Comparison of Protein and Polypeptide Components and Antithrombotic Activity In Vitro of Three Preparations Containing Hirudo

ZHONG Wanling ,  

MA Yunnan ,  

YE Jinhong ,  

FAN Xiaoyu ,  

SHEN Huijuan ,  

YUAN Rui ,  

ZHANG Yaxuan ,  

LIU Zhuyuan ,  

DU Shouying ,  

LI Pengyue ,  

摘要

Целью сравнения является сравнение содержания белка и пептида в препаратах из одного ингредиента пиявки, таких как таблетки для капель в головной мозг, капсулы для улучшения кровотока и капсулы для крови, а также оценка их витроантитромботической, антиагрегационной и фибринолитической активности, и проверка влияния температуры, pH и пищеварительных ферментов на антитромботическую активность трех препаратов. Методы: использование метаборатной кислоты и кумассного синего для определения растворимого белка и содержания пептида в трех препаратах из одного ингредиента пиявки; методы гелевой электрофореза в сочетании с гель-фракционированием для определения относительного молекулярного веса трех препаратов из одного ингредиента пиявки; использование фибриногена-тромбина времени для оценки антитромбиновой активности трех препаратов из одного ингредиента пиявки, дополнительно оценка антитромбиновой активности по степени продления активации части коагуляции, протромбинового времени и времени свертывания крови; использование турбидиметрии для оценки антиагрегационной активности трех препаратов из одного ингредиента пиявки; использование фибриноген-платиновой плиты для оценки фибринолитической активности трех препаратов из одного ингредиента пиявки. Результаты: Сравнение содержания белка и пептида под низким дозированием подтвердило, что капсулы для крови имеют самое большое содержание белка и пептида, предшествуя капсулам для улучшения кровотока, а затем каплям в головной мозг. Капсулы для улучшения кровотока и капсулы для крови имеют по 11 полосам на электрофореграмме в диапазоне от 4,0 до 90 килода, и на полосе >25 килода у капсул для крови полоса более четкая, чем у капсул для улучшения кровотока, и обе имеют по одной особенной полосе на 14 килода; капсулы для улучшения кровотока имеют по одной особенной полосе на 9,0 килода, капсулы для крови на 48,0 килода; капли для головного мозга имеют только 2 видимые полосы на 6,5 и 8,5 килода, их главными содержащимися веществами являются пептиды меньше 2 килода, и большинство из них - олигопептиды. Антитромбиновая активность трех препаратов уровня есть определенный зависимый от дозы, сравнение антитромбиновой активности под низким дозированием показало, что капли для головного мозга по антитромбиновой активности превзошли капсулы для улучшения кровотока, а затем капсулы для крови. Влияние трех препаратов на время свертывания крови носит определенный зависимый от дозы характер; при одинаковой концентрации капли для головного мозга и капсулы для крови длительность активации части коагуляции > длительность активации тромбина > длительность протромбина, у капсул для крови длительность активации тромбина > длительность активации части коагуляции > длительность протромбина, а длительность активации части коагуляции у капсул для крови > длительность активации части коагуляции капли для головного мозга. По длительности активации части коагуляции под низким дозированием порядок следования составляет капсулы для крови > капли для улучшения кровотока ≈ капли для головного мозга, по длительности протромбина составляет капли для головного мозга ≈ капсулы для крови > капли для улучшения кровотока, по длительности активации тромбина составляет капсулы для крови > капли для улучшения кровотока > капли для головного мозга. Влияние трех препаратов на аденозиндифосфат и арахидоновую кислоту из имеет определенный зависимый от дозы характер, воздействие на аденозиндифосфат из по каплям для головного мозга проявляется сильнее, чем по капсулам для крови (P <0,01), но капсулы для улучшения кровотока проявляют свойства стимулирования агрегации тромбоцитов, все три препарата не растворяют фибринолитики. Результаты фактора влияния антитромботической активности показывают, что антитромботическая активность капель для головного мозга воздействием нагревания уменьшается наименьшим образом, капсулы для улучшения кровотока и капсулы для крови в пределах 80 ℃ в течение 5 минут значительно уменьшает активность, в течение 2 часов продолжительно уменьшает активность. По сравнению с чистой водой, антитромботическая активность трех препаратов в сильно кислом (pH 1~3) может увеличиться в 1~3 раза; в пищеварительном ферменте желудка, антитромботическая активность капель для головного мозга может увеличиться в 1~3 раза, причем активность капсул для улучшения кровотока и капсул для крови значительно уменьшается, и их активность уменьшается до приблизительно 60%, 20% соответственно, но в пищеварительном ферменте поджелудочной железы, антитромботическая активность трех препаратов заметно уменьшается, и может быть уменьшена до приблизительно 41%, 41%, 35% соответственно. Вывод: Свежая пиявка сушеный порошок, порошок пиявки и препарат, полученный путем обратного извлечения пиявки образуются пропорционально снижению содержания белка и пептида, их антитромботическая активность постепенно уменьшается, но с различными активация пути, после обратного извлечения пиявки их антиагрегационная активность заметно увеличивается; их теплостойкость и устойчивость к желудочно-кишечному тракту постепенно увеличиваются; первые две из них подходят для производства энтеросолюбильных препаратов, а третий подходит для обычного приема. Полученные результаты могут служить основанием для разумной методики приготовления различных препаратов из пиявки, оценки биологической активности и механизмов действия в организме.

关键词

Hirudo;anticoagulant activity;antiplatelet aggregation activity;bioactive peptides;Naoxuekang dropping pills;Huoxue Tongmai capsules;Maixuekang capsules

阅读全文