Цель исследования — изучить механизм действия препарата Ци Фу Ли Чжун Тан, который восстанавливает функцию кишечного слизистого барьера при язвенном колите (UC) путем регуляции сигнального пути миозин-легкой цепи киназы (MLCK) / фосфорилированного миозин-легкой цепи (p-MLC). Методика: моделирование UC с недостаточностью ян селезенки и почек у крыс и моделирование повреждения кишечного барьера in vitro. В организме животных оценивали массу тела, индекс активности заболевания (DAI) и патологию толстой кишки; методом иммуноферментного анализа (ELISA) определяли уровень фактора некроза опухоли-α (TNF-α), интерлейкина-1β (IL-1β), миелопероксидазы (MPO). С помощью трансмиссионной электронной микроскопии (TEM) изучали морфологию и структуру плотных контактов (TJ) в толстой кишке крыс. In vitro использовали циклический пептид фалоидина для изучения строения F-актина в клеточной линии человеческой колоректальной аденокарциномы Caco-2. Сочетая in vivo и in vitro исследования, применяли иммуногистохимию (IHC), иммунофлуоресценцию (IF) и вестерн-блотинг для определения экспрессии и фосфорилирования ключевых белков TJ (ZO-1, Occludin, Claudin-1) и сигнального пути MLCK/p-MLC. Результаты показали, что в группе моделирования по сравнению с нормальной группой масса тела значительно снижена, баллы DAI и патоморфология значительно повышены (P<0,01); уровни TNF-α, IL-1β и MPO в ткани толстой кишки значительно увеличены (P<0,01); структура TJ разрушена, экспрессия ZO-1, Occludin и Claudin-1 значительно снижена (P<0,05, P<0,01); уровни белков MLC, MLCK, p-MLC и p-MLCK значительно увеличены (P<0,01). В группах, получавших Ци Фу Ли Чжун Тан в разных дозах, по сравнению с модельной группой отмечено увеличение массы тела, снижение баллов DAI и патоморфологии (P<0,05, P<0,01); уровни MPO, TNF-α и IL-1β существенно снижены (P<0,05, P<0,01); в группе Ци Фу Ли Чжун Тан + ингибитор экспрессия TJ-белков ZO-1, Occludin и Claudin-1 значительно повышена (P<0,01), а уровни MLC, MLCK, p-MLC и p-MLCK значительно снижены (P<0,01). In vitro при воздействии TNF-α наблюдалась деструктуризация цитоскелета, снижение флуоресцентного сигнала ZO-1, Occludin и Claudin-1, повышение уровней MLC, MLCK, p-MLC и p-MLCK (P<0,01). По сравнению с группой TNF-α добавление Ци Фу Ли Чжун Тан + ингибитора восстанавливало упорядоченность цитоскелета F-актина, экспрессию и локализацию TJ-белков, а уровни белков MLC, MLCK, p-MLC и p-MLCK снижались значительно (P<0,01). Заключение: Ци Фу Ли Чжун Тан может улучшать UC путем подавления сигнального пути MLCK/p-MLC, стабилизации структуры TJ и восстановления целостности кишечного барьера.

Язвенный колит; Ци Фу Ли Чжун Тан; кишечный барьер; плотные контакты; миозин-легкая цепь киназы (MLCK)/фосфорилирование миозин-легкой цепи (p-MLC)