Молекулярный механизм ингибирующего действия Астрагала-Белой змееголовника на ось LINC01134-CTCF-p21 при пролиферации аденокарциномы легких

SUN Haipeng ,  

ZHUANG He ,  

LIU Xue ,  

LIU Siyuan ,  

摘要

Цель - исследовать влияние некодирующей РНК LINC01134, конкурирующей за связывание с фактором связывания CCCTC (CTCF), на ингибитор циклин-зависимой киназы (p21) и её воздействие на пролиферацию клеток A549, чтобы изучить возможный механизм регуляции оси LINC01134-CTCF-p21 растением Астрагал-Белая змееголовник в подавлении пролиферации A549. Методика: исследование взаимодействия LINC01134 и CTCF методом иммунопрецитации РНК-связывающих белков (RIP); исследование влияния сверхэкспрессии LINC01134 на взаимодействие CTCF с p21 методом хроматинового иммунопрецитирования (ChIP); получение стабильных трансгенных клеток A549 oe-NC и oe-LINC01134 с помощью лентивирусной трансфекции, в каждую группу добавляли 10% сыворотки крови с содержанием препарата Астрагал-Белая змееголовник. Определяли влияние препарата на экспрессию LINC01134, CTCF и p21 в клетках A549 при помощи количественной ПЦР в реальном времени (Real-time PCR) и метода вестерн-блот (Western blot); оценивали пролиферацию и жизнеспособность клеток (CCK-8), формирование колоний; определяли влияние препарата через LINC01134 на цикл клеток с помощью проточной цитометрии; исследовали влияние на циклин-белки методом Western blot. Результаты: по сравнению с иммуноглобулином G (IgG) в группе oe-CTCF значительно увеличилось накопление LINC01134 (P<0,01); по сравнению с oe-Vector в группе oe-LINC01134 значительно снизился уровень CTCF-связанного p21 (P<0,01); по сравнению с группой 10% пустой + oe-LINC01134, группа 10% Астрагал-Белая змееголовник + oe-LINC01134 обратимо изменила экспрессию LINC01134 и p21 (P<0,05), но без значимого влияния на CTCF; та же группа обратимо изменила жизнеспособность клеток через 72 часа (P<0,05), злокачественную пролиферацию (P<0,05), соотношение клеток в фазах G0/G1 и S (P<0,01); а также экспрессию циклина D1, CDK4, циклина E, CDK2, фосфорилированного белка опухоли сетчатки (p-Rb) и транскрипционного фактора E2F3 (P<0,01). Заключение: препараты Астрагала-Белой змееголовника регулируют ось LINC01134-CTCF-p21, блокируя переход клеточного цикла A549 из фазы G1 в S, ускоряя старение клеток и подавляя их злокачественную пролиферацию.

关键词

Астрагал-Белый змееголовник; сигнальная ось LINC01134-CTCF-p21; цикл; старение; пролиферация

阅读全文