Целью данной работы было исследование механизма ингибирования метастазирования рака толстой кишки с помощью стимуляции секреции C-C-хемокинного лиганда 5 (CCL5) туморно-ассоциированными макрофагами M2-типа (TAMs) и обсуждение механизма ингибирования метастазов рака толстой кишки через препарат Sinlian Jiadu Fang. Методы: Трансформацию моноцитов лейкоза человека (THP-1) в М2-TAMs подтвердили морфологически и методом Real-time PCR и вырастили с клетками рака толстой кишки HCT116. Сформировались следующие группы: контрольная группа (клетки HCT116), группы с вмешательством CCL5 (20, 40, 60 μg·L^-1), совместное выращивание(клетки HCT116 и TAMs), группы Sinlian Jiadu Fang (низкая, средняя, высокая 1, 2, 3 g·L^-1), группа с антителами CCL5 (2 mg·L^-1). Методами ферментной иммуносвязи (ELISA) измерили содержание CCL5 в культивируемой среде клеток, применили эксперимент по клоногенному росту клеток с использованием CCK-8, эксперимент по поиску ран в культуре клеток и трансвелльной миграции, измерили экспрессию эпителиального кадгерина (E-кадгерина), нового кадгерина (N-кадгерина), виментина (Vimentin), β-катенина (β-catenin), стат3 (STAT3), длястат3 (p-STAT3). Результаты: Трансформация THP-1 в М2-TAMs увеличила экспрессию аргиназы-1 (Arginase-1), C-C-хемокинного лиганда 22 (CCL22) (P<0.01). В контрольной группе выращенных макрофагов M0 увеличилось содержание CCL5, но различия со статистической значимостью не отличались. Группы с М2-макрофагами и совместные культивирования HCT116 выдали статистически значимое увеличение содержания CCL5 (P<0.01). Сравнивая с совместным выращиванием, группы Sinlian Jiadu Fang уменьшили содержание CCL5 (P<0.05, P<0.01). Результаты CCK-8 показали, что в группах с вмешательством CCL5 (2.5~100 μg·L^-1) на протяжении 24, 48, 72 часов выживание клеток не отличалось со статистической значимостью. Эксперимент по клоногенному росту клеток не выявил статистически значимого различия между контрольной группой и группами с вмешательством CCL5 (20, 40, 60 μg·L^-1). Результаты эксперимента по поиску ран в культуре клеток и трансвелльной миграции показали, что группы с вмешательством CCL5 (20, 40, 60 μg·L^-1) и совместные культивирования имели статистически значимый рост способности миграции клеток (P<0.01). Сравнивая с совместным выращиванием, группы с антителами CCL5 и синлианда-контроля уменьшили способности миграции клеток рака толстой кишки PD<0.01). Результаты Western blot показали, что группы с вмешательством CCL5 и совместные культивирования имели статистически значимое уменьшение эпителиального кадгерина (P<0.01), нового кадгерина, виментина, β-катенина, STAT3 и повышение длястат3 (P<0.05, P<0.01). Сравнивая с совместным выращиванием, группы синлианца и с антителами CCL5 показали статистически значимое увеличение экспрессии эпителиального кадгерина (P<0.01) и уменьшение экспрессии нового кадгерина, виментина, β-катенина, STAT3, длястат3 и отношение длястат3/STAT3 (P<0.05, P<0.01). Вывод: Стимуляция выделения CCL5 из TAMs-HCT116 увеличивает миграцию клеток рака толстой кишки и участвует в активации сигнального пути STAT3/β-catenin. Препарат синлиань джиаду фан способен уменьшить способность миграции клеток HCT116 в культуре согласованных с макрофагами M2-типа через управление CCL5, подавление фосфорилирования STAT3 и дисбаланса экспрессии маркеров EMT.

Синлиань джиаду фан; рак толстой кишки; туморно-ассоциированные макрофаги; C-C-хемокинный лиганд 5 (CCL5); эпителиальный мезенхимальный переход (EMT)