lncRNA MANCR регулирует ось miR-150-5p / GPNMB на пролиферацию, миграцию и эпителиально-мезенхимальную трансформацию клеток желудочного рака

LI Chao ,  

WANG Shihui ,  

LIN Jie ,  

WANG Fanke ,  

ZHANG Rui ,  

摘要

Целью данного исследования является изучение влияния антисмысленный длинный некодирующие РНК (lncRNA MANCR), связанный с делением, на регуляцию оси микроРНК-50-5p (miR-150-5p) / нерезидентная меланиновая белок B (GPNMB) на пролиферацию, миграцию и эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) клеток желудочного рака (GC). Методы: методом реального времени полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (RT-PCR) изучали экспрессию лнкРНК MANCR, микроРНК-150-5р, мРНК GPNMB в тканях GC и раковых паренхимах, которые были удалены во время операций в Первой больнице медицинского университета Хэбэя с июня 2022 по сентябрь 2023 года. В клетках желудочно-секретирующего эпителия человека GES-1 и клетках желудочного рака человека BGC-823, выращенных in vitro, изучали экспрессию лнкРНК MANCR. Клетки BGC-823 случайным образом подразделяли на группы: контрольная группа (нормальное культивирование), группа sh-NC (трансфекция sh-NC), группа sh-MANCR (трансфекция sh-MANCR), группа sh-MANCR + anti-NC (совместная трансфекция sh-MANCR и anti-NC) и группа sh-MANCR + anti-miR-150-5p (совместная трансфекция sh-MANCR и anti-miR-150-5p). Анализировали экспрессию лнкРНК MANCR и микроРНК-150-5р и мРНК GPNMB в клетках BGC-823 разных групп. Использовали метку 5-эдилированной дезоксиуридина (EdU) для определения пролиферации клеток BGC-823. Методом Transwell оценивали инвазию и миграцию клеток. Использовали метод иммуноблоттинга с антителами моноклональной иммунореактивности (Western blot) для определения экспрессии связанных с EMT белков E-кадгерина (E-cadherin), N-кадгерина (N-cadherin) и виментина (Vimentin) и белка GPNMB. Методом двухфотонной флуоресцентной репортерной генной экспрессии проанализировали взаимодействие лнкРНК MANCR с микроРНК-150-5p и микроРНК-150-5p с GPNMB. Результаты: по сравнению с раковыми паренхимами tiss уровень экспрессии лнкРНК и GPNMB значительно возрастал, а уровень экспрессии miR-150-5p значительно снижался (P<0.05). По сравнению клетками секреторной эпителиалии желудка уровень экспрессии лнкРНК MANCR в клетках BGC-823 значительно увеличивался (P<0.05). По сравнению с контрольной группой и группой sh-NC, процент положительных клеток EdU, количество мигрировавших и вторгшихся клеток, уровень экспрессии лнкРНК MANCR и GPNMB mRNA и белка, белка N-кадгерина и виментина значительно снижались, в то время как уровень экспрессии miR-150-5p и белка Е-кадгерина значительно повышались (P<0.05); по сравнению с группой sh-MANCR и группой sh-MANCR + anti-NC уровень экспрессии miR-150-5p и белка Е-кадгерина значительно снижались, а процент положительных клеток EdU, количество мигрировавших и вторгшихся клеток, GPNMB mRNA и белка N-кадгерина и виментина значительно возрастали (P<0.05). Вывод: лнкРНК MANCR может негативно регулировать miR-150-5p, а miR-150-5p может негативно регулировать GPNMB. Молчание лнкРНК MANCR может подавлять миграцию, пролиферацию клеток GC и ЕМТ путем регуляции оси miR-150-5p / GPNMB.

关键词

антисмысленный длинный некодирующие РНК; микроРНК-50-5p; нерезидентная меланиновая белок B; желудочный рак; пролиферация; миграция; эпителиально-мезенхимальная трансформация

阅读全文