Objetivo: O promotor U6 é um elemento chave no sistema de edição genética CRISPR/Cas9 em plantas dicotiledôneas, que conduz a expressão do RNA guia (sgRNA) e contém sequências repetidas palindrômicas curtas agrupadas. Promotores U6 endógenos geralmente possuem maior atividade transcricional, o que melhora significativamente a eficiência da edição gênica. Este estudo visa identificar promotores U6 endógenos na artemísia para otimizar seu sistema de edição genética CRISPR/Cas9, sendo de grande importância para o melhoramento molecular da artemísia. Método: Com base na sequência altamente conservada do snRNA nuclear U6 da arabidopsis, sequências de promotores U6 endógenos foram selecionadas do genoma completo da artemísia, então foi construído um vetor recombinante contendo o gene da luciferase (LUC) dirigido por promotores U6 candidatos, transformado de forma transitória no tabaco da Virgínia, e através de imagem in vivo e sistema repórter de luciferase dupla avaliou-se a atividade transcricional de cada promotor. Resultados: Foram clonados com sucesso 8 promotores U6 endógenos da artemísia. A análise de sequências mostrou que esses promotores contêm elementos cis conservados que influenciam sua atividade transcricional, como USE e TATA-box. O teste de atividade de luciferase dupla indicou que a atividade transcricional de AaU6-3, AaU6-1 e AaU6-5 foi significativamente maior que a de AtU6-26 em arabidopsis, sendo AaU6-3 a mais ativa. Conclusão: Este estudo identificou 3 promotores U6 endógenos com alta atividade transcricional na artemísia, fornecendo elementos funcionais importantes para a construção de um sistema eficiente de edição genética na artemísia, auxiliando no avanço do melhoramento molecular preciso e da inovação de recursos genéticos de alta qualidade da artemísia.

Artemísia; promotor U6; atividade transcricional