Целью исследования было изучение молекулярного механизма, посредством которого даньфеновая кислота B (SalB) ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) немелкоклеточного рака легкого (NSCLC) через понижение экспрессии фермента фосфорибозиламин-имидазолкарбоксилазы/сукцинимидсинтетазы (PAICS). В качестве моделей использовали клетки NSCLC A549 и нормальные дыхательные эпителиальные клетки (BEAS-2B). Активность клеток оценивали методом CCK-8 после обработки SalB в концентрациях 0, 50, 100, 200, 300, 400, 500 мкмоль/л в течение 24 и 48 часов для определения эффективной и безопасной дозы. Влияние SalB на пролиферацию, клеточный цикл и апоптоз клеток A549 изучали с помощью окрашивания EdU и проточной цитометрии. Эффект на миграцию и инвазию клеток определяли с помощью тестов ран и Transwell. Геномный анализ и биоинформатический анализ выявили дифференциально экспрессируемые гены и функциональное обогащение. Молекулярное докирование предсказало связывание SalB с PAICS, а тепловая стабильность белка PAICS оценивалась тестом CETSA. Экспрессия PAICS и EMT-связанных белков (E-кадгерин, N-кадгерин, виментин, Snail, Slug) анализировалась вестерн-блотом. Функциональные эксперименты восстановления проводили с помощью сверхэкспрессии PAICS путем трансфекции плазмидой. По сравнению с контролем SalB дизависимым образом ингибировал жизнеспособность клеток A549 (P<0,05). Эффективная концентрация (≤300 мкмоль/л) SalB не оказывала значимого ингибирующего действия на пролиферацию BEAS-2B. В этом диапазоне SalB значительно подавлял пролиферацию, миграцию и инвазию клеток A549, вызывал блокаду клеточного цикла в фазе G0/G1 и апоптоз (P<0,05). Транскриптомный анализ показал значительное снижение экспрессии PAICS, обогащенной функциями, связанными с пролиферацией и EMT. Биоинформатика выявила высокую экспрессию PAICS в аденокарциноме легкого и связывала ее с плохим прогнозом (P<0,01). Молекулярное докирование выявило сильное связывание SalB с PAICS (энергия связывания -9,1 ккал/моль). Тест CETSA показал значительное повышение термостабильности белка PAICS под действием SalB (P<0,05). Вестерн-блот показал дозозависимое ингибирование PAICS и повышение E-кадгерина, снижение N-кадгерина, виментина, Snail и Slug (P<0,05). Функциональные эксперименты восстановления показали, что сверхэкспрессия PAICS значительно усиливала пролиферацию, миграцию и инвазию клеток A549, способствовала прогрессу клеточного цикла и подавляла апоптоз (P<0,05). Кроме того, сверхэкспрессия PAICS частично обращала ингибирующий эффект SalB на злокачественные фенотипы и EMT-ассоциированные белки (N-кадгерин, виментин, Snail, Slug), снижая при этом экспрессию E-кадгерина (P<0,05, P<0,01), что указывает на PAICS как ключевую функциональную мишень антиопухолевого действия SalB. Заключение: SalB эффективно ингибирует EMT и прогресс клеточного цикла в клетках A549 через подавление экспрессии PAICS, проявляя антинемелкоклеточный эффект. Исследование выявило PAICS как ключевую функциональную мишень регуляции EMT SalB и предоставило экспериментальную основу для использования SalB в качестве потенциального препарата для подавления метастазов NSCLC.

немелкоклеточный рак легкого; даньфеновая кислота B; фосфорибозиламин-имидазолкарбоксилаза; эпителиально-мезенхимальный переход; миграция и инвазия