Целью данного исследования было изучение механизма действия Грутоксина в облегчении нейропатической боли (NP) на основе сетевой фармакологии, молекулярного докинга и экспериментальных животных. Химический состав Грутоксина был определён с помощью ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии-четырёхполюсного орбитрапного высокоразрешающего масс-спектрометра (UHPLC-Q-Orbitrap HRMS). С помощью сетевой фармакологии были предсказаны ключевые мишени и связанные пути вмешательства Грутоксина при NP. 48 крыс SD были случайным образом разделены на группу ложной операции, модельную группу, группы с низкой, средней и высокой дозами Грутоксина (1.35, 2.7, 5.4 г/кг) и группу с прегабалином (30 мг/кг). Был подготовлен модель хронического компрессионного повреждения (CCI) для NP. Порог механического (MWT) и теплового (TWL) обезьяненного рефлексов измеряли до операции, на 3-й и 5-й день после операции, а также на 3-й, 7-й, 11-й и 14-й день после лекарственного вмешательства. Иммунофлуоресцентный (IF) анализ проводился для выявления маркеров нейрональной активности c-Fos и нейрокининового рецептора 1 (NK-1R), необходимого для центральной сенситизации. Метод вестерн-блот анализировал экспрессию и уровень фосфорилирования BDNF, TrkB, PLCγ, CaMKⅡα и CREB в спинном мозге. IF-анализ выявлял экспрессию фосфорилированных белков p-TrkB, p-PLCγ, p-CaMKⅡα и p-CREB. Результаты показали, что Грутоксин содержит 138 соединений. Сетевая фармакология выявила 409 потенциальных целевых молекул, включая 74 ключевые, такие как NTRK2, PTGS2, mTOR, Akt1, MAPK1. Молекулярный докинг показал хорошее связывание NTRK2 (ген, кодирующий белок TrkB) с рододиолозидом, окубином, генистеином, кверцетином, гесперетином и куркумином. Поведенческие тесты показали значительное снижение MWT и TWL в модельной группе по сравнению с группой ложной операции (P<0.01). IF-анализ показал значительное увеличение экспрессии c-Fos и NK-1R в спинном мозге модельной группы по сравнению с контрольной (P<0.01), а в группе с высокой дозой Грутоксина наблюдалось значительное снижение этих маркеров (P<0.01). Анализы Western blot и IF показали значительное повышение уровней BDNF, TrkB, p-TrkB, PLCγ, p-PLCγ, CaMKⅡα, p-CaMKⅡα, CREB и p-CREB в модельной группе по сравнению с контролем (P<0.01), и значительное их снижение в группе высокой дозы Грутоксина (P<0.01). Вывод: Грутоксин снижает нейрональную активность и центральную сенситизацию, облегчая нейропатическую боль посредством подавления сигнального пути BDNF/TrkB/CaMKⅡ/CREB.

Грутоксин; нейропатическая боль; активность нейронов; центральная сенситизация; мозговой нейротрофический фактор (BDNF)/рецептор тирозинкиназы B (TrkB)/кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа IIα (CaMKⅡα)/протеин связывающий cAMP-элемент (CREB) сигнальный путь