Цель: Данггуй является широко используемым крупным лекарственным и пищевым сырьем, на рынке часто встречается подделка, что серьёзно влияет на клиническую эффективность препаратов. В настоящее время технологии качественного обнаружения подделок достаточно развиты, но методы количественного обнаружения подделок в переработанных продуктах отсутствуют. В данном исследовании на примере Данггуй и его основных близкородственных легко подделываемых видов "земляной Данггуй" (朝鲜当归) проведено количественное исследование с целью создания молекулярного метода количественного обнаружения лекарственных трав и их переработанных продуктов (Herb-Q), который служит демонстрацией для разработки количественных технологий для сырья Данггуй и связанных с ним продуктов здоровья. Метод основан на выборе специфических однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в полном хлоропластном геноме Данггуй и 朝鲜当归. Выбраны специфические для Данггуй сайты для исследования количественной методологии с использованием смешанных порошков трав с разным уровнем подделки (линейность, предел количественного определения, предел обнаружения и воспроизводимость). Метод Herb-Q был проверен на точность количественного определения в китайских традиционных препаратах с содержанием Данггуй при трёх различных пропорциях подделки (15%, 25%, 35%). Результаты: сравнение 123 последовательностей хлоропластного генома рода Данггуй, с учётом внутривидовой консервативности, межвидовой специфичности и требований к пирофосфатному высокопроизводительному секвенированию, выявило позиции 9674 (A/G) в последовательности хлоропластного генома NC_042826.1 и 38592 (T/C) в последовательности NC_029393.1 как специфические молекулярные идентификационные маркеры для Данггуй и 朝鲜当归 соответственно. Для построения линейной зависимости метода Herb-Q была выбрана позиция 9674 (A/G) специфичная для Данггуй, коэффициент детерминации R² составил 0,9974 (R²>0,99), что свидетельствует о хорошей линейности. Пределы количественного определения и обнаружения составили 2,0%, воспроизводимость была хорошей (относительное стандартное отклонение (RSD) <2,0%). По количественному методу Herb-Q определено содержание подделки 朝鲜当归 в препарате "Активный порошок для кровообращения и обезболивания" с средней повторной ошибкой 1,3%. Заключение: Данное исследование демонстрирует, что метод количественного обнаружения Herb-Q, основанный на позиции 9674 (A/G) хлоропластного генома NC_042826.1 Данггуй, обладает хорошей применимостью, объективностью и точностью для Данггуй, "земляного Данггуй" и их переработанных продуктов, и может служить технической поддержкой для количественного контроля продаваемых продуктов на основе Данггуй, таких как китайские препараты, диетические добавки и оздоровительные продукты.
关键词
метод молекулярного количественного определения трав (Herb-Q); Данггуй; подделка; пирофосфатное секвенирование; количественное исследование