Цель исследования - изучить, лечит ли укреплённый отвар цитруса и персика (JTCT) печёночный фиброз, подавляя капилляризацию печёночных синусоидов, и подтвердить, связана ли конкретная механизм с сигнализационным путём гомолога генов ноты (Notch) и эндотелиальной оксидной синтазой (eNOS). Метод: 50 мышей C57BL/6 случайным образом разделили на нормальную группу, модельную группу (5 мл·кг^-1·3 д^-1), и группы с низкой, средней и высокой дозами JTCT (JTCT-L, JTCT-M, JTCT-H) (16,6, 33,3, 66,6 г·кг^-1·д^-1). За исключением нормальной группы, все остальные мыши каждые 3 дня получали внутрибрюшинно 20% раствор CCl4 в масле оливы для индукции модели печёночного фиброза на протяжении 4 недель. При этом группы JTCT-L, JTCT-M и JTCT-H ежедневно получали внутрь назначенные дозы препарата в течение 4 недель (нормальная и модельная группы получали физиологический раствор равного объема). Изолировали первичные печёночные синусоидальные эндотелиальные клетки (LSECs) у крыс с использованием инкубации с коллагеназой, центрифугирования в градиенте Перколла и селективного удаления клеток Купфера, подтвердили фенотип клеток и использовали для эксперимента. После культивирования до стадии логарифмического роста применяли набор сиРНК для транзиентного транфекции с целью снижения экспрессии растворимой гуанилатциклазы (sGC). Далее проводили транфекцию с помощью сиРНК для снижения sGC с одновременным использованием активатора Notch Jagged-1. Для оценки ингибирующего действия JTCT на пролиферацию LSEC использовали набор CCK-8; экспрессию генов и белков путей Notch и eNOS измеряли с помощью количественной ПЦР в реальном времени и западного блоттинга; внутриклеточный уровень двовалентных ионов кальция (Ca^2+) отмечали с помощью флуоресцентного зонда Fluo-4/AM. Результаты: в сравнении с нормальной группой у мышей контрольной группы наблюдалась стеатоз, инфильтрация воспалительных клеток, дистрофия и некроз гепатоцитов, дезорганизация долек и пролиферация фиброзной ткани; уровни гидроксипролина (Hyp), аланинаминотрансферазы (ALT) и аспартатаминотрансферазы (AST) в сыворотке значительно повысились (P<0.01); экспрессия Notch1, Hes1, CD31, фактора Виллебранда (vWF) значительно увеличилась (P<0.01), в то время как уровни фосфорилированного (p)-eNOS/eNOS и sGC значительно снизились (P<0.01). В сравнении с модельной группой у групп с JTCT снижались уровни Hyp, ALT, AST (P<0.01); в тканях печени снижалась экспрессия Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0.05, P<0.01), при этом уровень p-eNOS/eNOS и sGC значительно повышался (P<0.05, P<0.01), наилучший эффект наблюдался у группы JTCT-H (P<0.01). В экспериментах in vitro по сравнению с группой LSEC-1day уровень экспрессии Notch1, Hes1, CD31, vWF в группе LSEC-5day значительно повысился (P<0.01), а уровни p-eNOS/eNOS и sGC снизились (P<0.01); внутриклеточная концентрация Ca^2+ значительно возросла (P<0.01). По сравнению с группой LSEC-5day группа JTCT показала значительное снижение экспрессии Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0.01) и повышение p-eNOS/eNOS (P<0.01); концентрация Ca^2+ в клетках значительно снизилась (P<0.01). Между группами Jagged1 и Jagged1+JTCT значимых различий в экспрессии Notch1, Hes1, eNOS, p-eNOS, CD31, vWF, sGC и уровней Ca^2+ не выявлено. По сравнению с группой LSEC-5day в группе sGC-KO уровень экспрессии CD31, vWF значительно повысился (P<0.01). Между группами sGC-KO и sGC-KO+JTCT различий не обнаружено. Заключение: JTCT лечит печёночный фиброз, подавляя активацию сигнального пути Notch и восстанавливая активность пути eNOS для ингибирования капилляризации LSECs.

Укреплённый отвар цитруса и персика; капилляризация печёночных синусоидов; сигнальный путь гена гомолога ноты (Notch); путь эндотелиальной оксидной синтазы (eNOS); печёночный фиброз