Цель исследования - выяснить, может ли настой Хуанлянь Цзедутан через регуляцию экспрессии нейтрофильных хемокинов в экзосомах подавлять инфильтрацию нейтрофилов в мозг у мышей с окклюзией средней мозговой артерии (MCAO) и таким образом достигать терапевтического эффекта. Методика: 130 самцов SPF уровня C57BL/6J случайным образом разделены на 4 группы: группа ложной операции, группа модели MCAO, группа настой Хуанлянь Цзедутан (6 г/кг) и группа Цзиньнадо (21,6 мг/кг), при этом группа Цзиньнадо включала 10 мышей, а остальные 3 группы по 40 мышей. Мышам групп настоя Хуанлянь Цзедутан и Цзиньнадо ежедневно орально вводили соответствующие препараты в объеме 0,15 мл/10 г на протяжении 7 дней, группы ложной операции и модели получали физиологический раствор в том же объеме и способом. Спустя 7 дней проводили операцию окклюзии средней мозговой артерии, перевязывали дистальный и проксимальный концы общей сонной артерии справа, делали небольшой разрез между перевязками и вводили покрытую силиконовым слоем мононить с круглым концом в просвет для блокировки артерии, нить оставляли на 1 час для создания модели очаговой ишемии мозга. Через 24 часа после моделирования проводили оценку неврологических нарушений по шкале Лонга, определяли объем инфаркта мозга методом окрашивания TTC, исследовали мозговой кровоток с помощью лазерной допплеровской спектроскопии, изучали патологические изменения ткани мозга с помощью гематоксилин-эозинового (HE) и нигрозинового окрашивания, выделяли экзосомы из плазмы и мозговой ткани методом ультрацентрифугирования и фракционировали по размеру; проводили идентификацию экзосом с помощью трансмиссионной электронной микроскопии (TEM), динамического светорассеяния и вестерн-блоттинга. Для длинноцепочечной РНК экзосом строили библиотеку и выполняли секвенирование, с помощью количественной ПЦР в реальном времени (Real-time PCR) определяли экспрессию мРНК провоспалительных и нейтрофильных хемокинов в экзосомах плазмы и мозга, при помощи иммуноферментного анализа (ELISA) измеряли экспрессию соответствующих белков, а также проводили иммуноцитохимическое выявление миелопероксидазы (MPO) на нейтрофилах мозга. Результаты: по сравнению с группой ложной операции в группе модели достоверно снижены баллы неврологических функций (P<0.01), выраженный инфаркт мозга (P<0.01), значительное уменьшение мозгового кровотока (P<0.01), наблюдался очаг некроза, существенно уменьшилось количество тел Ниссля (P<0.01), экспрессия мРНК IL-1β, MPO, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL10, CCL2 и CCL3 в экзосомах плазмы и мозга значительно возросла (P<0.05, P<0.01), белковый уровень IL-1β, MPO, CXCL2 и CXCL10 в экзосомах мозга значительно увеличился (P<0.05, P<0.01), показатель положительной экспрессии MPO и средняя оптическая плотность в мозге значительно повысились (P<0.01). По сравнению с группой модели, у мышей групп настоя Хуанлянь Цзедутан и Цзиньнадо отмечено значительное повышение неврологических баллов (P<0.05), выраженное снижение объема инфаркта (P<0.01), значительное восстановление мозгового кровотока (P<0.01), уменьшение числа некротических клеток и значительное увеличение тел Ниссля (P<0.01), в группе Хуанлянь Цзедутан значительно снижена экспрессия мРНК перечисленных факторов в экзосомах плазмы и мозга (P<0.05, P<0.01), уменьшен белковый уровень в экзосомах мозга и значительно снижена положительная экспрессия MPO и оптическая плотность (P<0.01). Заключение: настой Хуанлянь Цзедутан эффективно регулирует экспрессию нейтрофильных хемокинов в экзосомах плазмы и мозга мышей с MCAO, тем самым уменьшая инфильтрацию нейтрофилов в мозг и обеспечивая терапевтический эффект.

Настой Хуанлянь Цзедутан;ишемический инсульт;экзосомы;хемокины;инфильтрация нейтрофилов