Цель настоящего исследования - изучить механизм действия настоя для помощи яйцеклеткам, подавляющего чрезмерный аутофагический процесс человеческих гранулезных клеток яичников (KGN) и улучшающего первичную недостаточность яичников (POI) на основе сигнального пути фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K)/протеинкиназы B (Akt)/мишени рапамицина (mTOR). Методика: оптимальная концентрация циклофосфамида для создания модели POI на клетках KGN была определена с помощью теста CCK-8. На основании этого оценивалось влияние сыворотки с лекарственными компонентами настоя на жизнеспособность клеток модели KGN. После определения оптимальной дозы клетки KGN были разделены на группы: контрольная (20% пустая сыворотка), модельная (20% пустая сыворотка + 5 мкмоль/л циклофосфамид), группа со сывороткой настоя (20% сыворотка настоя + 5 мкмоль/л циклофосфамид), группа с ингибитором аутофагии (20% пустая сыворотка + 5 мкмоль/л циклофосфамид + 20 мкмоль/л гидроксихлорохина), группа со смесью ингибитора аутофагии и настоя (20% сыворотка настоя + 5 мкмоль/л циклофосфамид + 20 мкмоль/л гидроксихлорохина), и группа с бугьяле (20% сыворотка бугьяле + 5 мкмоль/л циклофосфамид). После 48 часов культивирования выявляли уровень апоптоза клеток методом проточной цитометрии и определяли экспрессию белков PI3K, p-Akt, Akt, фосфорилированного mTOR и mTOR, а также белков, связанных с аутофагией (Beclin1, ATG5, LC3) методом вестерн-блот. Уровень аутофагии оценивали с помощью окрашивания MDC. Результаты: обработка клеток KGN 5 мкмоль/л циклофосфамида в течение 48 часов формирует модель POI с выраженным подавлением пролиферации клеток KGN, зависимость от дозы циклофосфамида. Сыворотка настоя с концентрацией 20% и 30% стимулировала пролиферацию клеток и ослабляла ингибирующее действие циклофосфамида, эффективность обеих концентраций сопоставима. В сравнении с контролем в модельной группе уровень апоптоза существенно повышался (P<0,01), уровни экспрессии PI3K, p-Akt и p-mTOR значительно снижались (P<0,01), а белки Beclin1, LC3 и ATG5 значительно возрастали (P<0,01); уровень Akt и mTOR изменений не показал, интенсивность флюоресценции MDC значительно увеличилась (P<0,01). По сравнению с модельной группой в контрольной, модели, группе настоя, ингибитора аутофагии, смеси ингибитора и настоя, а также бугьяле наблюдалось значительное снижение уровня апоптоза (P<0,05, P<0,01), при этом наилучший эффект в группе смеси ингибитора и настоя; уровни PI3K, p-Akt и p-mTOR значительно повысились (P<0,05, P<0,01), особенно в группе смеси (P<0,01); уровни Beclin1 и ATG5 значительно снизились (P<0,05, P<0,01). В группах настоя и бугьяле уровень LC3 значительно снизился (P<0,05, P<0,01), в группах ингибитора и смеси ингибитора с настоем LC3 снижался, но без статистической значимости. Вывод: настой для помощи яйцеклеткам, вероятно, подавляет чрезмерный аутофагический процесс через активацию пути PI3K/Akt/mTOR, что обеспечивает защиту модели клеток KGN от повреждений циклофосфамидом и улучшение состояния POI.

Настой помощи яйцеклеткам; первичная недостаточность яичников; циклофосфамид; аутофагия