Exploring Regulatory Effect of Kaixuan Jiedu Core Prescription on SPHK2/S1P/MCP-1 Pathway in Psoriasis-like Mouse Model Based on Sphingolipid Metabolism
Целью данного исследования является изучение воздействия ядра очистки и охлаждения декоцирования на хронический сыпной дерматит у мышей, порождаемый микайнами. Методика включала 37 случайно отобранных мужских мышей C57BL/6J, разделенных на группу контроля (n = 11), модельную группу (n = 11), группу метотрексата (n = 5), группу низкой дозы ядра очистки и охлаждения (n = 5) и группу высокой дозы ядра очистки и охлаждения (n = 5). Все группы, за исключением контрольной, подвергались наложению лосьона с микайнами 5% на спин в целях индуцирования хронического сыпного дерматита, группам ядра очистки и охлаждения и метотрексата вносили по 0,2 мл суспензии комплексного отвара китайской травы (высокая доза: 30,42 г/кг, низкая доза: 15,21 г/кг) и смешанную суспензию метотрексата в объеме 0,2 мл (1 мг/кг) через зонд, а другим группам вносили одинаковые объемы физиологического раствора через зонд. После пяти дней непрерывного вмешательства на спине отбирали образцы кожи. В первую очередь были выбраны контрольные и модельные группы мышей для анализа тандемной масс-спектрометрии для количественного протеомного анализа (контрольная группа - модельная группа 3:3), а также для анализа метаболомики жиров (контрольная группа - модельная группа 11:11). Затем было использовано фармакологическое базирование и метод виртуального докинга для оценки взаимодействия активных компонентов ядра очистки и охлаждения с целевыми белками. В заключение, была проведена экспериментальная проверка специфичного контроля ядра очистки и охлаждения над метаболизмом жиров, применением иммуноцитохимического анализа для измерения уровней 1-фосфата спхингозина (S1P) в коже мыши, а также анализ методом иммунофик-некроблотного белка (Western blot) для оценки экспрессии спхингозинкиназы 2 (SPHK2) и моноцитарного агента хемотаксина-1 (MCP-1) в коже сыпного дерматита. Результаты количественного протеомного анализа (TMT) и метаболомики жиров указывают на то, что в коже модельных мышей хронического сыпного дерматита проявляется активность метаболизма жиров, а ключевые белки метаболизма жиров (P<0.05), и 8 видов метаболитов метаболизма жиров (включая спинголипиды, спингоэтины, спингофосфолипиды, гликосфинголипиды и т. Д.) проявляют явные изменения. Результаты молекулярного докинга указывают на то, что активные компоненты ядра очистки и охлаждения (кумарин, эллисиант, исатин) обладают молекулярной аффинностью с целевыми белками метаболизма жиров менее -8 ккал·моль-1. Более того, эспериментальное подтверждение показало, что по сравнению с контрольной группой, уровни экспрессии SPHK2, S1P и MCP-1, выраженные в коже сыпного дерматита модели, значительно повышены (P<0.05); по сравнению с модельной группой, инкубация ядра очистки и охлаждения значительно снизила уровни экспрессии SPHK2, S1P и MCP-1 (P<0.05). Выводы: в коже модельных мышей хронического сыпного дерматита, индуцированных микайнами, метаболический дисбаланс жиров, а воздействие ядра очистки и охлаждения может улучшить кожные раны у мышей с сыпным дерматитом путем решения проблем метаболизма жиров, причем потенциальный механизм воздействия может быть связан с маршрутом SPHK2/S1P/MCP-1.