O objetivo é explorar o papel e o mecanismo do pó Taishan Panshi (TSPSP) na inibição dos danos causados pelo estresse oxidativo nas células trofoblásticas humanas (HTR-8/SVneo) e compreender o mecanismo do tratamento com TSPSP para abortos espontâneos (SA). Foi realizada uma análise diferencial de genes relacionada ao SA usando o banco de dados clínico (GEO), associada ao estresse oxidativo. Usando farmacologia de redes, foram selecionados os componentes ativos do TSPSP e construída uma rede “medicina chinesa tradicional - componentes - alvos - doença” para prever o mecanismo de ação do TSPSP. In vitro, as células HTR-8/SVneo foram divididas em grupo controle, grupo modelo, grupos com soro contendo TSPSP a 2,5%, 5%, 10%, e grupo com inibidor de Nrf2 (ML385, 30 μmol/L). Exceto o grupo controle, os demais foram estimulados com H2O2 (150 μmol/L) por 3 horas para induzir o modelo de dano por estresse oxidativo. Após confirmação do modelo, os grupos controle e modelo receberam 10% de soro vazio, os grupos TSPSP receberam soro com as concentrações correspondentes e o grupo inibidor recebeu 30 μmol/L ML385 junto com soro TSPSP 10%. As células foram cultivadas por 24 h e amostras coletadas para análises posteriores. Foram avaliadas a atividade proliferativa celular (CCK-8), migração celular (ensaio de arranhadura), níveis de MDA, Fe2+, GSH (ELISA), ROS intracelular (DCF-DA), expressão de proteína e mRNA de KEAP1, Nrf2, FoxO3 (imunofluorescência, PCR em tempo real) e níveis proteicos de KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD (western blot). A análise GEO mostrou que os genes KEAP1, Nrf2 e FoxO3 estão associados à doença; identificaram-se 9 vias significativas relacionadas ao estresse oxidativo (P<0,05), incluindo 3 que envolvem Nrf2 e FoxO3. A farmacologia de redes identificou 246 alvos ativos do TSPSP e 2804 alvos relacionados a SA, com uma interseção de 154 alvos potenciais. A análise topológica indicou alta relevância para KEAP1 e Nrf2; a análise de enriquecimento GO e KEGG indicou envolvimento na resposta ao estresse oxidativo, vias FoxO e MAPK. Experimentalmente, o modelo mostrou redução significativa na viabilidade celular (P<0,01), viabilidade aumentada com TSPSP (P<0,01); ML385 reduziu a viabilidade para cerca de 70% (P<0,01). MDA, Fe2+, ROS aumentaram e GSH e migração diminuíram no modelo (P<0,01). Níveis proteicos e de mRNA de KEAP1 e FoxO3 aumentaram, Nrf2, GPX4 e SOD diminuíram (P<0,01). TSPSP reverteu essas alterações (P<0,01); ML385 reverteu os efeitos do TSPSP (P<0,05). Conclusão: TSPSP pode inibir danos por estresse oxidativo induzidos por H2O2 nas células trofoblásticas através da ativação da via de sinalização KEAP1/Nrf2/FoxO3.

Pó Taishan Panshi; aborto espontâneo; proteína Kelch-like ECH-associated 1/fator nuclear E2 relacionado/proteína FoxO3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3) via de sinalização; células trofoblásticas humanas; danos por estresse oxidativo