Estudo integrado "Caracterização microscópica - Análise química - Avaliação farmacológica" para explorar o princípio do aumento do efeito da Atractylodes cozida com terra na promoção da saúde do baço e na parada da diarreia
O objetivo é analisar as mudanças na microestrutura, composição química e efeito anti-ulcerativo na colite ulcerativa (UC) antes e depois do cozimento com terra da Atractylodes macrocephala (白术), para esclarecer o princípio do aumento do efeito "fortalecer o baço e parar a diarreia" pelo preparo. O método utilizou microscopia eletrônica de varredura com espectroscopia de dispersão de energia (SEM-EDS) para analisar a microestrutura e a composição elementar antes e depois do cozimento com terra, explorando as diferenças e suas causas; a cromatografia líquida ultrarrápida acoplada à espectrometria de massas com quadrupolo e tempo de voo (UPLC-Q-TOF-MS) combinada com a plataforma de análise de produtos naturais UNIFI 1.9.2 foi usada para analisar e identificar os componentes químicos da Atractylodes crua e cozida. A análise estatística multivariada, incluindo análise de componentes principais (PCA) e análise discriminante por mínimos quadrados parciais ortogonais (OPLS-DA), foi utilizada para investigar as diferenças e origens dos componentes químicos; um modelo murino de UC foi preparado com sulfato de dextrano de sódio (DSS), o índice de atividade da doença (DAI) foi usado para avaliar a gravidade da inflamação intestinal, as alterações patológicas do cólon foram observadas através da coloração hematoxilina-eosina (HE), os níveis de fatores inflamatórios foram medidos por ensaio imunoabsorvente ligado a enzimas (ELISA), a expressão de genes e proteínas chave da barreira da mucosa intestinal foi analisada por PCR em tempo real e Western blot, a diversidade da microbiota intestinal foi avaliada pela técnica 16S rRNA, e os níveis de ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs) nas fezes foram investigados por cromatografia gasosa em espaço de cabeça acoplada à espectrometria de massas (HS-GC-MS). Baseado nesses resultados, foi explorado o impacto do cozimento com terra nas barreiras biológicas, químicas, mecânicas e imunes dos animais modelo, assim como as diferenças e mecanismos de ação na regulação da barreira da mucosa intestinal em camundongos com UC. Resultados: a observação SEM revelou uma grande quantidade de partículas de terra no centro focal da superfície da Atractylodes cozida com terra, acompanhada de inchaços em forma de bolha, além de várias fendas e rugas na superfície da terra auxiliar. A análise EDS indicou aumento significativo nos níveis de Si, Al, Mg, Ca na Atractylodes cozida com terra em comparação com a crua, sendo esses elementos os principais componentes da terra. Foram identificados 132 compostos químicos no modo de íon positivo, principalmente terpenos, polifenóis e aminoácidos; e 40 compostos no modo de íon negativo, principalmente polifenóis e glicosídeos. Os sesquiterpenos e os ácidos polifenólicos apresentaram mudanças marcantes antes e depois do preparo. A Atractylodes cozida com terra reduziu a pontuação DAI em camundongos com UC, aliviou o encurtamento do cólon, reduziu os níveis séricos de fatores pró-inflamatórios IL-17, IL-18, IFN-γ, TNF-α, aumentou os níveis de fatores anti-inflamatórios sIgA, IL-10, IL-4, TNF-β, aumentou a expressão de genes e proteínas chave da barreira intestinal (ZO-1, Occludin, Claudin-1, MUC2), melhorou a diversidade da microbiota intestinal e os níveis de SCFAs (P<0.05, P<0.01). A Atractylodes crua e levemente cozida também demonstraram efeitos similares, porém mais fracos, e a terra auxiliar também mostrou algum efeito. Conclusão: o cozimento com terra pode aumentar a ação protetora da Atractylodes na barreira da mucosa intestinal em camundongos com UC, provavelmente devido à dupla ação das mudanças internas da microestrutura e composição química causadas pelo aquecimento e à adsorção pela terra auxiliar.
关键词
Atractylodes macrocephala;Método de cozimento com terra;Caracterização microscópica;Microscopia eletrônica de varredura - espectroscopia de dispersão de energia (SEM-EDS);Análise química;UPLC-Q-TOF-MS;Barreira da mucosa intestinal;Princípio do preparo