Цель исследования заключалась в изучении влияния китайской травяной формулы Цзя Вэй Бу Ян Хань У Тан через путь сигнальной передачи PTEN-индуцированной протеин киназы 1/активатора E3 убиквитина (PINK1/Parkin), опосредующего митофагию, на модель ишемии головного мозга с реперфузией у мышей, а также в исследовании механизма улучшения состояния при ишемии и реперфузии головного мозга. Были рандомизировано распределены 72 самца мышей C57BL/6J на 6 групп по 12 особей каждая: группа ложной операции, группа модели окклюзии средней мозговой артерии с реперфузией (MCAO/R), три группы с низкой, средней и высокой дозировкой Цзя Вэй Бу Ян Хань У Тан (8,84, 17,68, 35,36 г/кг/день) и группа аспирина (13,00 мг/кг/день). Оценивали уровень неврологических нарушений методом Zea-Longa; объем инсульта измеряли красителем 2,3,5-трифенилтетразолий (TTC); патологию мозговой ткани и повреждение нейронов — гематоксилином и эозином (HE), а также окраской Ниссля; апоптоз клеток — методом TUNEL; ультраструктуру митохондрий мозга — при помощи трансмиссионной электронной микроскопии (TEM); уровни супероксиддисмутазы (SOD) и малонового диальдегида (MDA) в сыворотке — методом иммуноферментного анализа (ELISA); уровни экспрессии mRNA и белков PINK1, Parkin, легкой цепи микротрубочек-ассоциированного белка 3 (LC3B), соотношение LC3II/LC3I и p62 выявляли с помощью количественной ПЦР в реальном времени и вестерн-блоттинга. По сравнению с группой ложной операции у моделей наблюдалось значительное повышение неврологического дефицита и объема инфаркта головного мозга (P<0,01), выраженные поражения коры мозга, снижение плотности нейронов, вакуолизация цитоплазмы, пикноз ядер, значительное уменьшение количества телец Ниссля, деструкция телец в цитоплазме пирамидных клеток с размытыми границами, значительное увеличение количества TUNEL-позитивных клеток (P<0,01), разрыв кристы митохондрий и вакуолизация матрикса, разрыв внешней мембраны митохондрий и образование аутофагосом с увеличением их количества, снижение активности SOD в сыворотке (P<0,01), повышение уровня MDA (P<0,01), значительное повышение мРНК и белковой экспрессии PINK1, Parkin и LC3B (P<0,05, P<0,01), выраженное снижение экспрессии p62 (P<0,05, P<0,01). По сравнению с модельной группой у животных, получавших лечение, наблюдалось значительное снижение неврологического дефицита и объема инфаркта (P<0,01), повышение плотности нейронов, уменьшение вакуолизации, нормализация формы ядра, постепенное прояснение ядра, значительное повышение плотности и уменьшение деструкции телец Ниссля, улучшение их контура, частичное восстановление структуры митохондриальных крист, проявление аутофагосомных инклюзий, снижение степени повреждения митохондрий, значительное повышение активности SOD (P<0,01), снижение уровня MDA; значительное повышение экспрессии мРНК и белков PINK1, Parkin и LC3II/LC3I (P<0,05, P<0,01), выраженное снижение экспрессии p62 в низкой и средней дозах (P<0,05, P<0,01); статистическая значимость. Заключение: Цзя Вэй Бу Ян Хань У Тан может повышать уровень экспрессии белков PINK1, Parkin и LC3II/LC3I и снижать экспрессию p62, что свидетельствует о том, что улучшение ишемии и реперфузии головного мозга связано с регуляцией белков сигнального пути PINK1/Parkin. Регуляция митофагии может быть одним из механизмов действия этого препарата при облегчении повреждений мозга у мышей с ишемией и реперфузией.

Цзя Вэй Бу Ян Хань У Тан; композитный препарат Гуи Ци Тун Май; ишемия и реперфузия мозга; аутофагия; сигнальный путь протеин киназы 1, индуцированной PTEN/E3 убиквитин-лигазы (PINK1/Parkin)