Механизм ингибирования окисленным ресвератролом эпителиально-мезенхимального перехода при немелкоклеточном раке легких через сигнальный путь PI3K/Akt
摘要
Цель исследования — изучить механизм ингибирования окисленной ресвератрола (OXY) эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) при немелкоклеточном раке легких (NSCLC) через сигнальный путь фосфатидилинозитол-3-киназы/протеинкиназы B (PI3K/Akt). Для определения выживаемости клеток A549 и H1299 под воздействием различных концентраций OXY (0, 30, 60, 90 мкмоль/л) использовали метод CCK-8. Влияние OXY на пролиферативную активность клеток исследовали с помощью EdU-инкорпорации и клонирования; влияние на миграцию и инвазию оценивали с помощью скарификационного теста и инвазивного Transwell-теста. Уровень экспрессии Snail, E-cadherin, N-cadherin и Vimentin определяли методом вестерн-блоттинга. Прогноз механизма действия OXY осуществляли с помощью сетевой фармакологии и молекулярного докинга, а влияние OXY на белки сигнального пути PI3K/Akt – методом вестерн-блоттинга. Провели эксперимент спасения с использованием агониста PI3K/Akt 740Y-P. Результаты показали, что по сравнению с контрольной группой выживаемость NSCLC клеток при лечении OXY (20~120 мкмоль/л) значительно снизилась (p<0,05), средние значения IC50 через 48 часов составили 113,6 для A549 и 92,53 для H1299. При концентрациях 0, 30, 60 и 90 мкмоль/л проводили фенотипические и механистические исследования. Пролиферация, количество колоний, миграция и инвазия в группах с OXY (30, 60, 90 мкмоль/л) значительно уменьшились (p<0,05, p<0,01). Вестерн-блоттинг показал снижение экспрессии Snail, N-cadherin и Vimentin (p<0,05) и повышение E-cadherin (p<0,01). Сетевая фармакология и докинг демонстрируют взаимодействие OXY с PI3K/Akt. Уровни PI3K и Akt не изменялись статистически значимо, тогда как фосфорилированные p-PI3K и p-Akt снижались (p<0,05). В эксперименте спасения 740Y-P (15 мкмоль/л) повышал пролиферацию, колонизацию, миграцию и инвазию (p<0,01), даже в присутствии OXY. Концентрации p-PI3K, p-Akt, Snail, N-cadherin и Vimentin увеличивались (p<0,05), тогда как E-cadherin снижался (p<0,01). Заключение: OXY может ингибировать метастазирование NSCLC, подавляя сигнальный путь PI3K/Akt и процесс EMT.
关键词
немелкоклеточный рак легких; окисленный ресвератрол; фосфатидилинозитол-3-киназа/протеинкиназа B (PI3K/Akt); эпителиально-мезенхимальный переход (EMT); пролиферация и инвазия