Цель исследования — изучить роль и механизм действия порошка Тайшань Паньши (TSPSP) в подавлении оксидативного стресса в клетках хорионтического ворсинчатого слоя человека (HTR-8/SVneo) и понять механизм лечения TSPSP при самопроизвольном выкидыше (SA). Использовалась клиническая база данных (GEO) для анализа дифференциальной экспрессии генов при SA и их связи с оксидативным стрессом. С применением сетевой фармакологии были отобраны активные компоненты TSPSP, создана сеть «традиционная китайская медицина - компоненты - цели - болезнь» для предсказания механизма действия TSPSP. В экспериментах in vitro клетки HTR-8/SVneo были разделены на следующие группы: контроль, модель, группы с сывороткой, содержащей TSPSP (2,5%, 5%, 10%), и группу с ингибитором Nrf2 (ML385, 30 мкмоль/л). За исключением контрольной, остальные группы стимулировались H2O2 (150 мкмоль/л) в течение 3 ч для моделирования оксидативного повреждения. После моделирования контрольная и модельная группы получали 10% пустую сыворотку, группы лечения TSPSP — соответствующую концентрацию лекарственной сыворотки, группа ингибитора — дополнительно ML385. Клетки культивировали 24 ч, затем собирали образцы. Проводились тесты на пролиферацию клеток (CCK-8), миграцию (тест заживления ран), определялись уровни MDA, Fe2+, GSH (ELISA), внутриклеточный ROS (DCF-DA), экспрессия белков и мРНК KEAP1, Nrf2, FoxO3 с помощью иммунофлуоресценции и количественной ПЦР, а также уровни KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD методом вестерн-блоттинга. Анализ базы GEO выявил, что гены KEAP1, Nrf2 и FoxO3 связаны с заболеванием; после сопоставления с путями оксидативного стресса выделено 9 значимых путей (P<0.05), включая те, где участвуют Nrf2 и FoxO3. Сетевой анализ определил 246 мишеней компонентов TSPSP и 2804 мишени SA, пересечение составило 154 потенциальных мишени. Топологический анализ выявил высокую степень центральности KEAP1 и Nrf2, обогащенный анализ GO и KEGG показал вовлеченность в реакцию на оксидативный стресс, путь FoxO и MAPK. В клеточных экспериментах модель показала значительное снижение жизнеспособности клеток (P<0.01), лечение TSPSP повысило выживаемость (P<0.01), ML385 снизил её до ~70% (P<0.01). Модель увеличила уровни MDA, Fe2+, ROS и снизила GSH и миграцию (P<0.01). Уровни KEAP1, FoxO3 в модели повышены, Nrf2, GPX4, SOD снижены (P<0.01). TSPSP обратил эти изменения (P<0.01), ML385 отменил эффект TSPSP (P<0.05). Вывод: TSPSP подавляет оксидативный стресс в клетках при H2O2 через активацию сигнального пути KEAP1/Nrf2/FoxO3.

порошок Тайшань Паньши; самопроизвольный выкидыш; Kelch-подобный белок ECH-связывающий 1/ядерный фактор E2-связанный/плечевой белок FoxO3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3) сигнальный путь; клетки хорионтического ворсинчатого слоя; оксидативное повреждение