Целью исследования является изучение влияния формулы для рассасывания кровоподтеков и детоксикации на микроциркуляторные эндотелиальные клетки мозга (BMECs) после повреждения, вызванного недостатком глюкозы и кислорода (OGD), а также механизмов вмешательства. Метод: использование набора для определения пролиферации клеток (CCK-8) для определения времени OGD, выбор оптимальной концентрации сыворотки с лекарственными веществами формулы. Клетки случайным образом разделены на группы: группа с культивирующей средой без сыворотки (KBXQ), модельная группа (OGD), группа HYXQ (OGD + лекарственная сыворотка формулы), группа 3-метиладенин (3-MA) (OGD + 3-MA). Под инвертирующим микроскопом наблюдали морфологию клеток; под электронным микроскопом – число аутофагосом и автолизосом в клетках; метод CCK-8 использовали для определения жизнеспособности клеток; метод TUNEL – для определения уровня апоптоза; иммуннофлуоресцентный метод – для определения экспрессии белков LC3 и Occludin; измеряли проницаемость однослойных клеток. Клетки случайным образом разделены на группы KBXQ, модельную (OGD), HYXQ, блокатор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) LY294002 (OGD + LY294002), HYXQ + LY294002 (OGD + лекарственная сыворотка + LY294002). Методом Western blot определяли уровни ключевых аутофагических молекул Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ, p62, Occludin, p-PI3K, PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR и mTOR. Оптимальным условием моделирования выбран OGD в течение 6 ч, оптимальной концентрацией сыворотки – 5%. По сравнению с KBXQ, в модельной группе под инвертирующим микроскопом наблюдались явные повреждения клеток, под электронным микроскопом увеличилось количество аутофагосом и автолизосом, жизнеспособность клеток значительно снизилась (P<0.01), уровень апоптоза значительно повысился (P<0.01), интенсивность флуоресценции LC3 значительно возросла (P<0.01), интенсивность флуоресценции Occludin значительно снизилась (P<0.01), проницаемость слоя клеток значительно увеличилась (P<0.01); по сравнению с модельной группой, группы HYXQ и 3-MA показали значительное улучшение повреждения клеток, количество аутофагосом и автолизосом значительно уменьшилось, жизнеспособность повысилась (P<0.01), уровень апоптоза упал (P<0.01), интенсивность флуоресценции LC3 снизилась (P<0.01), интенсивность флуоресценции Occludin возросла (P<0.01), проницаемость слоя снизилась (P<0.05). Результаты Western blot показали, что по сравнению с KBXQ в модельной группе уровень экспрессии Beclin1 и LC3Ⅱ/LC3Ⅰ значительно повысился (P<0.01), а уровни p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR значительно снизились (P<0.01); по сравнению с модельной группой в HYXQ уровни Beclin1 и LC3Ⅱ/LC3Ⅰ значительно снизились (P<0.01), а уровни p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR значительно повысились (P<0.01); в группе LY294002 уровни Beclin1 и LC3Ⅱ/LC3Ⅰ значительно возросли (P<0.05, P<0.01), а уровни p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR значительно снизились (P<0.01); по сравнению с LY294002 в группе HYXQ + LY294002 уровни Beclin1 и LC3Ⅱ/LC3Ⅰ значительно снизились (P<0.01), а уровни p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR значительно возросли (P<0.01). Вывод: Формула для рассасывания кровоподтеков и детоксикации оказывает защитное действие на BMECs, повреждённые OGD, вероятно, за счёт активации пути PI3K/Akt/mTOR, подавляющего чрезмерный аутофаг и поддерживающего функцию белка Occludin и эндотелиального барьера.

микроциркуляторные эндотелиальные клетки мозга; аутофагия; формула для рассасывания кровоподтеков и детоксикации; фосфатидилинозитол-3-киназа (PI3K); протеин киназа B (Akt)