Цель исследования — выяснить, может ли раствор Хуанльянь Цзеду Тан и его основные активные компоненты (генинопеозид, баикалин и берберин) подавлять воспалительный ответ клеток BV2 под воздействием липополисахарида (LPS) через сигнальный путь белка высокой подвижности B1 (HMGB1)/толл-подобного рецептора 4 (TLR4)/ядерного фактора транскрипции-κB (NF-κB), а также подробно исследовать различия в эффективности между тремя монокомпонентами, их комбинированным препаратом и комплексным составом Хуанльянь Цзеду Тан при равных соотношениях содержания активных веществ. Методика: в исследовании использовались микроглиальные клетки BV2. Для оценки влияния различных концентраций диметилсульфоксида (DMSO) (0,8 %, 0,4 %, 0,2 %, 0,1 % и 0,05 %) на жизнеспособность клеток применяли тест CCK-8. Влияние различных концентраций раствора Хуанльянь Цзеду Тан (200, 100, 50, 25, 12,5 и 6,25 мг/л) на состояние роста клеток контролировали с помощью системы Incucyte, определение содержания оксида азота (NO) использовали для выявления оптимальной дозы. Содержание генинопеозида, баикалина и берберина в образцах определяли методом ВЭЖХ (HPLC), и в дальнейшем формировали экспериментальные группы в соответствии с соотношением содержания. Тест CCK-8 применяли для анализа влияния препаратов на жизнеспособность клеток, количественное определение воспалительных факторов (ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-6 и ИЛ-10) проводили методом иммуноферментного анализа (ELISA). Влияние препаратов на поляризацию клеток BV2 по фенотипу M1 оценивали методом проточной цитометрии, уровни экспрессии связанных с HMGB1, TLR4 и NF-κB белков измеряли методом вестерн-блоттинга. Результаты: по сравнению с контролем, DMSO концентрацией до 0,2 % не влиял на жизнеспособность клеток в течение 48 ч (P>0,05). Под воздействием 200 мг/л раствора Хуанльянь Цзеду Тан клетки достигали плато роста через 24 ч. При стимуляции 2 мг/л LPS данная концентрация раствора лучше снижала выделение NO, при этом предварительное введение лекарства за 6 ч имело более выраженный эффект ингибирования NO, чем прямое введение. Результаты HPLC показали, что в 1 мг лиофилизата раствора содержится около 24 мкг генинопеозида, 15 мкг баикалина и 30 мкг берберина. В дальнейшем были сформированы экспериментальные группы: контроль, 2 мг/л LPS, 200 мг/л раствора, смесь монокомпонентов, 4,8 мг/л генинопеозида, 3 мг/л баикалина, 6 мг/л берберина. Смесь монокомпонентов представляла собой комбинированный раствор трех активных веществ. Ни LPS, ни раствор, ни активные компоненты не влияли на жизнеспособность клеток по сравнению с контролем. В группе LPS наблюдалось значительное повышение уровней воспалительных факторов TNF-α, IL-1β, IL-6 и IL-10 (P<0,01) в культуральной жидкости по сравнению с контролем. Раствор и активные компоненты значительно понижали уровни про-воспалительных факторов TNF-α, IL-1β, IL-6 (P<0,05, P<0,01) и повышали уровень противовоспалительного IL-10 (P<0,01), при этом смесь монокомпонентов имела лучший противовоспалительный эффект (P<0,05, P<0,01). Уровень клеток BV2 с фенотипом M1 (CD80+CD86+) значительно вырос в группе LPS (P<0,01), а раствор и активные компоненты эффективно подавляли этот процесс (P<0,05, P<0,01), с наилучшим эффектом у смеси монокомпонентов (P<0,05, P<0,01). Экспрессия белков HMGB1, TLR4 и NF-κB возросла в группе LPS (P<0,01), но значительно снизилась при лечении раствором и активными компонентами (P<0,05, P<0,01), при этом смесь монокомпонентов показала наибольшую эффективность (P<0,05, P<0,01). Заключение: раствор Хуанльянь Цзеду Тан и его основные активные компоненты (генинопеозид, баикалин и берберин) способны подавлять воспалительный ответ клеток BV2, вызванный LPS, при этом смесь трех активных компонентов демонстрирует наилучший противовоспалительный эффект, значительно снижая поляризацию M1 через сигнальный путь HMGB1/TLR4/NF-κB.

Хуанльянь Цзеду Тан; HPLC; микроглия BV2; поляризация типа M1; белок высокой подвижности B1 (HMGB1) / толл-подобный рецептор 4 (TLR4) / транскрипционный фактор NF-κB