Цель исследования заключается в определении целевого белка, напрямую связанного с новокислородной кислотой (NA), и его молекулярных механизмах улучшения пролиферации клеток эпидермиса в псориазе и воспалительной реакции. В качестве модели клеточной пролиферации в эпидермисе при псориазе и воспалительной реакции использовались клетки HaCaT, индуцированные M5. Сначала использовали тесты на жизнеспособность клеток CCK-8 для оценки активности синтетического зонда новокислородной кислоты (NA-P) и исходной NA на клеточной активности. Оценили эффективность NA и NA-P в безопасном диапазоне концентраций, использовали тест CCK-8 для определения влияния концентраций NA и зонда на пролиферацию клеток HaCaT, индуцированных M5, и использовали тест ELISA для определения влияния концентраций 20, 40, 80 мкмол•л^-1 NA и 80 мкмол•л^-1 NA-P на экспрессию воспалительных факторов, таких как TNF-α, интерлейкины (IL)-1β, IL-23, IL-17A, использовали Real-time PCR для определения влияния NA на экспрессию мРНК кератин 16 (K16), кальциевого связывающего белка S100A9 (S100A9), кальциевого связывающего белка S100A7 (S100A7), IL-6, IL-17A и хемотаксического фактора CXCL1 в клетках HaCaT. Использовали NA-P для мечение живых клеток в пробирках и соревновательный экспериментирование, а также использовали метод Pull-down/LC-MS/MS для ловли и анализа целевых белков. Использовали Pull down-WB, WB/CETSA и молекулярное докирование для верификации целей. Наконец, использовали Real-time PCR для определения влияния концентраций 20, 40, 80 μmol•л^-1 NA и 80 μmol•л^-1 NA-P на экспрессию мРНК IL-1β, NLRP3 и ASC, Caspase-1 в клетках HaCaT, и использовали WB для определения влияния экспрессии белков, таких как p-p65 и p65, p-IκBα и IκBα, HSP90. В результате было выявлено, что в безопасном диапазоне концентраций 200 μmol•л^-1 M5 увеличивала пролиферацию клеток HaCaT, а также увеличение экспрессии воспалительных факторов, таких как TNF-α, IL-1β, IL-23, IL-17A, увеличение экспрессии K16, S100A9, S100A7, IL-6, IL-17A, CXCL1. По сравнению с контрольной группой, NA и NA-P тормозили пролиферацию клеток в группах концентраций NA-L, NA-M, NA-H и NA-P-H (группы NA-L, NA-M, NA-H и NA-P-H), и уменьшали экспрессию воспалительных факторов, таких как TNF-α, IL-1β, IL-23, IL-17A, уменьшали экспрессию K16, S100A9, S100A7, IL-6, IL-17A, CXCL1 (P <0,05). Конкурентные исследования с NA-P с концентрациями 200 μmol•л^-1 NA и 100 μmol•л^-1 NA-P показали высокую вероятность HSP90. По сравнению с контрольной группой, M5 увеличивала экспрессию мРНК для NLRP3, IL-1β, ASC, Caspase-1, коэффициент p-p65/p65, p-IκBα/IκBα, и увеличивала экспрессию HSP90 (P <0,05); по сравнению с M5, в группах NA-L, NA-M, NA-H, NA-P-H уменьшалась экспрессия мРНК для NLRP3, IL-1β, ASC, Caspase-1 (P <0,05); в группах NA-M, NA-H уменьшался коэффициент p-p65/p65, p-IκBα/IκBα (P <0,05), а изменения HSP90 были незначительными. WB поставил под сомнение NA напрямую нацеливает HSP90, и связывание NA с HSP90 может повысить его теплостойкость, и связывание NA с членами семейства HSP90AA1 и HSP90B1 и HSP90AB1 выполняется стабильно. Вывод: NA может уменьшить пролиферацию клеток эпидермиса в псориазе и воспалительную реакцию, и, возможно, это происходит через регулирование сигнального пути NF-κB/NLRP3 при помощи HSP90.

Новокислородная кислота; тепловой белок 90 (HSP90); NF-κB/NLRP3 сигнальный путь; пролиферация клеток эпидермиса в псориазе; воспаление