Целью исследования является изучение фармакологической основы и механизма противовоспалительного действия рецепта Бу Шэнь Тун Ду. Методы: с помощью сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии – линейного ионного ловушки – орбитального трапециевидного масс-спектрометра высокой точности (UPLC-LTQ-Orbitrap-MS) систематически идентифицированы химические компоненты рецепта Бу Шэнь Тун Ду и его компоненты, проникающие в кровь. С использованием сетевой фармакологии были отобраны активные компоненты, проникающие в кровь, и потенциальные мишени, построена сеть PPI ключевых мишеней, проведен анализ обогащения пересекающихся мишеней, а также использована молекулярная докинг для проверки связывания ключевых компонентов с мишенями. Для in vivo проверки использовалась модель воспаления на трансгенных зеброфишах Tg(mpx:GFP). Личинки зеброфишей на 3-й день после оплодотворения (3 dpf) были случайным образом разделены на контрольную группу, модельную группу, группу с положительным контролем ацетат дексаметазона (75 мкмоль·л^-1) и группы с низкой, средней и высокой концентрациями рецепта Бу Шэнь Тун Ду (500, 1000, 2000 мг·л^-1). Под флуоресцентным микроскопом наблюдали распределение и количество нейтрофилов в желточном мешке. С помощью количественной ПЦР в реальном времени определяли уровни мРНК ключевых генов сигнального пути Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), миелоидного дифференцировочного фактора 88 (MyD88) и ядерного фактора транскрипции NF-κB, а также воспалительных цитокинов интерлейкина-1β (IL-1β), IL-6 и фактора некроза опухоли α (TNF-α). Результаты: в рецепте Бу Шэнь Тун Ду идентифицировано 120 химических компонентов, при этом 26 из них подтверждены как прототипы методом серумной хемохимии. Сетевая фармакология выявила 227 общих мишеней между ревматоидным артритом (RA) и компонентами, проникающими в кровь. Предполагается, что механизм действия включает алкалоиды сизаммирин, биберин, изотиоцианат, дигоксигликозид, коричный гликозид и метилэфедрин, которые воздействуют на ключевые мишени: протеин киназу B1 (Akt1), фактор передачи и активации транскрипции 3 (STAT3), фактор некроза опухоли (TNF), TLR4, митоген-активируемую протеин киназу 14 (MAPK14) и каталитическую субъединицу фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат 3-киназы α (PIK3CA). Данные пути регулируют TLR4 и NF-κB, осуществляя противовоспалительный эффект. In vivo проверка на зеброфишах показала, что максимальная переносимая качественная концентрация рецепта составляет 2000 мг·л^-1. По сравнению с контрольной группой в модели значительно возросло количество нейтрофилов в желточном мешке (P<0.01), а уровни экспрессии мРНК TLR4, MyD88, NF-κB, TNF-α, IL-6 и IL-1β значительно повысились (P<0.05, P<0.01). По сравнению с модельной группой средние и высокие концентрации рецепта и группа ацетата дексаметазона значительно снижали количество нейтрофилов (P<0.05, P<0.01), в то время как низкая доза не имела статистически значимых изменений, при этом уровни экспрессии мРНК TLR4, MyD88, NF-κB, TNF-α, IL-6 и IL-1β были значительно снижены (P<0.05, P<0.01). Заключение: фармакологическая основа рецепта Бу Шэнь Тун Ду была предварительно идентифицирована, подтверждена его противовоспалительная активность через сигнальный путь TLR4/MyD88/NF-κB, что предоставляет научную основу для дальнейшего клинического применения.

Рецепт Бу Шэнь Тун Ду; модель воспаления зеброфиша; Toll-подобный рецептор 4 (TLR4); миелоидный дифференцировочный фактор 88 (MyD88); ядерный фактор транскрипции NF-κB