Целью исследования было использование протеомных технологий для изучения механизма различий эффективности противолечебного средства Ци Цзяо Жоу Гань на различных стадиях лечения печеночного фиброза. Модель стадийного печеночного фиброза у крыс была создана путем подкожного введения четыреххлористого углерода (CCl₄) и оливкового масла. 104 крысы SD были случайным образом разделены на 13 групп: нормальная группа (Control), модельные группы на 2, 4, 6, 8 недель (Model-2W, 4W, 6W, 8W), группы лечения Ци Цзяо Жоу Гань на 2, 4, 6, 8 недель (QRF-2W, 4W, 6W, 8W), группы лечения комплексными мягкими таблетками Фуфан Бэй Цзяо на 2, 4, 6, 8 недель (FBR-2W, 4W, 6W, 8W). После двухнедельного лекарственного вмешательства собирали ткани печени и образцы крови из брюшной аорты крыс для анализа. Использовали окрашивание гематоксилином-эозином (HE), методом Массон (Masson), Sirius Red (PSR) для наблюдения патологического повреждения печени и отложения коллагеновых волокон; иммуногистохимическое окрашивание (IHC) для определения маркеров фиброза печени. Автоматический биохимический анализатор использовали для определения показателей функции печени в сыворотке; метод иммуноферментного анализа (ELISA) для анализа уровней маркеров печеночного фиброза. Ткани печени из группы контроля, модельных групп и групп QRF на различных стадиях были проанализированы с помощью немаркированного количественного протеомного анализа для выявления дифференциальных белков, которые подтверждались методом вестерн-блоттинга для ключевых белков; в конце проведен биоинформатический анализ дифференциальных белков. Результаты: (1) Модель стадийного печеночного фиброза у крыс, созданная с помощью CCl₄ и оливкового масла, показала по патологии на 2, 4, 6, 8 неделе соответствие стадиям F1, F2, F3, F4 по шкале Metavir; по сравнению с контрольной группой в модельных группах заметно повысилась экспрессия белков α-гладкомышечного актина (α-SMA) и коллагена I типа (Collagen Ⅰ) (P<0,05), а также значительно повысились показатели функции печени в сыворотке: аланинаминотрансфераза (ALT), аспартатаминотрансфераза (AST), щелочная фосфатаза (ALP), прямой билирубин (DBIL), общий билирубин (TBil) (P<0,01). Уровни маркеров фиброза в сыворотке: проколаген III типа (PⅢP), коллаген IV типа (Ⅳ-C), гиалуроновая кислота (HA), ламинин (LN) также значительно возросли (P<0,05, P<0,01). Модель стадийного фиброза печени была успешно создана. (2) По сравнению с модельными группами в группах лечения на тех же временных точках наблюдалось уменьшение баллонных изменений гепатоцитов, более упорядоченное расположение гепатоцитов и снижение инфильтрации воспалительных клеток; синий цвет коллагеновых волокон заметно стал более тонким, уменьшилось расстояние между волокнами, площадь коллагеновых волокон и площадь окраски PSR уменьшились (P<0,05). Площадь положительного экспрессирования α-SMA и Collagen Ⅰ значительно уменьшилась (P<0,05), уровни ALT, AST, ALP, DBIL, TBil и маркеров фиброза PⅢP, Ⅳ-C, HA, LN значительно снизились (P<0,05, P<0,01). Улучшение показателей было наиболее выраженным на стадии F3 (P<0,01). (3) Протеомные данные показали, что 165 дифференциальных белков демонстрировали тенденцию к регуляции между четырьмя модельными группами и контрольной группой, а также между группой QRF и модельной группой; уровни NQO1, MAPK1, Arg1, GSTA1, выявленные методом вестерн-блоттинга, соответствовали результатам протеомики. Биоинформатический анализ показал, что 165 дифференциальных белков обогащены в нескольких сигнальных путях, включая метаболизм лекарств — цитохром Р450, биосинтез аргинина и сигнальный путь PPAR, что связано с печеночным фиброзом. Это указывает на то, что Ци Цзяо Жоу Гань может оказывать фазозависимое регулирующее действие на печеночный фиброз путем воздействия на вышеуказанные пути. Результаты показывают, что препарат, возможно, регулирует печеночный фиброз через пути метаболизма лекарств — цитохром Р450, биосинтез аргинина и сигнальный путь PPAR.

протеомика; Ци Цзяо Жоу Гань; печеночный фиброз; модель стадий; фазозависимая регуляция