Китайский фито-комплекс YTK с помощью регулирования метилирования аденина N6 (m6A) способствует саморегуляции клеток почек в лечении почечной болезни при сахарном диабете
Целью исследования является изучение того, как китайский фито-комплекс YTK повышает самозаживление почек при сахарном диабете (DKD) путем регулирования метилирования аденина N6 (m6A). Методы исследования включали выбор 45 мышей db/db в возрасте 16 недель (модель DKD) из класса SPF в качестве экспериментальной группы, а также 9 мышей db/m в качестве контрольной группы. Мышей экспериментальной группы разделили на группы модели, низкой, средней и высокой дозы YTK (14,463 и 28,925 и 57,850 г/кг/день), а также группу, получавшую лекарственное средство Filanil и инъекцию YTK и Фелизон в дозе 2,6 мг/кг/день. Методы ELISA использовались для оценки уровней неутрофильного гранулоцитарного ассоциированного липидно-связывающего белка (NGAL) в плазме и моче. Биохимический анализ показал, что уровни мочевой кислоты (UREA), креатинина-сыворотки (Cre-s), мочевой кислоты (UA) и отношение белка креатинина в моче (UACR) снизились. По результатам HE-окраски были обнаружены изменения морфологии почечных тканей у мышей. При использовании метода TUNEL были обнаружены случаи апоптоза клеток почечных тканей. Методом иммуноцитохимической окраски (IHC) была проведена оценка средней плотности метилирования белков METTL3, METTL14, LAMP2A, LC3 Ⅱ и NLRP3 в почечных тканях мышей. Методами квантитативной полимеразной цепной реакции в реальном времени (Real-time PCR) и автоматизированной системы анализа выражения белков (Wes) были измерены уровни экспрессии белков METTL3, METTL14, LAMP2A, LC3 Ⅱ, p62, YTHN6-метилглунозсвязывающего рибонуклеопротеин3 (YTHDF3), теплового шока 70 кДа (HSP70) и теплового шока 90 α (HSP90AA1) в почечных тканях мышей. Результаты исследования показали, что после 8 недель лекарственного воздействия уровни NGAL, UREA, Cre-s и UA в крови мышей модельной группы значительно увеличились по сравнению с контролем (P<0.01); уровни UACR и NGAL в моче значительно возросли (P<0.01); наблюдались выраженные изменения в морфологии почечных тканей мышей, включая явные очаги воспаления и инфильтрацию воспалительных клеток; количество клеток с положительным апоптозом значительно увеличилось (P<0.01); уровни экспрессии METTL3, METTL14, NLRP3 возросли, а уровни LAMP2A и LC3 Ⅱ снизились (P<0.01); уровни экспрессии мРНК и белка METTL3, METTL14, p62, HSP70 значительно увеличились, а уровни YTHDF3, LAMP2A, LC3 Ⅱ, HSP90AA1 значительно уменьшились (P<0.01). Выводы: Китайский фито-комплекс YTK спо sоставлял показания для использования в качестве средства для саморегуляции апоптоза клеток почек при сахарном диабете.
关键词
YTK;метилирование N6-аденина (m6A);комплексная молекулярная саморегуляция;сахарный диабет почечной болезни (DKD)