu principal análogo próximo facilmente confundido, a “tu dang gui” (angélica coreana), com o objetivo de estabelecer um método molecular de detecção quantitativa de ervas (Herb-Q), servindo de modelo para estabelecer técnicas quantitativas para matérias-primas de angélica e produtos relacionados à saúde. O método baseia-se na triagem de loci específicos de polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) no genoma completo do cloroplasto da angélica chinesa e coreana. Foram selecionados loci específicos de angélica para avaliar metodologicamente a quantificação usando pós de ervas misturados em diferentes proporções de adulteração (linearidade, limite de quantificação, limite de detecção e reprodutibilidade). Três proporções diferentes de adulteração (15%, 25%, 35%) foram usadas em pós ativos para validar a acurácia do método Herb-Q na detecção quantitativa de medicamentos chineses contendo angélica. Resultados: Ao comparar 123 sequências do genoma do cloroplasto do gênero Angelica, com base na conservação intraespécie, especificidade interespécie e requisitos de sequenciamento de pirosequenciamento de alto rendimento, os loci 9674 (A/G) do NC_042826.1 e 38592 (T/C) do NC_029393.1 foram determinados como sítios moleculares específicos para angélica chinesa e angélica coreana, respectivamente. O locus específico de angélica 9674 (A/G) foi selecionado para estabelecer a relação linear do método Herb-Q, com valor R² de 0,9974 (>0,99), mostrando boa linearidade. O limite de quantificação e o limite de detecção foram ambos de 2,0%, e a reprodutibilidade foi boa (desvio padrão relativo (RSD) <2,0%). O sistema quantitativo baseado no Herb-Q detectou a quantidade de adulteração de angélica coreana no pó ativo com uma média de desvio de 1,3% em três repetições moleculares. Conclusão: Este estudo demonstra que o método de detecção quantitativa Herb-Q baseado no sítio 9674 (A/G) do genoma do cloroplasto NC_042826.1 da angélica chinesa possui boa aplicabilidade, objetividade e precisão para angélica chinesa, “tu dang gui” e seus produtos processados, podendo fornecer suporte técnico para a detecção quantitativa de produtos derivados de angélica comercializados, como preparações medicinais chinesas, suplementos alimentares e produtos de saúde.

关键词

Método molecular quantitativo de detecção de ervas (Herb-Q); angélica chinesa; adulteração; sequenciamento por pirosequenciamento; estudo quantitativo

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