Механизм действия Bu Zhong Yi Qi Tang в улучшении аномалий развития мозга потомства у беременных женщин с субклиническим гипотиреозом

MA Yan ,  

LYU Xiaojiao ,  

HUANG Yangling ,  

MA Xiande ,  

GAO Tianshu ,  

CONG Peiwei ,  

CHEN Wei ,  

摘要

Целью этого исследования было оценить фармакологические эффекты лечения субклинического гипотиреоза (SCH) у беременных крыс лекарственной терапией Bu Zhong Yi Qi Tang на развитие мозга потомства и выяснить его потенциальные механизмы действия. Крысам-самкам SPF уровня было проведено левое резание щитовидной железы с последующим подкожным введением левотироксина (L-T4) для создания модели SCH. Всего было 48 крыс, которые были разделены на группы: контрольная группа (8 шт.), модельная группа (40 шт.), группы с низкой, средней и высокой дозой Bu Zhong Yi Qi Tang (5,58, 11,16, 22,32 г∙кг-1) и группа Eutirox (4,5×10-6 г∙кг-¹), по 8 крыс в каждой группе, которые поместили крыс-самцов для размножения. Препараты были предоставлены за две недели до беременности и в течение всей беременности. Были использованы методы окраски гематоксилином-эозином (HE) и Гольджи-Кокса, чтобы изучить патологические изменения в гиппокампе у молодняка крыс различных групп. Метод Western blot был использован для изучения влияния Bu Zhong Yi Qi Tang на экспрессию белков цитохрома C оксидазы I (COXⅠ) и цитохрома C оксидазы IV (COXⅣ) в гиппокампе у молодняка крыс, а также методом колориметрии было изучено влияние Bu Zhong Yi Qi Tang на содержание в гиппокампе у молодняка крыс трехфосфатного аденозина (ATP). Во внеклеточных экспериментах для построения модели окислительного повреждения клеток надпочечника крыс было использовано H₂O₂. Затем производилось вмешательство SGI-1027, содержащим Bu Zhong Yi Qi Tang сывороткой крови и сывороткой Eutirox. Был использован метод тестирования на жизнеспособность и активность клеток (CCK-8) для изучения пролиферации клеток в различных группах. Был использован иммунный флуоресцентный метод (IF) для изучения экспрессии тубулина бета-3 (TUBB3) в клетках PC12. Также был использован метод Western blot для изучения экспрессии белков тетинов (TETs) и ДНК-метилирования (DNMTs) в клетках PC12, а также методами DCFH-HA, ферментным методом, окрашиванием JC-1 было изучено влияние Bu Zhong Yi Qi Tang на уровень активного кислорода (ROS), содержание ATP и потенциал митохондрий в клетках PC12. В сравнении с группой по фальсифицированной операции, количество нейронов в гиппокампе, форма и плотное расположение тел, средняя длина дендритов, сложность и плотность шипов дендритов у молодняка уменьшились после моделирования. Также уровень экспрессии COXⅠ, COXⅣ и содержание трехфосфатного аденозина (ATP) в мозге уменьшились (P<0,05, P<0,01). После лечения Bu Zhong Yi Qi Tang и Eutirox количество нейронов в гиппокампе, плотное расположение тел, форма дендритов, сложность и плотность шипов дендритов у молодняка стали более упорядоченными, длина дендритов увеличилась, сложность и плотность шипов дендритов увеличилась, уровень экспрессии COXⅠ, COXⅣ и содержание ATP в мозге увеличились (P<0,05, P<0,01). Здесь у небольшой дозы Bu Zhong Yi Qi Tang эффективность лечения была выше всего. В результате проведенном внеорганическом эксперименте, Bu Zhong Yi Qi Tang существенно повысило жизнеспособность клеток (P<0,01), усилило способность нейронов к дифференцировке, уменьшило уровень экспрессии метилтрансфераз (DNMTs) (P<0,05), увеличило уровень экспрессии деметилаз (TETs) (P<0,05), уменьшило содержание ROS (P<0,01), восстановило содержание ATP и потенциал митохондрий (P<0,01). Выводы Bu Zhong Yi Qi Tang оказывает защитное воздействие на развитие мозга потомства беременных женщин с SCH. Аномалии метилирования мтДНК, приводящие к окислительному стрессу и нарушению митохондрий, являются главными механизмами его действия, а также DNMTs,TETs, возможно, являются ключевыми белками для реализации его действия.

关键词

субклинический гипотиреоз;развитие мозга потомства;Bu Zhong Yi Qi Tang;митохондриальный окислительный стресс;метилирование

阅读全文