Трёхкомпонентное исследование "микроскопическое исследование – химический анализ – оценка эффективности" принципа усиления действия белого АТР, обжаренного с почвой, на укрепление селезенки и остановку диареи

SHAN Guoshun ,  

XIAO Yuyan ,  

YUAN Chu ,  

CHEN Xiuai ,  

ZHAO Qimiao ,  

LIU Xiang ,  

WU Hao ,  

ZHANG Ke ,  

LIU Siqi ,  

YU Yongduo ,  

摘要

Целью исследования является анализ изменений микроструктуры, химического состава и противоязвенного действия при язвенном колите (UC) белого АТР (白术) до и после прогрева с почвой, с целью выявления принципов усиления действия "укрепление селезенки и прекращение диареи" при такой обработке. Методика: анализ микроструктуры и элементного состава белого АТР до и после обработки методом сканирующей электронной микроскопии и энергодисперсионного спектроскопического анализа (SEM-EDS) для выявления различий и их причин; химический анализ и идентификация компонентов в сыром и обработанном белом АТР с помощью ультра-эффективной жидкостной хроматографии с квадрупольным ионо-лазерным летным масс-спектрометром (UPLC-Q-TOF-MS) и платформы UNIFI 1.9.2 для анализа природных продуктов, в сочетании с методами многомерного статистического анализа, такими как анализ главных компонент (PCA) и ортогональный проекционно-минимальный квадратичный дискриминантный анализ (OPLS-DA); создание модели UC на мышах с помощью сульфата декстрана натрия (DSS), оценка степени кишечного воспаления через индекс активности заболевания (DAI), гистопатологическое исследование слизистой толстой кишки с использованием гематоксилина и эозина (HE), определение уровня воспалительных факторов методом иммуноферментного анализа (ELISA), анализ экспрессии ключевых генов и белков кишечного барьера с помощью количественной ПЦР в реальном времени и вестерн-блоттинга, оценка микробного разнообразия методом 16S рРНК, исследование уровня короткоцепочечных жирных кислот (SCFAs) в фекалиях с использованием методики головная пространства-газовая хроматография-масс-спектрометрия (HS-GC-MS). На основе полученных данных изучено влияние обработки белого АТР на биологический, химический, механический и иммунный барьеры в модели животных, а также разница и механизмы фармакологического действия на слизистый барьер кишечника у мышей с UC. Результаты: SEM выявил значительное количество почвенных частиц на поверхности обработанного белого АТР с пузырьковыми вздутиями, а также многочисленные трещины и складки на поверхности вспомогательного почвенного материала. EDS показал значительное повышение содержания Si, Al, Mg, Ca в обработанном белом АТР по сравнению с сырым, что соответствует основным компонентам почвы. Идентифицировано 132 компонента в положительном ионном режиме, включая терпены, полифенолы и аминокислоты; 40 компонентов в отрицательном ионном режиме, в основном полифенолы и гликозиды. Особенно заметны изменения содержания сесквитерпенов и полифенольных кислот после обработки. Обработка белого АТР снижает DAI у мышей с UC, уменьшает укорочение толстой кишки, снижает уровень провоспалительных цитокинов IL-17, IL-18, IFN-γ, TNF-α в сыворотке, повышает противовоспалительные факторы sIgA, IL-10, IL-4, TNF-β, увеличивает экспрессию ключевых генов и белков кишечного барьера (ZO-1, Occludin, Claudin-1, MUC2), улучшает разнообразие микробиоты и уровень SCFAs (P<0.05, P<0.01). Сырые и слегка обжаренные белые АТР обладают сходными, но менее выраженными эффектами, а вспомогательная почва также оказывает определенное влияние. Выводы: обжарка с почвой усиливает защитное действие белого АТР на слизистый барьер кишечника у мышей с UC, что обусловлено сочетанием изменений микроструктуры и химического состава под воздействием нагрева и адсорбцией почвенного компонента.

关键词

Белый АТР;Метод обжарки с почвой;Микроскопическое исследование;Сканирующая электронная микроскопия - энергодисперсионный спектр (SEM-EDS);Химический анализ;Ультраэффективная жидкостная хроматография - квадрупольный – масс-спектрометрия времени пролета (UPLC-Q-TOF-MS);Кишечный слизистый барьер;Принцип обработки

阅读全文