Estudo do efeito e mecanismo da Shugan Bushen Yulin Tang na melhora da motilidade espermática em ratos com estagnação do Qi hepático baseado na β-oxidação de ácidos graxos
O objetivo foi estudar o efeito e o mecanismo da fórmula Shugan Bushen Yulin Tang na melhora da motilidade dos espermatozoides em ratos com estagnação do Qi hepático, baseado na sintase de acil-CoA de cadeia longa 4 (ACSL4) que medeia a β-oxidação mitocondrial dos ácidos graxos. Métodos: 40 ratos machos SD foram distribuídos aleatoriamente em grupo normal, grupo modelo, grupos de alta e baixa dose de Shugan Bushen Yulin Tang (26, 13 g·kg-1) e grupo fluoxetina (1,8 mg·kg-1), com administração via gavagem. Exceto pelo grupo normal, os outros grupos foram submetidos ao método combinado de restrição crônica e estímulo da cauda para criar o modelo de estagnação do Qi hepático. Após a modelagem, cada grupo recebeu os respectivos tratamentos por 21 dias consecutivos. O método ELISA mediu corticosterona (CORT), testosterona (T) e estradiol (E2) no soro das ratas. A balança analítica eletrônica foi usada para medir a massa corporal, massa testicular e epididimária; índices testicular e epididimário foram calculados. O sistema automático de análise de esperma avaliou a concentração e motilidade espermática. A coloração HE (hematoxilina-eosina) observou mudanças histológicas do tecido testicular para avaliação de alterações morfológicas patológicas. Citometria de fluxo com sondas fluorescentes, incluindo o kit de detecção de potencial de membrana mitocondrial (JC-1), analisou o nível do potencial da membrana mitocondrial dos espermatozoides. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) detectou alterações no metabolismo lipídico dos espermatozoides e selecionou metabólitos diferenciais. ELISA avaliou a atividade de acetil-CoA (Acetyl-CoA), acil-CoA (Acyl-CoA) e os níveis de trifosfato de adenosina (ATP). A imunofluorescência (IF) detectou a expressão de ACSL4 no tecido testicular. O Western blot mediu a expressão das proteínas ACSL4 e carnitina palmitoiltransferase 1 (CPT1) no tecido testicular. Comparado ao grupo normal, a LC-MS selecionou 24 metabólitos lipídicos diferenciais, dos quais 11 foram regulados positivamente após intervenção com Shugan Bushen Yulin Tang, e a análise de enriquecimento de vias envolveu principalmente biossíntese e metabolismo de ácidos graxos. Comparado ao grupo normal, o grupo modelo apresentou redução significativa na densidade e motilidade espermática, índice epididimário e potencial de membrana mitocondrial, com atividade de Acetyl-CoA, Acyl-CoA e conteúdo de ATP significativamente reduzidos, além da expressão proteica de ACSL4 e CPT1 também significativamente diminuída (P<0.01). Comparado ao grupo modelo, os grupos de diferentes doses de Shugan Bushen Yulin Tang apresentaram aumentos significativos em densidade e motilidade espermática, índice epididimário, potencial de membrana mitocondrial, atividade de Acetyl-CoA, Acyl-CoA e conteúdo de ATP (P<0.01), bem como na expressão proteica de ACSL4 e CPT1 (P<0.05, P<0.01). Conclusão: Shugan Bushen Yulin Tang pode melhorar a motilidade espermática em ratos com estagnação do Qi hepático ativando a β-oxidação mitocondrial mediada por ACSL4 e aumentando a geração de ATP.
关键词
Shugan Bushen Yulin Tang;emoções;estagnação do Qi hepático;motilidade espermática;mitocôndrias;β-oxidação de ácidos graxos