Целью является изучение влияния формулы для устранения кровоизлияний и детоксикации на эндотелиальные клетки мелких сосудов мозга (BMECs) после повреждения вследствие недостатка глюкозы и кислорода (OGD) и механизмы вмешательства. Метод: использовали метод оценки пролиферации и активности клеток (CCK-8) для определения времени OGD, выбирали концентрацию сыворотки с лекарственным составом формулы для устранения кровоизлияний и детоксикации; клетки случайным образом разделены на группы: группа с чистой сывороткой (KBXQ), модельная группа (OGD), группа HYXQ (OGD + сыворотка с лекарственным составом), группа 3-метиладенин (3-MA) (OGD + 3-MA). Морфология клеток изучалась под инвертированным микроскопом; количество аутофагосом и аутофаголизосом изучали под электронным микроскопом; выживаемость клеток оценивали с помощью CCK-8; апоптоз оценивали методом TUNEL; экспрессию белков LC3 и Occludin исследовали методом иммунной флуоресценции; измеряли проницаемость монослоя клеток. Клетки случайным образом разделяли на группы KBXQ, модельную группу (OGD), HYXQ, группу с ингибитором фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) LY294002 (OGD + LY294002), группу HYXQ+LY294002 (OGD + сыворотка с лекарственным составом + LY294002); уровни ключевых молекул автрофагии Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ, p62, Occludin, фосфорилированного (p)-PI3K, PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR, mTOR определяли методом Western blot. Результаты: оптимальными условиями моделирования выбрали OGD на 6 ч, оптимальной концентрацией сыворотки формулы – 5%. В сравнении с группой KBXQ в модельной группе наблюдалось выраженное повреждение клеток под инвертированным микроскопом, значительное увеличение количества аутофагосом и аутофаголизосом под электронным микроскопом, значительное снижение выживаемости клеток (P<0,01), значительное повышение уровня апоптоза (P<0,01), значительное повышение флуоресценции белка LC3 (P<0,01), значительное снижение флуоресценции белка Occludin (P<0,01), значительное повышение проницаемости монослоя клеток (P<0,01); по сравнению с модельной группой у групп HYXQ и 3-MA отмечено явное улучшение повреждения клеток, значительное уменьшение количества аутофагосом и аутофаголизосом, значительное повышение выживаемости клеток (P<0,01), значительное снижение апоптоза (P<0,01), значительное снижение флуоресценции LC3 (P<0,01), значительное повышение флуоресценции Occludin (P<0,01), снижение проницаемости (P<0,05). Результаты Western blot показали, что в сравнении с KBXQ в модельной группе выражено увеличение экспрессии Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0,01), значительное снижение уровня p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR (P<0,01); по сравнению с модельной группой у HYXQ выражено значительное снижение Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0,01), значительное повышение p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR (P<0,01); в группе LY294002 выражены повышение Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0,05, P<0,01) и снижение p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR (P<0,01); по сравнению с LY294002 в группе HYXQ+LY294002 отмечено значительное снижение Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0,01) и значительное повышение p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt и p-mTOR/mTOR (P<0,01). Вывод: формула для устранения кровоизлияний и детоксикации оказывает защитное действие на клетки BMEC после OGD, возможно через активацию аутофагического пути PI3K/Akt/mTOR, подавляя избыточную аутофагию, что защищает белок Occludin и функцию эндотелиального барьера.

эндотелиальные клетки мелких сосудов мозга; аутофагия; формула для устранения кровоизлияний и детоксикации; фосфатидилинозитол-3-киназа (PI3K); протеинкиназа B (Akt)