O objetivo é explorar o mecanismo pelo qual a decocção Zhuluantang inibe a autofagia excessiva das células granulosas do ovário humano (KGN) e melhora a insuficiência ovariana prematura (POI) com base na via de sinalização fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K)/proteína quinase B (Akt)/proteína alvo de rapamicina (mTOR). Métodos: A concentração ótima de ciclofosfamida para estabelecer o modelo celular POI em células KGN foi determinada pelo teste CCK-8. Com base nisso, o efeito do soro contendo medicamento de Zhuluantang na viabilidade do modelo celular KGN foi avaliado. Após determinar a melhor concentração de administração, as células KGN foram divididas em grupos: grupo controle (20% soro vazio), grupo modelo (20% soro vazio + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida), grupo soro medicamentoso com Zhuluantang (20% soro medicamentoso com Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida), grupo inibidor de autofagia (20% soro vazio + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida + 20 μmol·L^-1 fosfato de hidroxicloroquina), grupo inibidor de autofagia + soro medicamentoso com Zhuluantang (20% soro medicamentoso com Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida + 20 μmol·L^-1 fosfato de hidroxicloroquina) e grupo Bujiale (20% soro medicamentoso com Bujiale + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida). Após 48 h de cultivo, a taxa de apoptose das células KGN foi detectada por citometria de fluxo. A expressão das proteínas PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR e mTOR em cada grupo foi detectada por Western blot, assim como proteínas relacionadas à autofagia como Beclin1, ATG5 e LC3. O grau de autofagia foi avaliado por coloração MDC. Resultados: O tratamento das células KGN com 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida por 48 h permitiu construir um modelo celular POI, inibindo significativamente a proliferação celular de KGN em uma inibição dependente da concentração. Soros medicamentados com Zhuluantang nas concentrações de 20% e 30% promoveram a proliferação celular e aliviaram o efeito inibitório da ciclofosfamida; ambas as concentrações apresentaram eficácia semelhante. Em comparação com o grupo controle, a taxa de apoptose do grupo modelo aumentou significativamente (P<0,01), os níveis de expressão das proteínas PI3K, p-Akt e p-mTOR diminuíram significativamente (P<0,01), enquanto as proteínas relacionadas à autofagia Beclin1, LC3 e ATG5 aumentaram significativamente (P<0,01). Não foram observadas alterações significativas nos níveis das proteínas Akt e mTOR. A intensidade da fluorescência MDC aumentou significativamente (P<0,01). Em comparação com o grupo modelo, as taxas de apoptose dos grupos controle, modelo, soro medicamentoso com decocção, inibidor de autofagia, inibidor de autofagia + soro medicamentoso e Bujiale foram significativamente reduzidas (P<0,05, P<0,01), sendo a melhor eficácia observada no grupo inibidor de autofagia + soro medicamentoso. Os níveis de expressão das proteínas PI3K, p-Akt e p-mTOR aumentaram significativamente (P<0,05, P<0,01), especialmente no grupo inibidor de autofagia + soro medicamentoso (P<0,01). Os níveis das proteínas Beclin1 e ATG5 diminuíram significativamente (P<0,05, P<0,01). Os grupos soro medicamentoso com decocção e Bujiale mostraram uma queda significativa na expressão da proteína LC3 (P<0,05, P<0,01). Os grupos inibidor de autofagia e inibidor de autofagia + soro medicamentoso apresentaram redução na expressão de LC3, porém sem significância estatística. Conclusão: A decocção Zhuluantang pode inibir a autofagia excessiva por meio da ativação da via PI3K/Akt/mTOR, revertendo os danos causados pela ciclofosfamida ao modelo celular KGN e melhorando a POI.

Decocção Zhuluantang; insuficiência ovariana prematura; ciclofosfamida; autofagia