Целью является изучение фармакологической основы и механизма действия противовоспалительного эффекта формулы «Бу Шэнь Тун Ду». Метод использует ультра-высокоэффективную жидкостную хроматографию с линейным ионным ловушечным иорбитал-ловушечным высокоточным масс-спектрометрическим анализом (UPLC-LTQ-Orbitrap-MS) для систематического определения химических компонентов формулы и включенных в кровь компонентов. Применена сеточная фармакология для отбора активных компонентов крови и потенциальных мишеней, построена PPI-сеть ключевых мишеней, проанализированы пересекающиеся мишени, проверена способность связывания ключевых компонентов с мишенями с помощью молекулярного докинга. Для in vivo проверки была использована трансгенная модель воспаления на зебровой рыбке Tg(mpx:GFP). Рыбки 3 дня после оплодотворения (3 dpf) были случайно разделены на контрольную группу, модельную группу, положительную группу с ацетат-дексаметазоном (75 μmol·L^-1) и группы с низкой, средней и высокой концентрациями формулы (500, 1000, 2000 мг·L^-1). Под флуоресцентным микроскопом наблюдали распределение и количество нейтрофилов в жёлточном мешке. Для определения уровней мРНК ключевых генов сигнального пути Toll-подобного рецептора 4 (TLR4)/мозгового дифференцирующего фактора 88 (MyD88)/ядерного фактора транскрипции-κB (NF-κB) и провоспалительных факторов интерлейкина (IL)-1β, IL-6, фактора некроза опухоли-α (TNF-α) использовалась количественная ПЦР в реальном времени. Результаты: выявлено 120 химических компонентов формулы, 26 прототипов подтверждены методом фармакохимии сыворотки. Сеточная фармакология выявила 227 общих мишеней между ревматоидным артритом (RA) и компонентами, попадающими в кровь. Предполагаемый механизм действия включает псевдоипоморфиновый алкалоид, стрихнин, горчичный алкалоид, дигоксин, коричный гликозид и метилэфедрин, которые воздействуют на ключевые мишени: белок киназу B1 (Akt1), фактор активации сигналов и транскрипции 3 (STAT3), фактор некроза опухоли (TNF), TLR4, митоген-активируемую протеинкиназу 14 (MAPK14) и каталитическую субъединицу Фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат 3-киназы α (PIK3CA), регулируют пути сигнализации TLR4 и NF-κB, оказывая противовоспалительное действие. Верификация на зебровой рыбке показала максимальную переносимую концентрацию формулы 2000 мг·L^-1. По сравнению с контрольной группой в модели отмечено значительное увеличение инфильтрации нейтрофилов в жёлточном мешке (p<0.01), значительное повышение мРНК TLR4, MyD88, NF-κB, TNF-α, IL-6 и IL-1β (p<0.05, p<0.01); по сравнению с модельной группой средние и высокие концентрации формулы и ацетат-дексаметазон значительно снижали количество нейтрофилов (p<0.05, p<0.01), у низкой дозы статистически значимых изменений не было, а уровни мРНК TLR4, MyD88, NF-κB, TNF-α, IL-6 и IL-1β были значительно понижены (p<0.05, p<0.01). Заключение: впервые определена фармакологическая основа формулы «Бу Шэнь Тон Ду» и подтвержден её противовоспалительный механизм действия через сигнальный путь TLR4/MyD88/NF-κB, что предоставляет научную основу для дальнейшего клинического применения.

Формула Бу Шэнь Тон Ду; модель воспаления на зебровой рыбке; Toll-подобный рецептор 4 (TLR4); мозговой дифференцирующий фактор 88 (MyD88); ядерный фактор транскрипции-κB (NF-κB)