Objetivo: A angélica (当归), como uma erva medicinal e alimento amplamente utilizada, apresenta frequentes casos de adulteração no mercado, o que afeta seriamente a eficácia clínica dos preparados. Atualmente, as técnicas para identificação qualitativa de adulterantes estão relativamente maduras, mas os métodos para detecção quantitativa de adulterações em produtos processados ainda são inexistentes. Este estudo realiza uma investigação quantitativa tomando como exemplo a angélica e seu principal adulterante próximo “angélica terrestre” (朝鲜当归), com o objetivo de estabelecer um método molecular para detecção quantitativa de plantas medicinais e seus produtos processados (Herb-Q), oferecendo um modelo para o estabelecimento de técnicas de detecção quantitativa para a matéria-prima da angélica e seus produtos relacionados à saúde. O método baseia-se na seleção de sítios de polimorfismo de nucleotídeo simples (SNP) específicos da angélica e da angélica coreana a partir do sequenciamento completo do genoma do cloroplasto. Foram selecionados sítios específicos da angélica para estudar a metodologia quantitativa usando misturas de pós de ervas com diferentes proporções de adulteração (linearidade, limite de quantificação, limite de detecção e reprodutibilidade). Três diferentes proporções de adulteração (15%, 25%, 35%) de um pó ativo para promoção da circulação sanguínea e alívio da dor foram usadas para validar a precisão do método Herb-Q na detecção quantitativa de medicamentos chineses contendo angélica. Resultados: Com base na comparação de 123 sequências do genoma do cloroplasto do gênero angélica, e baseado na conservação intraespécie, especificidade interespecífica e requisitos de sequenciamento em alto rendimento por pirofosfato, os sítios 9674 (A/G) na sequência do genoma do cloroplasto NC_042826.1 e 38592 (T/C) na sequência NC_029393.1 foram determinados como sítios moleculares específicos da angélica e da angélica coreana, respectivamente. O sítio específico da angélica na posição 9674 (A/G) foi selecionado para estabelecer a relação linear do método Herb-Q, com valor R² de 0,9974 (R² > 0,99), indicando boa linearidade. Os limites de quantificação e de detecção foram de 2,0%, e a reprodutibilidade foi boa [desvio padrão relativo (RSD) < 2,0%]. Com base no sistema quantitativo construído pelo método Herb-Q, detectou-se a quantidade de adulteração da angélica coreana no pó ativo, com um desvio médio repetido da quantificação molecular de 1,3%. Conclusão: Este estudo demonstra que o método de detecção quantitativa Herb-Q baseado no sítio 9674 (A/G) na sequência do genoma do cloroplasto NC_042826.1 da angélica possui boa aplicabilidade, objetividade e precisão para a angélica e “angélica terrestre” e seus produtos processados, podendo fornecer suporte técnico para a detecção quantitativa de produtos derivados da angélica comercializados, como preparações medicamentosas chinesas, suplementos dietéticos e produtos de saúde.
关键词
método molecular de detecção quantitativa de ervas (Herb-Q); angélica; adulteração; sequenciamento por pirofosfato; estudo quantitativo