Цель исследования заключалась в изучении регулирующего действия рецепта Хуанлян цзи ду тан, представляющего метод охлаждения и детоксикации, на миграцию иммунных клеток, защиту гематоэнцефалического барьера и восстановление функций клеток в модели ишемического инсульта. Методом моделировали ишемический инсульт у мышей с помощью временной окклюзии средней мозговой артерии (tMCAO), оценивали мозговой кровоток и неврологические функции с помощью лазерной спекл-интерферометрии и шкалы неврологических оценок. Патологическое повреждение мозговой ткани оценивали с помощью окрашивания гематоксилином и эозином (HE) и методом Нисля (Nissl). Мышей разделили на группу операции-шунта, модельную группу, группу Хуанлян цзи ду тан и группу экстракта листьев гинкго билоба. После недели адаптации начинали пероральное введение: операции-шунта и модельной группе вводили физиологический раствор, группе Хуанлян - по 1,82 г/кг, группе гинкго - по 0,432 г/кг ежедневно в течение 5 дней, на 6-й день после последнего введения выполняли моделирование tMCAO. Для мозга и периферических иммунных клеток провели одноклеточное РНК-секвенирование, распределение клеток анализировали методом UMAP и показателем отношения шансов (OR), проводили дифференциальный экспресс-анализ для оценки влияния Хуанлян цзи ду тан на эндотелиальные клетки, перициты и макрофаги, а также использовали инструменты CellChat и decoupler для анализа клеточной коммуникации и регуляции транскрипционных факторов. Для проверки экспрессии мРНК и белков использовали количественную ПЦР в реальном времени и метод иммуноферментного анализа (ELISA). Результаты В сравнении с группой операции-шунта модельная группа показала значительное повышение неврологических баллов (P<0,01) и значительное снижение кровотока (P<0,01), а также нарушение кортикальной структуры, усиление вакуолизации тел клеток и увеличение количества телец Нисля; по сравнению с модельной группой, группы Хуанлян и гинкго показали значительное снижение неврологических баллов (P<0,01) и улучшение кровотока (P<0,01), улучшение нарушений кортикальной структуры, уменьшение вакуолизации и снижение количества телец Нисля. Одноклеточные данные показали, что Хуанлян цзи ду тан защищает эндотелиальные клетки и перициты от уменьшения численности, восстанавливает функциональные гены эндотелиальных клеток и перицитов (такие как PECAM1, NOS3), а также снижает экспрессию хемокинов и адгезивных факторов (CCL2, CXCL2); для макрофагов Хуанлян уменьшает их хемотаксическую миграцию в ЦНС, снижает экспрессию их хемокиновых рецепторов и воспалительных факторов (IL-6, CCR2, CXCR2). Анализ клеточной коммуникации выявил, что Хуанлян снижает повреждение перицитов и эндотелия, снижает их притяжение к макрофагам, уменьшает взаимодействия лиганд-рецептор для хемокиновых сигнальных путей CCL, CXCL, CSF3 между перицитами и макрофагами, эндотелием и макрофагами, предотвращая вторичное повреждение. В сравнении с группой операции-шунта в модельной группе значительно повышалась экспрессия мРНК IL-1β, IL-6, фактора некроза опухоли α (TNF-α), CCL2, CXCL2, CSF3 (P<0,01), а также значительно снижалась экспрессия мРНК функциональных генов эндотелиальных клеток и перицитов (RGS5, PECAM1, VEGFB, NOS3) (P<0,01); по сравнению с модельной группой, у групп Хуанлян и гинкго уровень мРНК воспалительных молекул значительно снижался (P<0,01), а уровни мРНК функциональных генов значительно повышались (P<0,01). На белковом уровне в модельной группе выраженность IL-1β, IL-6 и TNF-α была значительно выше, чем в группе операции-шунта (P<0,01), в группах Хуанлян и гинкго уровень этих белков был значительно ниже по сравнению с модельной группой (P<0,01). Заключение Хуанлян цзи ду тан защищает эндотелиальные клетки и перициты при ишемическом инсульте, снижает нейрональное повреждение, подавляет взаимодействие с макрофагами и уменьшает вторичное повреждение ЦНС.

Хуанлян цзи ду тан; ишемический инсульт; одноклеточный транскриптом; центрально-периферическое взаимодействие