Mechanism of Xiayuxue Tang in Inhibiting Hepatocellular Carcinoma Cells by Regulating YAP1/SIRT5 Signaling Axis to Mediate Succinate Metabolism and Succinylation
Цель: исследовать регулирование метаболизма янтарной кислоты и ингибирование клеток печени рака приложения кровь. Методы: Подготовить кровь, содержащую кровь; Использование метода проверки активности пролиферации клеток (CCK-8) для наблюдения влияния различных концентраций янтарной кислоты на пролиферацию клеток HepG2, MHCC97H и определения последующей экспериментальной концентрации; Дальнейшее использование метода CCK-8 для проверки воздействия крови, содержащей кровь (5%, 10%, 15%) на пролиферацию клеток HepG2, MHCC97H; Проверить воздействие крови, содержащей кровь (5%, 10%, 15%) на пролиферацию клеток HepG2, MHCC97H, период, миграцию, инвазию и апоптоз с использованием потока клеток, клеточного исследования, трансвелла; Изменение метаболизма янтарной кислоты и янтарной кислоты при помощи определения содержания янтарной кислоты, определения активности сукцинат дегидрогеназы (СДГ) и метода иммуноблотирования (Western blot); Реальное время количественной полимеразной цепной реакции с помощью реального времени ПЦР, Western blot для определения экспрессии протеина связанного с Да и информационного фактора 5 (SIRT5); Применить молекулярную докинг для проверки соединения основных компонентов крови с целевыми белками. Результаты: По сравнению с контрольной группой, 1-2 ммоль/L янтарной кислоты значительно способствует пролиферации клеток HepG2, MHCC97H (P<0.01); По сравнению с контрольной группой, кровь, содержащая кровь (5%, 10%, 15%), значительно подавляет пролиферацию клеток HepG2, MHCC97H (P<0.05, P<0.01); По сравнению с контрольной группой, кровь, содержащая кровь (5%, 10%, 15%), значительно подавляет пролиферацию клеток HepG2, MHCC97H, миграцию, инвазию и индуцирует апоптоз клеток HepG2, MHCC97H (P<0.01); Кроме того, по сравнению с группой крови, кровь (5%, 10%, 15%) вместе с кислотой значительно увеличивает уровень пролиферации клеток HepG2, MHCC97H (P<0.05>0.01), способность миграции и инвазии (P<0.05, P<0.01), снижает процент клеток в стадии G0/G1 (P<0.01) и снижает уровень апоптоза клеток (P<0,01). В отношении метаболизма янтарной кислоты, по сравнению с контрольной группой, кровь, содержащая кровь (5%, 10%, 15%); Снижает уровень янтарной кислоты в клетках HepG2, MHCC97H (P<0.05, P<0.01), повышает активность SDH (>0,01), и значительно снижает уровень ацетилирования янтарной кислоты. В отношении пути YAP1/SIRT5, по сравнению с контрольной группой, кровь, содержащая кровь (5%, 10%, 15%) после вмешательства значительно снижает мРНК и экспрессию белка YAP1 в клетках HepG2, MHCC97H (P<0.05, P<0.01), а экспрессию мРНК и белка SIRT5 значительно повышается (P<0.05, P<0.01). Результаты молекулярного докинга показывают, что между YAP1 и SIRT5, а также между основным активным веществом крови и YAP1, SIRT5 есть хорошая связующая способность. Вывод: Кровь сгущается через регулирование сигнальной оси YAP1/SIRT5, вмешиваясь в метаболизм янтарной кислоты и ацетилирование янтарной кислоты, повышая ингибирующее действие на клетки печени рака.
关键词
hepatocellular carcinoma;Xiayuxue Tang;succinate;succinylation;yes-associated protein 1 (YAP1);sirtuin 5 (SIRT5)