Целью исследования было выяснить молекулярный механизм, посредством которого китайская травяная формула Qin Jing Pian регулирует старение тканевых клеток Лейдига и тканей яичек крыс через сигнальный путь циклин-зависимой киназы 4 / фактора транскрипции E2F (CDK4/E2F). Для клеточных экспериментов были выбраны спермотического статуса SPF самцы крыс SD в возрасте 2 месяцев, случайным образом разделенные на контрольную группу (получавшую равный объем физиологического раствора 0,9% NaCl) и группу, получавшую Qin Jing Pian (по 20 животных в группе). Для моделирования старения клеток Лейдига использовался индуцированный 100 мкмоль/л H2O2 клеточный модель старения клеток TM3; эффективность модели верифицировалась уровнем p16 и p21 методом вестерн-блотинга. В качестве положительного контроля для удаления активных форм кислорода (ROS) применяли антиоксидант N-ацетилцистеин (NAC, 1 ммоль/л). Клетки подвергались воздействию сывороток низкой (2.5%), средней (5%) и высокой (10%) концентрации Qin Jing Pian. Уровень тестостерона в клеточном супернатанте измеряли методом иммуноферментного анализа (ELISA), а экспрессию белков CDK4, E2F1, E2F2 - посредством вестерн-блоттинга. В исследовании на животных моделью являлись естественно старые крысы 19-месячного возраста, молодая контрольная группа - крысы 2 месяцев; положительный контроль получал подкожные инъекции пропионата тестостерона в дозе 5.21 мг·кг-1·д-1; группы низкой, средней и высокой доз Qin Jing Pian получали внутриглоточно дозы 0.72, 1.44, 2.88 г·кг-1·д-1 соответственно. Наблюдали общее состояние крыс, а содержание белков CDK4, E2F1, E2F2 в тканях яичек определяли методом вестерн-блоттинга. В клеточных экспериментах по сравнению с нормальной группой уровень экспрессии CDK4 и E2F1 значительно повысился (P<0.05) в модели, E2F2 слегка снизился; по сравнению с моделью, в группах NAC и низкой дозы Qin Jing Pian CDK4 значительно повысился (P<0.05), в средней дозе слегка вырос, а в высокой дозе значительно понизился (P<0.05). В группе NAC E2F1 значительно понизился (P<0.05), E2F2 немного снизился; в группах с низкой, средней и высокой дозами Qin Jing Pian уровни E2F1 и E2F2 значительно снизились (P<0.05); по сравнению с NAC, CDK4 в низкой дозе Qin Jing Pian слегка вырос, а в высокой дозе значительно снизился (P<0.05), E2F1 значительно уменьшился в высокой дозе (P<0.05), а E2F2 везде значительно снизился (P<0.05). В опытах на животных по сравнению с молодой группой уровень CDK4 значительно снизился (P<0.05) в модели, E2F1 и E2F2 слегка повысились; по сравнению с моделью, в группах пропионата тестостерона и низкой дозы Qin Jing Pian CDK4 значительно снизился (P<0.05), а в средней и высокой дозах Qin Jing Pian значительно повысился, при этом средняя доза имела статистически значимые различия (P<0.05); E2F1 значительно снизился (P<0.05), E2F2 слегка повысился; по сравнению с NAC, выраженность CDK4 значительно повысилась при средних и высоких дозах Qin Jing Pian (P<0.05), при средней дозе значимо увеличился белок E2F1 (P<0.05), а E2F2 снизился во всех группах Qin Jing Pian. Вывод: Qin Jing Pian улучшает процесс старения клеток Leydig и тканей яичек, повышая экспрессию CDK4 и подавляя уровни E2F1 и E2F2.

Qin Jing Pian, естественное старение, клетки интерстиция яичек, циклин-зависимая киназа 4 / фактор транскрипции E2F (CDK4/E2F)